Горький вкус во рту: Горечь во рту – причины возникновения и их лечение в Екатеринбурге

Содержание

Почему возникает горечь во рту? Рекомендации при изжоге

14.04.2021

Горечь во рту — это симптом, волнующий очень многих людей. И практически на 100 процентов все люди с симптомом горечи во рту уверены, что речь идет о желчи и желчном пузыре. Давайте разбираться.

Какой частью языка мы чувствуем горечь? Мы чувствуем горечь сосочками на языке, обычно эта задняя стенка языка, то есть это корень языка. Выброс желчи к горечи во рту не имеет абсолютно никакого отношения. Желчь выбрасывается в 12-перстную кишку, а дальше идет вниз по кишечнику, и наш стул окрашен в коричневый цвет, благодаря именно пигментам желчи. Желчь никак не может попасть к нам в рот.

Поэтому желчный пузырь и печень, и вообще желчь, в принципе, к горечи никакого отношения не имеют, а чаще всего подобные ощущения связаны с воздействием соляной кислоты из желудка на стенки пищевода. Почему так происходит?

Всем известно, что в желудке содержится соляная кислота. В идеале соляная кислота должна находиться только в желудке и в пищевод забрасываться не должна. Для этого внизу пищевода есть сфинктер — это мышечное кольцо. Он все время закрыт, открывается только когда по пищеводу проходит пища, пропускает пищу в желудок, затем опять закрывается и обратного хода давать не должен. Бывает, что он не закрывается или закрывается плохо. Кислота из желудка попадает обратно в пищевод и обжигает его. Пищевод не привык к воздействию кислоты, ведь желудок защищен от кислоты, а пищевод нет. Поэтому пищевод тут же посылает сигнал в мозг, а мозг в ответ на этот сигнал посылает сигнал в слюнные железы, чтобы они выделяли очень щелочную слюну. Эта щелочная слюна при глотании помогает погасить кислоту, которая раздражает пищевод. И вот эта щелочная слюна обладает очень горьким привкусом.

Горький вкус во рту — это вкус щелочной слюны, которая вырабатывается в ответ на ожог пищевода. Болезнь, которая может сопровождаться привкусом горечи, называется гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь, или по-народному изжога.

Чего нельзя людям, которые столкнулись с изжогой (горечью во рту)?

Для того, чтобы не расслаблялся этот сфинктер между желудком и пищеводом, следует соблюдать некоторые правила. Во-первых, категорически не курить. Во-вторых, избегать кофеиносодержащие продукты. Это может быть кофе, шоколад, кола, какао и так далее. Следующий пункт — это мята. Нужно избегать всех продуктов, содержащих мяту. Это жвачки, конфеты, освежители дыхания мятные, мятные чаи. Необходимо исключить лук, чеснок в любом виде: жареный, пареный, неважно, любой лук и чеснок, а также жирную, жареную пищу. А также после еды два-три часа не следует принимать горизонтального положения.

Но вы должны понимать, что все это поможет облегчить симптомы изжоги и вы будете меньше ощущать чувство горечи, но это не избавит вас от причин их возникновения, поэтому дополнительно нужно обязательно обратиться за профессиональной медицинской помощью. При первых симптомах следует обратиться к врачу и сделать обследование – гастроскопию, чтобы врач определил и помог устранить причину вашей изжоги. Это может быть как и грыжа пищеводного отверстия диафрагмы, так и ожог, эрозии, язвы, может даже быть и так называемый пищевод Барретта (а это уже предраковое заболевание).

Навигация по записям

Причины и средства от горечи во рту при беременности • musanews

Часто бывает, чтобы предупредить горький рот при беременности Причиной номер один является прогестерон, женский гормон, уровень которого увеличивается после зачатия и который в некоторых случаях это может изменить чувство вкуса и запаха. Довольно часто во время вынашивания женщины ощущают неприятный привкус во рту, сопровождающийся плохим слюноотделением. полное отвращение к некоторым продуктам. Вот список продуктов, на которые следует обратить внимание, если вы беременны!

Горький рот при беременности: что это такое?

Если вы беременны и слышите продолжение неприятный привкус во ртуили даже почувствовать горечь и сухость во рту характеризуется кислый вкус, вы должны знать, что это состояние полностью нормальное. Есть горький рот беременная

на самом деле, это очень часто. Это заболевание, которое может зависеть от нескольких факторов, но остается абсолютно безвредным для здоровья матери и ребенка. Большинство беременных женщин чувствуют горечь во рту, особенно по утрам, который превращается в металлический привкус во рту в разное время суток. Посмотрим, что за основные причины и средства правовой защиты более эффективно.

Прогестерон, заболевания печени и горечь во рту при беременности

Одна из первых вещей, которые приходят в голову, когда мы беременны и чувствуем горький рот здоровье печень. Как уже было сказано, главное лицо, ответственное за горькая беременность это прогестерон, гормон, который играет одну из основных ролей во время беременности, то есть создает идеальную среду для развития и развития эмбриона. Именно он в определенных случаях вызывает ‘

обострение вкуса и запаха дающее ощущение горького и сухого во рту. Даже в тех случаях, когда женщинам удается не воспринимать странный привкус во ртуоднако они претерпевают изменение в своем восприятии, становясь более чувствительными к вкусам и запахам.



горькая беременность: симптомы и причины© GettyImages

Дисгевзия: осложнение горького рта

Одна из сложностей горький рот при беременности является дисгевзия, стойкое расстройство, которое включает искажение или ослабление чувство вкуса во рту. Это нарушение или снижение способности воспринимать и различать ароматы — очень частое проявление во время беременности. L ‘изменение вкуса это может раздражать гораздо больше, чем горький рот при беременности.
Часто бывает, что беременная женщина предпочитает не есть и не пить те продукты и напитки, которые раньше были очень кстати. В то же время, случается, что он чувствует желание новых и разных вкусов или есть со вкусом продукты, от которых раньше полностью отказывались. Это недомогание также может быть связано с

тошнота по утрам, один из самых частых симптомов беременности.

— Рекламное объявление —

— Рекламное объявление —



Металлик и горечь во рту: симптомы, причины и лечение

Во время беременности часто можно услышать привкус металла во рту, часто ассоциируется с железный ароматизатор или крови. THEl железный аромат это вызвано эстрогеном, но это также может быть связано с определенным состоянием задержка воды.
Кроме того, это расстройство может лежать в основе ощущения

рот замешан, сухость в горле и комок в горле. Сухость в горле и рот замешан Помимо упомянутых, они также могут быть причиной плохой гигиены полости рта или инфекции дыхательных путей.

Когда вы чувствуете горький рот при беременности и не только в том, желудок и кишечник это два органа, которые следует исследовать, особенно если это ощущение не проходит и вы не беременны. Однако если вы беременны, горечь во рту является одним из наиболее распространенных симптомов и может возникать вместе с горький рот и белый язык. Покрытие языка белым налетом может быть вызвано, помимо гормонов, неправильным питанием, плохой гигиеной полости рта или патологией дыхательных путей. В редких случаях это состояние объясняется более серьезной патологией, например: опухоль во рту.
также горький рот и тошнота это раздражение, которое часто ощущается вместе.

Они тоже нередко появляются горький язык, горькая слюна e сухость и горечь во рту приписываемый им вызывать. Как мы уже говорили, ощущение горечи во рту носит гормональный характер.

 

горькая беременность: средства защиты© GettyImages

Горький рот при беременности: средства защиты

Что делать

  • Позаботьтесь о питании, выбирайте легкоусвояемые продукты, всегда следите за питательным балансом, распределяйте макроэлементы в различных приемах пищи.
  • Держите под контролем любые заболевания обмена веществ и пищеварительной системы.
  • Поддерживайте гигиену полости рта, чистя зубы после всех приемов пищи, используйте зубную нить и жидкость для полоскания рта.
  • Избегайте приема лекарств во время беременности, если это не предписано врачом.
  • Уменьшите уровень нервного стресса, который может повлиять на пищеварение или кислотность желудка.
  • Практика легкой двигательной активности, например йоги.

В дополнение ко всем только что упомянутым полезным привычкам, чтобы победить горечь во рту при беременности, можете добавить пол чайной ложки пищевой соды натрия на зубную щетку перед нанесением пасты. Пищевая сода, как и лимон, может облегчить пищеварение.
Una плохое пищеварение и гастроэзофагеальный рефлюкс могут быть другие причины горечи во рту.

горький привкус во рту при беременности — 24 рекомендаций на Babyblog.ru


В народе говорили: «Как нельзя испечь хлеба без муки, так и не вылечить человека без зверобоя».

С давних пор это уникальное лекарственное растение было знаменито своими противовоспалительными, болеутоляющими, вяжущими и ранозаживающими действиями. Его упоминали в каждом травнике и включали в лекарственные сборы от самых разных болезней. Фармакологические действия зверобоя проявляются также как диуретические, антисептические, спазмолитические.



Для применения в лечебных целях используют верхнюю часть зверобоя (верхние 15-20 см), содержащую аскорбиновую кислоту, каротин, эфирные масла, дубильные и смолистые вещества, а также флавоноиды. Сбор начинают в начале цветения или когда только начинают появляться бутоны. Период цветения зверобоя продолжается с июня по август. Предпочитает расти на открытых сухих склонах, в степи, на опушках лесов или среди кустарников.
Сушат траву под навесом или на чердаке, обязательно в тени! Можно подвешивать пучками, а можно разложить на ткани или картоне (полиэтилен использовать нельзя!).

НА РУСИ ПИЛИ НАСТОЙ ЗВЕРОБОЯ, ЧТОБЫ СОХРАНИТЬ ЗДОРОВЬЕ И БОДРОСТЬ, применяли так же при ушибах. Именно по этой причине настои из зверобоя рекомендовали тем людям, которые быстро уставали на изнурительной работе.

В армии настои и отвары из зверобоя давали солдатам, которые совершали длительные походы пешком.

Бросая веточки зверобоя в воду, которую набирали из не проверенных источников, люди избавлялись от вероятности заболеть дизентерией. Для удаления неприятного запаха изо рта зверобой жевали, но не дольше нескольких минут.

Современные доктора твердят, что отвары, настои и экстракты из зверобоя, ПРИ ПОПАДАНИИ В ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА ЗАПУСКАЮТ В НЕМ ЦЕЛУЮ ЦЕПОЧКУ ЖИЗНЕННО ВАЖНЫХ ПРОЦЕССОВ, НЕОБХОДИМЫХ ДЛЯ ПОДДЕРЖАНИЯ ЗДОРОВЬЯ. Некоторые из процессов невозможны без применения веществ, которые содержатся в зверобое.

Он лечит головную боль и улучшает процессы обмена.

Чай со зверобоем урегулирует работу желудка и кишечника, а так же стимулирует функцию внутренней секреции.

Химический состав включает в себя флавоноиды, эфирные масла, смолистые составы, дубильные вещества, следы алкалоидов, каротин, аскорбиновая и никотиновая кислоты, горькие экстрактивные вещества, фитонциды, микроэлементы (никель, молибден, марганец).

Зверобой — идеальное средство для укрепления нервной системы, является природным антидепрессантом.. В кризисных жизненных ситуациях полезно принимать от трех до шести чашек чая из зверобоя.

При чувствительности к смене погоды чаи из зверобоя поможет нормализовать вегетативные колебания. При гормонально обусловленных колебаниях настроения во время климакса также рекомендуется чай из зверобоя или из смеси в равных пропорциях зверобоя и шишек хмеля. Детям и взрослым, которые не могут сосредоточиться и сконцентрировать внимание, поможет чай из зверобоя и мелиссы. Эта смесь, приятная на вкус, является идеальным чаем к завтраку, перед занятиями или экзаменом.

Траву зверобоя применяют внутрь при хроническом гастрите, энтероколите, функциональной диарее, хроническом пиелонефрите, гломерулонефритах, циститах, и воспалениях предстательной железы, при артритах и радикулитах.

Очень эффективно помогает зверобой при язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки, язвенном колите, заболеваниях печени и желчного пузыря (дискенезиях желчного пузыря, холецистите, желчнокаменной болезни, остром и. хроническом гепатите.)

Им также лечат женские болезни: воспаление придатков, аменорее, обильных менструациях, а также аллергического диатеза у детей.

Корни растения используют при туберкулёзе костей и дизентерии.

Применяется он в виде отваров, настоев, настоек при астеническом состоянии, неврозах и неврастении, судорогах, головных болях и бессоннице, при малокровии и эндокардитах.

Наружно применяют при катаральной ангине, стоматитах, гингивитах, пародонтозе, ранах, трофических язвах, ожогах, простом остром вагините, гнойном среднем отите.

РЕЦЕПТЫ И РЕКОМЕНДАЦИИ:

• Зверобой прекрасно помогает при ушибах, для этого щепотку зверобоя травы прокипятить в 0.5 литрах воды. Остудите, на ночь накладывать чистую хлопчатобумажную салфетку на больное место. Сверху положите целлофан и утеплите теплым платком. Выздоровление наступит быстро.

• В сочетании с пустырником зверобой вылечивает сильный стресс, депрессию, и их последствия. Для этого пьют чай из зверобоя с медом.

• 1 ст ложку зверобоя (сухой травы) на один стакан кипятка. Настаивать пол часа, процедить. Используют при стоматитах, гингивитах, парадонтозе, а так же поласкать полость рта и горла.

• Залить 1 ст. ложку измельченного зверобоя стаканом кипятка, кипятить в течение 15 минут на медленном огне, процедить. Данный отвар пьют по 1/4 стакана 3 раза в день при лечении различных заболеваний желудочно-кишечного тракта.

• При язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, а также при стоматитах, ожогах, незаживающих длительное время ранах используют масло из зверобоя. Готовят его следующим образом: 20-25 гр. свежих цветков и листьев зверобоя заливают 200-250 гр. масла (лучше оливковым, но можно брать и подсолнечное, и льняное), и настаивают в теплом месте в течение 3-4 недель, иногда встряхивая. Затем настой процеживают через несколько слоев марли. Хранить настои нужно в темной емкости.

• Как вспомогательное средство при сердцебиении:
зверобой — 4 ст. л.,
тысячелистник — 2 ст. л.,
валериана — 2 ст. л.,
мелисса — 2 ст. л.
Чтобы приготовить этот настой, возьмите 1 ст. л. смеси и залейте ее 2 стаканами кипятка. Настаивайте 2-2,5 ч. Готовый настой процедите. Вот теперь его можно и принимать. Советуем вам делать это 1 раз в день, принимая по в количестве 1/2 стакана. Эффект целебного сбора со зверобоем повысится в том случае, если вы будете пить его мелкими глотками.

ВНИМАНИЕ! ЗВЕРОБОЙ ИМЕЕТ ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ!

— Он запрещен болеющим гипертонией и беременным.
— Слишком крепкий чай из зверобоя может вызывать боль в желудке.
— Не следует принимать зверобой длительное время — растение слаботоксичное. Длительное приминение может вызвать боль в печени, крапивницу и противный привкус во рту.
— Так же при длительном применении у мужчин могут возникнуть проблемы с потенцией, но при прекращении принятия травы потенция приходит в норму, в течении нескольких недель.
— Длительное употребление зверобоя так же приводит к повышению чувствительности человеческой кожи

Подавление горького вкуса при пероральном приеме тенофовира алафенамида

Резюме

Детям трудно глотать капсулы. Тем не менее, когда дети получают жидкие составы, они часто отказываются от пероральных препаратов из-за их сильной горечи. В настоящее время эффективные стратегии для определения методов, реагентов и инструментов для блокировки горечи остаются неуловимыми. Для конкретного препарата с горьким вкусом идентификация ответственных за горький вкус рецепторов и открытие антагонистов этих рецепторов может обеспечить метод блокирования воспринимаемой горечи.Мы идентифицировали соединение (6-метилфлавон), которое может блокировать реакции на сильно горький на вкус препарат против вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), тенофовир алафенамид (TAF), используя первичную культуру эпителиальных клеток вкусовых почек человека в качестве платформы для скрининга. В частности, TAS2R39 и TAS2R1 представляют собой основные вкусовые рецепторы 2 типа, отвечающие на TAF, наблюдаемые посредством гетерологичной экспрессии специфических рецепторов TAS2R в клетках HEK293. В этом анализе 6-метилфлавон блокировал ответы TAS2R39 на TAF.В органолептических испытаниях на людях 8 из 16 субъектов показали снижение воспринимаемой горечи TAF после предварительной обработки (или «предварительного ополаскивания») 6-метилфлавоном и смешивания 6-метилфлавона с TAF. Горечь была полностью и надежно заблокирована у двух из этих субъектов. Эти данные демонстрируют, что комбинированный подход скрининга на основе культуры вкусовых клеток человека, анализов, специфичных для рецепторов, и психофизического тестирования человека может успешно обнаруживать молекулы для блокирования воспринимаемой горечи фармацевтических препаратов, таких как TAF для лечения ВИЧ.Мы надеемся использовать блокаторы горького вкуса, чтобы улучшить соблюдение врачами этих жизненно важных лекарств.

ЗАЯВЛЕНИЕ О ЗНАЧИМОСТИ Идентификация небольшой молекулы, подавляющей горький вкус тенофовира алафенамида, может повысить соблюдение режима лечения детей с инфекциями, вызванными вирусом иммунодефицита человека.

Введение

Горький вкус эволюционировал, чтобы указать, когда вещества, отобранные перорально, содержат химические вещества, которых мы хотели бы избежать. Хотя мы можем научиться получать удовольствие от небольшой горечи в определенных продуктах, таких как кофе и пиво, горечь высокой интенсивности повсеместно вызывает отвращение и может вызывать тошноту (Peyrot des Gachons et al. , 2011). Обычные растительные алкалоиды часто имеют горький вкус, а в больших количествах могут быть токсичными или даже смертельными. Однако при низких уровнях многие из этих горьких раздражителей обладают лечебными свойствами, например, сердечные гликозиды. Точно так же большинство искусственных активных фармацевтических ингредиентов (АФИ), используемых для лечения заболеваний, также имеют горький вкус. Горечь АФИ приводит к проблемам с соблюдением режима перорального приема таких лекарств. Например, педиатрическая популяция часто чрезвычайно чувствительна к нежелательному вкусу лекарств, а треть детей с хроническими заболеваниями отказываются принимать лекарства из-за сильной горечи или других «плохих» ощущений, вызываемых АФИ (Venables et al., 2015).

Поскольку детям трудно глотать капсулы, жидкие составы, как следствие, проявляют горечь АФИ. В качестве примера опасных для жизни последствий приема лекарств с горьким вкусом дети с инфекциями, вызванными вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), должны постоянно принимать антиретровирусные препараты; в противном случае они дают возможность вирусу, который может привести к летальному исходу, мутировать и стать более трудным для лечения (Holkmann Olsen et al. , 2007; Nachega et al., 2011).Горечь лекарств является основной причиной того, что при лечении детей с ВИЧ-инфекцией «включается снова/выключается снова». Родители часто прибегают к сдерживанию и физическому принуждению детей к приему лекарства (Hammami et al., 2004). В некоторых случаях острая необходимость в постоянном медицинском соблюдении настолько важна, что предпринимаются желудочные процедуры, позволяющие вводить лекарства непосредственно в желудок через чрескожную эндоскопическую гастростому (Shingadia et al., 2000). Общей практикой поощрения детей к приему горьких на вкус лекарств является добавление ароматизирующих или подслащивающих соединений.Эта стратегия, однако, имеет ограничения и не всегда адекватно «маскирует» горечь. Поэтому крайне необходимы более эффективные подходы к блокированию горького вкуса и повышению соблюдения врачебных предписаний для постоянно разрабатываемых лекарств с горьким вкусом.

Горечь – самое сложное вкусовое качество с точки зрения «стимул-рецептор». Горький вкус опосредуется по крайней мере 25 рецепторами горького вкуса TAS2R (Bachmanov and Beauchamp, 2007). Эти рецепторы, связанные с G-белком, экспрессируются в клетках вкусовых рецепторов в ротовой полости и сигнализируют о горьком вкусе при попадании в рот (Bachmanov and Beauchamp, 2007).Нацеливание на эти рецепторы для разработки новых блокаторов горького вкуса вызывает растущий интерес как в академическом, так и в промышленном отношении (Adler et al., 2000; Chandrashekar et al., 2000; Matsunami et al., 2000). Сообщалось о нескольких блокаторах специфических горьких рецепторов (Slack et al., 2010; Greene et al., 2011; Pydi et al., 2014; Roland et al., 2014; Zhang et al., 2019). К сожалению, эффективность этих блокаторов для снижения восприятия горького вкуса ограничена. Частично это может быть связано со сложным взаимодействием горьких вкусовых стимулов и TAS2R.Одно горькое на вкус соединение может активировать один или несколько TAS2R (Meyerhof et al., 2010). Наоборот, рецептивное поле TAS2R может быть узко или очень широко настроено на многие соединения (Meyerhof et al. , 2010). Более того, существуют индивидуальные полиморфные различия в генах рецепторов горького вкуса и рецепторах, которые они кодируют; ярким примером является хорошо охарактеризованный рецептор горького вкуса TAS2R38 (Kim et al., 2003; Bufe et al., 2005). Лица, являющиеся носителями двух копий «чувствительного» гаплотипа PAV (пролин, аланин, валин в положениях 49, 262 и 296 соответственно), могут воспринимать фенилтиокарбамид и 6-н-пропилтиоурацил как сильно горькие.Напротив, люди, которые являются носителями двух копий «нечувствительного» гаплотипа AVI (аланин, валин, изолейцин в положениях 49, 262 и 296 соответственно), обычно не воспринимают фенилтиокарбамид и 6-н-пропилтиоурацил как сильно горькие, за исключением случаев, когда они очень горькие. высокие концентрации (Kim et al., 2003; Bufe et al., 2005).

Учитывая сложность взаимодействия между вкусовыми рецепторами типа 2 (TAS2R) и стимуляторами горького вкуса, такими как АФИ, мы пришли к выводу, что для развития специфического горького вкуса необходима характеристика взаимодействия целевого АФИ со всеми 25 рецепторами горького вкуса. блокираторы.Кроме того, использование культур клеток, происходящих из эпителия вкусовых почек человека (hTBEC), которые больше напоминают нативную физиологию вкусовых клеток человека in situ , могло бы стать идеальной платформой для скрининга химических библиотек на наличие модуляторов горького вкуса API (Ozdener et al., 2011). ).

В настоящей работе мы использовали стратегию объединения 1) скрининга на основе культуры клеток вкусовых почек человека, 2) отчетов об анализе рецепторов горького вкуса и 3) психофизического тестирования человеческого вкуса для выявления блокаторов вкуса сильно горького антидепрессанта. Соединение ВИЧ, тенофовир алафенамид (TAF) (Ray et al., 2016). Наша цель — уменьшить отвращение к лекарствам у детей и повысить приверженность их жизненно важному лечению. Следовательно, мы идентифицировали TAS2R39 как один из критических рецепторов для TAF и показали, что терпеноид 6-метилфлавон блокирует ответы TAS2R39 на TAF как на клеточном уровне, так и на уровне рецептора TAS2R. Кроме того, мы определили, что 6-метилфлавон надежно и почти полностью блокировал горечь, вызванную TAF, у подгруппы людей, которых мы тестировали.

Материалы и методы

hTBEC Платформенный скрининг фитохимических малых молекул.

Все исследования проводились в соответствии с принципами, изложенными в Хельсинкской декларации и одобренными Институциональным наблюдательным советом Пенсильванского университета (№ 821870). Субъекты предоставили письменное информированное согласие на формы, одобренные Институциональным наблюдательным советом, до сбора тканей вкусовых рецепторов человека.

Рост и анализ культивируемых hTBEC были оптимизированы по сравнению с предшествующей фундаментальной работой, в которой были изобретены эти культуры (Ozdener et al., 2011).hTBEC выращивали в модифицированной среде BronchiaLife (Lifeline Cell Technology, Frederick, MD) с ее набором добавок (точные концентрации не раскрываются Lifeline), 2,5% FBS и стандартными антибиотиками, смешанными 1:1 со средой Advanced MEM (Fisher Scientific/Invitrogen). /Gibco-BRL), дополненный стандартными антибиотиками и стандартной концентрацией добавки L-глютамина. Для усиления прикрепления hTBEC в стандартной культуре и в скрининговых анализах со средней пропускной способностью на основе 384-луночных планшетов использовали покрывающий белок внеклеточного матрикса раствор фибронектина (конечная концентрация 1 мкг/мл) и желатина (0.02% конечной концентрации). Эта специальная среда и раствор для покрытия внеклеточного матрикса улучшили рост и размножение hTBEC и повысили их полезность в экспериментах по прикладным наукам. Эти первичные клетки использовали между пассажами 3 и 9. Среднее время жизни первичной культуры hTBEC в наших руках составляет 10–12 пассажей. Клетки высевали по 2500 клеток на лунку в 384-луночный планшет, используемый для этой первичной культуры hTBEC. Культуры hTBEC, реагирующие на горький вкус, были выявлены в ходе фундаментальной работы, предшествовавшей этому проекту.Обнаружение основного нейротрансмиттера АТФ, секретируемого клетками вкусовых почек человека, анализировали с использованием внеклеточной люциферазы и люциферина (набор ENLITEN; Promega, Madison, WI). После стимуляции TAF (300 мкМ) с добавлением и без добавления малых испытуемых молекул в качестве потенциальных блокаторов горечи (тестовая концентрация 10 мкМ) при 45-минутной инкубации и в буфере для анализа, ингибирующем экто-НТФазы и экто-НДФазы, супернатанты смешивали с реагентами ENLITEN и измеряли биолюминесценцию в светоанализаторе BioTek Synergy.Во всех анализах применялся дизайн 384-луночных планшетов. CellTiterGLO (версия 2.0) использовали для определения того, являются ли какие-либо предполагаемые блокаторы горького вкуса цитотоксичными (что могло бы ложно снизить сигналы в анализах), и были проведены бесклеточные измерения предполагаемых блокаторов горького вкуса с помощью реагента ENLITEN, чтобы определить, являются ли какие-либо предполагаемые блокаторы горького вкуса цитотоксичными. ингибиторы фермента люциферазы. Проверка одной концентрации тестовой концентрации 10 мкМ была повторена для каждого предполагаемого блокатора горького вкуса, чтобы дополнительно подтвердить предполагаемый блокатор горького вкуса. В качестве последнего шага были проведены проверочные анализы на основе множественных кривых концентрация-реакция (CRC), чтобы продемонстрировать, что каждый предполагаемый блокатор горького вкуса имел отношение CRC при блокировании стимуляции платформы hTBEC с помощью TAF. На этом заключительном этапе были получены показатели активности (оценка IC 50 ) и эффективности (% ингибирования стимуляции TAF) для каждого предполагаемого блокатора горечи. С подмножеством предполагаемых блокаторов горького вкуса в качестве еще одного шага доказательства для проверки был проведен анализ кальция в клетках на основе Fluo-8/AM в режиме реального времени путем блокирования TAF-вызванных клеточных сигналов кальция, опосредованных ключевыми рецепторами TAS2R.В целом, из 2580 фитохимических малых молекул (а также небольшой коллекции растительных экстрактов, закупленных у TimTec, Ньюарк, Делавэр) было идентифицировано 30 предполагаемых блокаторов горечи (25 малых молекул и пять растительных экстрактов), подгруппа которых также были протестированы с помощью анализов на основе рецепторов и оценены в органолептических испытаниях на людях в качестве последующих этапов проверки.

Рецепторные анализы с использованием гетерологичных клеток HEK293.

Конструкции TAS2R человека готовили, как описано ранее (Wang et al., 2019). Функциональные анализы человеческих TAS2R проводили, как описано ранее (Wang et al., 2019). Вкратце, клетки эмбриональной почки человека 293 (PEAKrapid, CRL-2828; Американская коллекция типовых культур, Манассас, Вирджиния) высевали на 96-луночные планшеты с плотностью 25000 клеток на лунку и культивировали в среде Opti-MEM с 4% эмбрионального бычьего сыворотка. На следующий день клетки временно трансфицировали конструкцией TAS2R (0,1 мкг/лунку) вместе с конструкцией G-белка G α 16-gust44 (0,1 мкг/лунку) с помощью липофектамина 2000 (0,1 мкг/лунку).5 мкл/лунку). В качестве контролей использовали только G α 16-gust44 (имитация трансфекции). Примерно через 20–24 часа после трансфекции клетки промывали сбалансированным солевым раствором Хэнкса с добавлением 10 мМ HEPES, а затем загружали Fluo-4 в темноте в течение 1 часа. После инкубации клетки еще два раза промывали 10 мМ сбалансированным солевым раствором Хэнкса с добавкой HEPES, инкубировали в темноте еще 30 минут, а затем еще раз промывали аналитическим раствором перед проведением анализа с использованием ридера FlexStation III.Относительные единицы флуоресценции (возбуждение при 494 нм, испускание при 516 нм и автоматическое отключение при 515 нм) считывали каждые 2 секунды в течение 2 минут. Были зарегистрированы следы мобилизации кальция.

Изменения флуоресценции рассчитывали как пик флуоресценции минус базовая флуоресценция (Lei et al., 2015). Мобилизацию кальция количественно оценивали как процент изменения относительно исходного уровня. Каждая точка данных для гистограмм и ответов, зависящих от концентрации, была усреднена из трех повторов (среднее значение ± S.Д.). Кривые мобилизации кальция и гистограммы, а также графики, зависящие от концентрации, были сгенерированы с помощью GraphPad Prism 5. Для статистического анализа использовался дисперсионный анализ с помощью критерия множественных сравнений Даннета.

Методы сенсорного тестирования человека.

Все исследования проводились в соответствии с принципами, изложенными в Хельсинкской декларации и одобренными Институциональным наблюдательным советом Пенсильванского университета (разрешение № 701334). сенсорному тестированию вкуса.

В исследовании приняли участие шестнадцать здоровых взрослых (11 женщин, 5 мужчин; средний возраст = 42 года, S.D. = 15). Субъекты были набраны из числа сотрудников Центра химических ощущений Монелла и окружающего сообщества и оплачены за их время.

Чтобы определить, снижает ли 6-метилфлавон горечь TAF, испытуемые оценивали воспринимаемую горечь TAF с 6-метилфлавоном и без него в двух отдельных сеансах, каждый с повторением. Сеансы проводились с интервалом не менее 1 часа, чтобы предотвратить эффект переноса длительных ощущений от тестовых растворов.

Все растворы были приготовлены с использованием 1 % Tween 80 (Fisher Scientific), 5 % 75,5 % зернового спирта Everclear (местный магазин вин и спиртных напитков) и фильтрованной воды (система очистки воды Milli-Q), поскольку 6-метилфлавон не вода. Раствор TAF готовили, сначала растворяя TAF (Nanjing Bilatchem Industrial Co., Ltd.) и Tween 80 в фильтрованной воде, а затем добавляя зерновой спирт Everclear в последнюю очередь. Концентрация TAF составляла 0,5 мг/мл, что соответствует 0,84 мМ TAF (в пределах диапазона, который тестировали на клетках).Раствор 6-метилфлавона для предварительной промывки готовили, сначала растворяя Tween 80 в фильтрованной воде и добавляя зерновой спирт Everclear с 6-метилфлавоном (Fisher Scientific) в последнюю очередь. Смесь TAF и 6-метилфлавона готовили, сначала растворяя TAF с Tween 80 в фильтрованной воде и добавляя зерновой спирт Everclear с 6-метилфлавоном в последнюю очередь. Концентрация 6-метилфлавона в предварительном растворе и смеси составляла 1 мМ. Растворы готовили в день тестирования и хранили при комнатной температуре (около 23°С).

Каждый субъект был проинструктирован воздерживаться от курения, еды, жевания резинки и питья чего-либо, кроме воды, в течение 1 часа перед участием в каждом сеансе. В состоянии с 6-метилфлавоном испытуемые сначала предварительно полоскались им четыре раза и отхаркивались. Затем помещали в рот 10 мл раствора с ТАФ и 6-метилфлавоном на 5 секунд и отхаркивали. Сразу же после отхаркивания они оценивали воспринимаемую горечь по шкале с маркировкой (Green et al., 1996).В условиях без 6-метилфлавона испытуемые предварительно полоскались фильтрованной водой (система очистки воды Milli-Q) четыре раза, а затем помещали в рот 10 мл раствора TAF на 5 секунд и отхаркивали, а затем немедленно оценивали горечь. Субъекты выполнили каждое условие дважды с носовыми зажимами. Использование этого метода было обусловлено неизвестным кинетическим поведением 6-метилфлавона в ротовой полости. Использование предварительного ополаскивания и примеси в значительной степени, если не полностью, устранит потенциальное кинетическое влияние 6-метилфлавона на подавление горечи TAF.Будущие эксперименты с упрощенными режимами дозирования необходимы для субъектов, проявляющих чувствительность к 6-метилфлавону, чтобы определить, какая схема дозирования будет наиболее простой и эффективной для блокирования горечи TAF с использованием 6-метилфлавона.

Для контроля неустановленного нарушения вкуса мы также проверили, уменьшает ли 6-метилфлавон горечь феррохина, эффективного противомалярийного препарата. В исследовании приняли участие девять субъектов из первоначальных 16 (четыре женщины, пять мужчин; средний возраст = 42 года, стандартное отклонение = 12,5).Концентрация 6-метилфлавона составляла 1 мМ, как и в эксперименте с TAF. Феррохин вводили в дозе 1200 мг/200 мл. 6-метилфлавон растворяли в 5% 75,5% зернового спирта Everclear (местный магазин вин и спиртных напитков) и фильтрованной воде (система очистки воды Milli-Q), поскольку 6-метилфлавон не растворяется в воде. В отдельном стакане феррохин и 1% Tween 80 (Fisher Scientific) растворяли в 1% соляной кислоте (Sigma-Aldrich), приготовленной с использованием фильтрованной воды (Milli-Q Water Purification System).Затем к раствору феррохина медленно добавляли смесь 6-метилфлавона. Раствор феррохина без 6-метилфлавона был приготовлен путем растворения феррохина и 1% Tween 80 в 1% соляной кислоте, приготовленной с фильтрованной водой, с последующим медленным добавлением 5% 75,5% зернового спирта Everclear. Остальные процедуры были идентичны тем, которые использовались для тестирования эффективности 6-метилфлавона против TAF.

Результаты

Идентификация небольшой молекулы, которая блокирует реакцию культивируемых вкусовых клеток человека на TAF.

Для выявления предполагаемых блокаторов TAF мы сначала разработали и оптимизировали анализ активности с использованием первичной культуры hTBEC (Ozdener et al., 2011). Аспекты культуры hTBEC также были оптимизированы для использования в качестве платформы для скрининга со средней пропускной способностью (рис. 1А). В этом анализе мы измерили секрецию аденозинтрифосфата (АТФ) культивируемыми клетками в ответ на вкусовые раздражители. Предпосылкой для этого анализа является то, что клетки вкусовых почек секретируют АТФ в качестве основного нейротрансмиттера в ответ на раздражители горького вкуса (Finger et al., 2005). Как и ожидалось, эти первично культивируемые клетки hTBEC секретируют АТФ в ответ на TAF (рис. 1В). Мы проверили 2580 натуральных фитохимических веществ и растительных экстрактов, полученных от TimTec. В результате скрининга возник ряд предполагаемых совпадений, в том числе 6-метилфлавон среди небольшой панели дополнительных малых молекул флавоноидов, которые блокировали реакцию культивируемых первичных вкусовых клеток на TAF в зависимости от концентрации (рис. 1B; дополнительная таблица 1). Были проведены контрскрининги, чтобы убедиться, что предполагаемые блокаторы горечи не были цитотоксичными и что они не мешали репортерам и красителям на основе света.Блокада ответов TAF также повторялась в трех независимых экспериментах, последний из которых представлял собой анализ на основе CRC для определения относительной активности и эффективности предполагаемого блокатора горького вкуса. Эффективность ≤10 мкМ и эффективность ингибирования ≥50% были пороговыми показателями при скрининге hTBEC с TAF в качестве горького стимула. Обзор литературы показал, что структурно подобные соединения (например, 6-метоксифлавонон) являются блокаторами TAS2R39.

Рис. 1

Первичный скрининг вкусовых клеток человека привел к идентификации 6-метилфлавона как супрессора TAF-индуцированной активности вкусовых клеток. (A) Критический путь биоанализа в дизайне MTS для обнаружения горьких блокаторов. Показаны метрики отсечения для «выбора совпадений» после этапа MTS, этапов проверки и анализов счетчика. (B) Кривая концентрация-реакция для 6-метилфлавона при блокировании стимуляции TAF. TAF был горьким стимулом в анализе. IC 50 составляла примерно 5 мкМ для 6-метилфлавона, а эффективность ингибирования 6-метилфлавона составляла 90% или выше при 30 и/или 100 мкМ. Каждое соединение тестировали в трех повторностях на стадии MTS, а каждую концентрацию тестировали в четырех повторах на каждой последующей стадии.A.U.: условные единицы; LUC: люцифераза; МТС: досмотр средней пропускной способности.

TAF активирует ограниченное количество горьких рецепторов человека.

Сообщается, что TAF очень горький. Однако неизвестно, какой горький рецептор (рецепторы) опосредует его горечь. Чтобы ответить на этот вопрос, мы использовали стандартный анализ рецепторов горького вкуса, который связывает активацию рецептора с мобилизацией кальция, чтобы идентифицировать горький рецептор (рецепторы), ответственный за горький вкус TAF (Chandrashekar et al. , 2000; Мейерхоф и др., 2010). Каждый TAS2R экспрессировали индивидуально в гетерологичных клетках HEK293 вместе с связывающим G-белком G α 16-gust44 для изучения потенциальной стимуляции TAF каждого рецептора (Ueda et al., 2003; Lei et al., 2015; Wang et al. ., 2019). Для первоначальной характеристики две разные концентрации (0,1 и 1 мМ) TAF тестировали против всех 25 горьких рецепторов, которые были временно трансфицированы. Мобилизацию кальция измеряли с помощью считывающего устройства FlexStation III. Клетки, экспрессирующие TAS2R39 и TAS2R1, продемонстрировали устойчивый ответ на 1 мМ TAF.TAS2R8 и TAS2R14 также продемонстрировали заметные ответы на 1 мМ TAF (рис. 2, A и B). При более низкой концентрации (0,1 мМ) клетки, экспрессирующие TAS2R8 и TAS2R14, демонстрировали небольшой, но значительный ответ на TAF (рис. 2А). Чтобы дополнительно охарактеризовать реакцию этих четырех рецепторов на TAF, для всех четырех рецепторов были получены зависимые от концентрации кривые реакции. В соответствии с результатом, полученным нами выше, эти четыре рецептора реагируют на TAF в зависимости от концентрации (рис. 2С). Важно отметить, что TAS2R39, по-видимому, продемонстрировал наибольшую амплитуду отклика на TAF при самой высокой тестируемой концентрации (1 мМ).Эти данные свидетельствуют о том, что TAF может активировать ограниченное количество рецепторов горького вкуса.

Рис. 2.

TAF активирует ограниченное количество рецепторов горького вкуса. Клетки HEK293, трансфицированные человеческими TAS2R вместе с G α 16-gust44, анализировали на их ответы на 0,1 мМ (A, слева) и 1 мМ TAF (A, справа). Представлен количественный анализ ответов. Данные представляют собой процентное изменение (среднее значение ± стандартное отклонение) флуоресценции [пик относительных единиц флуоресценции ( RFU) − базовый уровень RFU, обозначенный Δ F ] от базового уровня флуоресценции (обозначенный F), усредненный из трех повторов ( n = 3).Эксперимент был повторен еще раз. (B) Репрезентативные следы мобилизации кальция TAS2R1-, TAS2R8-, TAS2R14- и TAS2R39-экспрессирующих клеток до 1 мМ TAF (черные следы). Псевдотрансфицированные клетки (только G α 16-gust44) использовали в качестве контроля (серый след). (C) TAF активирует TAS2R1, TAS2R8, TAS2R14 и TAS2R39 в зависимости от концентрации. Каждую концентрацию тестировали трижды ( n = 3). Для статистического анализа использовали дисперсионный анализ с помощью критерия множественных сравнений Даннета.*** Р < 0,001.

6-метилфлавон Блокирует ответ TAS2R39 на TAF.

Наш скрининг с использованием культивируемых клеток человеческого вкуса выявил 6-метилфлавон как предполагаемый блокатор горького вкуса. Предыдущая работа показала, что подобные соединения могут блокировать активность TAS2R39 (Roland et al., 2014). Чтобы определить, может ли 6-метилфлавон также блокировать активность TAS2R39 в отношении TAF, клетки HEK293 временно трансфицировали TAS2R39 и G α 16-gust44. Мы исследовали реакцию клеток HEK293, экспрессирующих TAS2R39 и G α 16-gust44, на TAF в присутствии или в отсутствие 6-метилфлавона.В присутствии 0,1 мМ 6-метилфлавона реакция TAS2R39 на 1 мМ TAF полностью отменялась, что позволяет предположить, что 6-метилфлавон является антагонистом TAS2R39 (рис. 3, А и Б). TAF также активирует TAS2R1. Чтобы определить, может ли 6-метилфлавон также блокировать активность TAS2R1, клетки HEK293, экспрессирующие TAS2R1, исследовали на предмет их реакции на TAF в присутствии 6-метилфлавона (дополнительная рис. 1A). В этих клетках не было обнаружено явных различий между ответами клеток на TAF в присутствии или в отсутствие 6-метилфлавона.

Рис. 3.

6-метилфлавон и его аналоги блокируют ответы TAS2R39 на TAF и денатоний. Клетки HEK293 трансфицировали TAS2R39 и G α 16-gust44 и анализировали на реакцию на 6-метилфлавон, его аналоги и другие предполагаемые блокаторы, выявленные при скрининге вкусовых клеток (рис. 1). (A) Гистограмма, показывающая реакцию TAS2R39 на TAF (1 мМ) в присутствии 6-метилфлавона, его аналогов и других предполагаемых блокаторов. 6-метилфлавон (0,1 мМ) полностью блокировал ответ TAS2R39 на TAF.Два других аналога (соединения C5 и C7) в концентрации 0,1 мМ в значительной степени блокировали ответ TAS2R39 на TAF; три других (соединения C4, C6 и C10) в концентрации 0,1 мМ частично блокировали ответ TAS2R39 на TAF. Данные усреднены по трем повторам ( n = 3). Эксперимент был повторен еще раз. Для статистического анализа использовали дисперсионный анализ с помощью критерия множественных сравнений Даннета. *** Р < 0,001. ** Р < 0,01, * Р < 0,05. (B) Репрезентативные следы мобилизации кальция экспрессирующими TAS2R39 клетками в TAF, TAF + 6-метилфлавон (6-MF), TAF + C5 и TAF + C7.Соединения добавляли через 30 секунд после начала измерения. (C) Кривая концентрация-реакция, показывающая, что 6-метилфлавон блокировал реакцию TAS2R39 на 1 мМ TAF в зависимости от концентрации (IC 50 = 0,02196 мМ) ( n = 3). (D) 6-метилфлавон может блокировать реакцию TAS2R39 на активатор 3 мМ денатония (Den) (IC 50 = 0,01297 мМ) ( n = 3). Эксперимент был повторен еще трижды.

Для дальнейшей характеристики влияния 6-метилфлавона на TAS2R39 были получены зависимые от концентрации кривые ответов TAF.Как и ожидалось, 6-метилфлавон блокировал ответы TAS2R39 на TAF в зависимости от концентрации (рис. 3C). Напротив, 6-метилфлавон не влиял на ответы TAF TAS2R1, TAS2R28 и TAS2R14 (дополнительная рис. 1, B – D). Кроме того, мы показали, что 6-метилфлавон может блокировать реакцию TAS2R39 на денатоний, известный агонист TAS2R39 (рис. 3D) (Meyerhof et al., 2010).

Блок аналогов 6-метилфлавона TAS2R39.

В дополнение к открытию и проверке 6-метилфлавона в качестве антагониста TAS2R39, мы также идентифицировали несколько других флавоноидов в качестве предполагаемых блокаторов горечи в результате скрининга hTBEC фитохимических веществ и фитохимических производных.Из группы восьми соединений (C3, C4, C5, C6, C7, C8, C10, C11; дополнительная таблица 2), которые мы протестировали, мы обнаружили пять соединений (C5, C7, P <0,001; C6, C10). , P <0,01; C4, P <0,05), которые также продемонстрировали эффективность в блокировании активности TAS2R39, вызванной TAF (рис. 3, A и B). Ни одно из этих соединений не оказывает заметного влияния на реакцию TAS2R1 на TAF (дополнительная рис. 1). Мы приводим эти данные, чтобы подчеркнуть, что фитохимическое семейство флавоноидов перспективно для открытия и разработки блокаторов горького вкуса.Однако наиболее эффективным в настоящее время представляется 6-метилфлавон.

6-Метилфлавон снижает горечь TAF у подгруппы людей.

Чтобы определить, уменьшает ли 6-метилфлавон горечь TAF, 16 испытуемых оценили воспринимаемую горечь TAF с 6-метилфлавоном и без него. В среднем вкус самого 6-метилфлавона находится между «едва уловимым» и «слабым» во вкусе при используемой концентрации, как было протестировано на этих 16 субъектах [Рис. 5В (зеленые столбцы) и фиг. 5С (первый столбец)]; это было не так для некоторых других предполагаемых блокаторов горького вкуса флавоноидов, которые появились в результате скрининга (данные не показаны). У 2 из 16 испытуемых воспринимаемая горечь TAF была почти полностью и надежно заблокирована 6-метилфлавоном (рис. 4). Этих двух субъектов неоднократно тестировали с 6-метилфлавоном, четыре раза для одного субъекта и пять повторений для другого, чтобы установить надежность наблюдений. В каждом тесте горечь ТАФ блокировалась для них в очень большой степени. Кроме того, у шести других субъектов воспринимаемая горечь TAF была подавлена ​​в обоих повторах, тогда как у остальных восьми субъектов горечь либо не изменилась, либо увеличилась после предварительного ополаскивания и представления TAF 6-метилфлавоном.Надежность и согласованность между тестами испытуемых на протяжении двух сеансов были высокими (рис. 5А). В среднем по всем протестированным субъектам 6-метилфлавон был лишь умеренно и незначительно эффективен в снижении горечи TAF (рис. 5, B и C). Причина различий в эффективности блокирования горечи 6-метилфлавоном на TAF у разных субъектов в настоящее время неясна. Тем не менее, индивидуальные различия в экспрессии соответствующего набора рецепторов горького вкуса, которые реагируют на TAF, являются одним из объяснений. Наконец, влияние 6-метилфлавона на TAF демонстрирует специфичность, поскольку 6-метилфлавон не сильно подавлял горечь противомалярийного препарата феррохина ни у одного из протестированных субъектов (дополнительная рис. 2).

Рис. 4.

Восприятие горечи TAF с 1 мМ 6-метилфлавона (6-MF) и без него в качестве предварительного полоскания и смеси у двух субъектов. Два верхних графика — это рейтинги по одному предмету. Нижние два графика — это рейтинги другого отдельного субъекта. Графики слева — сеанс 1, а графики справа — сеанс 2.На каждом графике столбец слева (синий) соответствует воспринимаемой горечи TAF, тогда как столбец справа (оранжевый) представляет воспринимаемую горечь TAF с предварительным ополаскиванием 6-метилфлавоном и примесью TAF. TAF вводили в дозе 0,5 мг/мл. 6-метилфлавон вводили в количестве 1 мМ. Объем раствора, введенного в рот, составлял 10 мл. Горечь TAF, обработанного 6-метилфлавоном (апельсин), была почти полностью заблокирована у этих двух субъектов. Этих двух субъектов неоднократно тестировали с 6-метилфлавоном, четыре раза для одного субъекта и пять повторений для другого, чтобы установить надежность наблюдений. Результат для этих двух испытуемых оказался очень надежным: Пирсон r = 0,87; Р < 0,005. LMS: Маркированная шкала величины.

Рис. 5.

Ощущаемая горечь 6-метилфлавона, TAF и TAF с 6-метилфлавоном в качестве предварительного ополаскивания и смеси у всех испытуемых. (A) На графике показана надежность повторных испытаний оценок воспринимаемой горечи субъектами для трех условий: 6-метилфлавон, TAF и TAF с 6-метилфлавоном в качестве предварительного полоскания и смеси. По оси x показаны рейтинги для сеанса 1, тогда как по оси y показаны рейтинги для сеанса 2.Коэффициент корреляции Пирсона = 0,76, P <0,001, что указывает на постоянство и надежность оценок горечи испытуемых на протяжении сеансов. (B) На графике показаны оценки воспринимаемой горечи каждого субъекта при приеме только 6-метилфлавона (зеленая полоса), только TAF (синяя полоса) и TAF с 6-метилфлавоном в качестве предварительного ополаскивания и в смеси (оранжевая полоса) для всех 16 субъектов, усредненных по две репликации. TAF вводили в количестве 0,5 мг/мл, а 6-метилфлавон вводили в количестве 1 мМ. Объем раствора, помещаемого в рот, составлял 10 мл.Субъекты отсортированы от самой высокой до самой низкой оценки воспринимаемой горечи TAF. Эти данные подчеркивают индивидуальные различия в восприятии горького вкуса TAF и подавлении горького вкуса TAF с помощью 6-метилфлавона. (C) На графике показаны оценки испытуемыми воспринимаемой горечи для трех условий: 6-метилфлавон, TAF и TAF с 6-метилфлавоном в качестве предварительного полоскания и смеси. Каждое условие проверялось дважды. TAF вводили в количестве 0,5 мг/мл, а 6-метилфлавон вводили в количестве 1 мМ. Объем раствора, помещаемого в рот, составлял 10 мл.Интенсивность горечи TAF умеренно снижается при приеме 6-метилфлавона, хотя и без статистической значимости; дисперсионный анализ повторных измерений, F (1, 60) = 0,71; Р > 0,05. LMS: Маркированная шкала величины.

Обсуждение

В этом исследовании мы объединили анализы на основе клеток эпителия вкусовых почек человека (hTBEC) с анализами клеток, специфичных для горьких рецепторов, и тестированием человеческого вкуса для выявления блокаторов горького вкуса, которые могут подавлять горечь, связанную с анти-ВИЧ-препаратом. тенофовир алафенамид или TAF.Дети с ВИЧ-инфекцией должны постоянно принимать антиретровирусные препараты; в противном случае они дают возможность вирусу, который является смертельным, если его не лечить, мутировать и его становится намного труднее лечить. Поскольку детям трудно глотать капсулы, горечь жидких составов АФИ является основной причиной частичного соблюдения врачебных предписаний у детей. В некоторых случаях потребность в постоянном медицинском соблюдении настолько важна, что предпринимаются хирургические процедуры, позволяющие помещать лекарства непосредственно в желудок, минуя систему горького вкуса.

Наш скрининг ингибирования TAF с использованием нативных культурных платформ hTBEC привел к открытию 6-метилфлавона, который блокирует активацию реакции культивируемых вкусовых клеток человека на TAF. Последующие анализы активности на основе рецепторов в гетерологичных клетках человека показали, что TAF активирует ограниченное количество рецепторов горького вкуса, включая TAS2R39, TAS2R1, TAS2R8 и TAS2R14. Используя тот же анализ гетерологичной экспрессии, мы продемонстрировали, что 6-метилфлавон ингибирует активность TAS2R39 в отношении TAF, но не TAS2R1, что может дать механистическое объяснение того, почему 6-метилфлавон может блокировать ответы культивируемых вкусовых клеток на TAF.Чтобы перевести результаты скрининга in vitro в эффекты человеческого восприятия, мы показали, что 6-метилфлавон надежно и значительно подавлял горечь, связанную с TAF, почти полностью у 2 из 16 субъектов, частично у шести субъектов, но не совсем у остальных. восемь испытуемых. Вместе мы продемонстрировали, что сочетание анализов на основе культивируемых клеток вкуса человека, анализов на основе рецепторов горького вкуса и психофизического тестирования человеческого вкуса обеспечивает эффективный и действенный способ обнаружения, проверки и разработки блокаторов горького вкуса для подмножеств участников-людей.Очевидно, что для повышения эффективности у большей части населения потребуются дополнительные блокаторы.

Первичная культура вкусовых клеток человека как платформа для скрининга.

Тот факт, что у человека существует 25 рецепторов горького вкуса, создает некоторые проблемы для идентификации блокаторов с помощью высокопроизводительного скрининга. Скрининг 25 рецепторов по отдельности со всеми представляющими интерес горькими АФИ и всеми потенциальными ингибиторами требует крупномасштабных ресурсов и усилий. Тем не менее, этот подход применялся в биотехнологической промышленности, хотя и в гетерологичных системах экспрессии (Karanewsky et al., 2016). Чтобы обойти это узкое место, мы использовали культуры клеток вкусовых почек человека в качестве прокси и платформы для нативных вкусовых клеток человека, применяя скрининг блокаторов горького со средней пропускной способностью. Этот скрининг привел к открытию нескольких соединений, которые блокируют активацию TAF и активацию другими соединениями с горьким вкусом. Несмотря на наш успех в идентификации блокаторов с использованием культуры первичных вкусовых клеток человека, мы признаем, что этот подход имеет ограничения. Эти ограничения включают в себя культивируемые клетки: 1) не точное представление нативных вкусовых клеток, 2) еще не полностью отражающие индивидуальные человеческие различия в горьком вкусе, 3) отсутствие нацеливания на конкретные рецепторы, поскольку нативные клетки имеют тенденцию экспрессировать несколько TAS2R на клетку, и 4) отсутствие определения того, могут ли ингибирование основано на TAS2R или нижележащих сигнальных элементах.Поэтому, чтобы устранить ограничения (3) и (4), мы объединили первоначальный скрининг на основе вкусовых клеток человека с анализами на основе рецепторов в гетерологичных клетках человека для идентификации соединений, которые специфически нацелены на TAS2R человека, для дальнейшей оценки. И чтобы устранить ограничения (1) и (2), мы проверили 6-метилфлавон как горький ингибитор TAF в психофизических тестах на людях с небольшой выборкой населения.

Анализы на основе рецепторов и проверка психофизических вкусовых тестов человека.

Используя анализы гетерологичной экспрессии на основе рецепторов, мы показали, что TAF может активировать TAS2R39 и TAS2R1 человека и, в меньшей степени, TAS2R8 и TAS2R14 человека. Среди этих рецепторов TAS2R14 при экспрессии в клетках HEK показал широкую настройку; он реагирует на несколько структурно различных соединений (Meyerhof et al., 2010; Karaman et al., 2016). Другие человеческие TAS2R настроены более узко (Slack et al., 2010). Наши данные in vitro позволяют предположить, что TAS2R39, TAS2R1 и TAS2R8 могут быть критическими рецепторами для передачи горечи TAF. Далее мы показываем, что 6-метилфлавон был эффективным блокировщиком TAS2R39. Однако блокирования одного рецептора TAF (TAS2R39) может быть недостаточно для подавления горького вкуса в большой гетерогенной популяции людей (Meyerhof et al., 2010).

В дополнение к двум субъектам, которые достоверно и достоверно продемонстрировали почти полное подавление горечи TAF с помощью 6-метилфлавона, шесть других субъектов также достоверно сообщили об уменьшении горечи TAF в присутствии 6-метилфлавона. Однако 6-метилфлавон не был эффективен в блокировании горечи TAF у всех испытуемых. TAF использовали примерно в 1 мМ, стандартной лекарственной форме для пациентов, которая находится в том же диапазоне, который был заблокирован в клеточных анализах 6-метилфлавоном. Ясно, что чувствительность к 6-метилфлавону как ингибитору TAF является физиологической и перцептивной чертой для некоторых, но не для всех людей. Эти индивидуальные различия в реакции на фармакологические агенты составляют основу индивидуализированной (персональной) медицины. Например, люди с рыжими волосами могут быть носителями мутаций рецептора меланокортина-1, которые предрасполагают их к чрезмерной чувствительности к лечению морфином (Mogil et al., 2005). Точно так же мы считаем, что чувствительность к 6-метилфлавону является мультигенным индивидуальным признаком, основанным на нескольких ответах TAS2R на лечение.У некоторых субъектов 6-метилфлавон значительно и почти полностью снижает горечь; у других он умеренно подавляет горечь, а у третьих усиливает горечь.

Как добиться подавления горечи TAF у всех субъектов? Одним из возможных объяснений гетерогенности ингибирования является то, что горечь TAF опосредована другими рецепторами, такими как TAS2R1 или TAS2R8 (см. рис. 2). Следовательно, мы считаем, что идентификация антагонистов этих других горьких рецепторов с использованием нашего трехстороннего подхода приведет к созданию смеси ингибиторов, которые при введении будут оказывать сильное ингибирующее действие на горечь у большинства субъектов.Например, в случае TAF мы могли бы проверить, уменьшит ли коктейль, содержащий 6-метилфлавон плюс антагонисты TAS2R1 и TAS2R8, горечь лекарства для большинства пациентов. Если это так, мы сможем повысить соблюдение режима приема лекарств и, в конечном итоге, добиться большего успеха в лечении болезней.

Таким образом, мы предоставляем доказательства того, что трехсторонняя система, основанная на 1) скрининге обнаружения горьких антагонистов на основе клеток вкусовых почек человека в сочетании с 2) анализами дезорфанизации и ингибирования на основе отдельных рецепторов TAS2R и 3) психофизическим тестированием человека, является эффективным и эффективный критический путь открытия и проверки ингибиторов горького вкуса. Здесь мы идентифицировали терпеноид 6-метилфлавон как блокатор горького вкуса TAF, антиретровирусного препарата против ВИЧ/СПИДа. Эти результаты обещают помочь в соблюдении врачебного режима у детей, которые не могут переносить отвращение к своим жизненно важным лекарствам.

Благодарности

Авторы благодарят Нию Бауэрс и Ричарда Блэка за их вклад в работу.

Авторские взносы

Принимали участие в разработке исследования: Швиберт, Ван, Си, Штрайфф, Фламмер, Маргольски, Кристенсен, Роусон, Цзян, Бреслин.

Провели эксперименты: Ван, Си, Чома, Штрайфф, Риверс.

Предоставленные материалы и протоколы экспериментов: Озденер.

Анализ данных: Швиберт, Ван, Си, Чома, Штрайфф, Фламмер, Риверс, Цзян, Бреслин.

Написали или участвовали в написании рукописи: Schwiebert, Flammer, Jiang, Breslin.

Сноски

    • Получено 14 мая 2020 г.
    • Принято 1 марта 2021 г.
  • ↵1 Текущее место работы: отделение радиологии, больница Чжуннань Уханьского университета, Ухань, Китай.

  • ↵2 Э.С. и Ю.В. в равной мере внесли свой вклад в эту работу.

  • Эта работа была поддержана Фондом Билла и Мелинды Гейтс [OPP 1159241 и OPP1195023].

  • https://doi.org/10.1124/molpharm.120.000071.

  • ↵Дополнительные материалы к этой статье доступны на сайте molpharm.aspetjournals.орг.

Сокращение

API-
активный фармацевтический ингредиент
CRC
концентрации-ответ кривые
ВИЧ
вирус иммунодефицита человека
hTBEC
людей вкуса бутон эпителия полученных клетки
TAS2R
типа 2 вкусовой рецептор
TAF
тенофовир алафенамид
  • Copyright © 2021 Автор(ы).

Подавление горького вкуса при пероральном приеме тенофовира алафенамида

%PDF-1.5 % 1 0 объект > эндообъект 4 0 объект >поток Acrobat Distiller 10.0.0 (Windows) doi:10.1124/molpharm.120.000071application/pdf

  • Ингибирование горького вкуса при пероральном приеме тенофовира алафенамида
  • http://molpharm.aspetjournals.org
  • 10.1124/molpharm.120.000071http://dx.doi.org/10.1124/molpharm.120.0000712021-04-08false10.1124/molpharm.120.000071
  • http://molpharm.aspetjournals.орг
  • http://molpharm.aspetjournals.org
  • 10.1124/molpharm.120.0000712021-04-08false
  • http://molpharm.aspetjournals.org
  • 2021-04-08T23:59:02+05:30Arbortext Advanced Print Publisher 9.1.510/W Unicode2022-02-26T15:26:22-08:002022-02-26T15:26:22-08:00uuid:172c362d-1dd2 -11b2-0a00-df0827fd5800uuid:172c3630-1dd2-11b2-0a00-6a0000000000 конечный поток эндообъект 3 0 объект > эндообъект 2 0 объект > эндообъект 5 0 объект >/ExtGState>/Font>/ProcSet[/PDF/Text/ImageC]/XObject>>>/Rotate 0/Thumb 15 0 R/Type/Page>> эндообъект 6 0 объект >/ExtGState>/Font>/ProcSet[/PDF/Text]>>/Rotate 0/Thumb 30 0 R/Type/Page>> эндообъект 7 0 объект >/ExtGState>/Font>/ProcSet[/PDF/Text]>>/Rotate 0/Thumb 33 0 R/Type/Page>> эндообъект 8 0 объект >/ExtGState>/Font>/ProcSet[/PDF/Text/ImageC]/Properties>/XObject>>>/Rotate 0/Thumb 38 0 R/Type/Page>> эндообъект 9 0 объект >/ExtGState>/Font>/ProcSet[/PDF/Text]/Properties>>>/Rotate 0/Thumb 48 0 R/Type/Page>> эндообъект 10 0 объект >/ExtGState>/Font>/ProcSet[/PDF/Text/ImageC/ImageI]/Properties>/XObject>>>/Rotate 0/Thumb 52 0 R/Type/Page>> эндообъект 11 0 объект >/ExtGState>/Font>/ProcSet[/PDF/Text]/Properties>>>/Rotate 0/Thumb 55 0 R/Type/Page>> эндообъект 12 0 объект >/ExtGState>/Font>/ProcSet[/PDF/Text/ImageC]/XObject>>>/Rotate 0/Thumb 58 0 R/Type/Page>> эндообъект 13 0 объект >/ExtGState>/Font>/ProcSet[/PDF/Text]>>/Rotate 0/Thumb 61 0 R/Type/Page>> эндообъект 215 0 объект >поток HW[SJ~W-ift>AHB ɡ{v д.$ןH}٢(ӗy:k’ZG»K}b?’dHJ6W*$UFdyv7BoywA0̽WIPF .KD(?\}}j|!eKoc7;t/5-²tkpt’)\[email protected]?%m=%5p\ DZ{>7?s3Roaspoke

    Исследование показало, что болезнь оставляет горький привкус во рту – NBC10 Philadelphia

    Может ли болезнь действительно повлиять или даже изменить ваши вкусовые рецепторы?

    Если ваш шпинат особенно горький на вкус, когда вы больны, недавнее исследование, проведенное учеными из Филадельфии в Центре химических ощущений Монелла, показало, что виновата ваша иммунная система.

    Центр подтвердил NBC10, что пациенты, страдающие инфекциями, заболеваниями и аутоиммунными расстройствами, особенно чувствительны к горькому вкусу.

    Больные люди, как правило, производят больше регуляторного белка фактора некроза опухоли или TNF, который высвобождается иммунной системой, чтобы помочь бороться с воспалением, вызванным болезнью или заболеванием. По словам исследователей, белок также отвечает за повышение чувствительности к вкусу, делая пищу более горькой и менее аппетитной.

    «Этот белок вырабатывается в больших количествах, когда люди больны, и он участвует в формировании большей чувствительности к вкусу пищи», — ведущий исследователь доктор.— сказал Хун Ван. «То, что делает пищу горькой, — это определенные химические вещества в пище», — объяснила она.

    В отличие от предыдущих опубликованных исследований, исследование Вана показало, что выделение ФНО и неприятный вкус связаны не только со связями в мозге.

    «Предыдущие исследования показывают, что люди обычно винят во вкусе изменения в мозгу, — сказал Ван. «Но наше исследование показывает, что дело не только в мозге. Это также связано с вашими вкусовыми рецепторами».

    В ходе эксперимента исследователи заметили, что мыши, неспособные вырабатывать ФНО, были менее чувствительны к горьким на вкус соединениям в пище, в отличие от мышей, которые регулярно вырабатывали этот белок.

    Но ингибирование или полное устранение белка иммунной системы может быть не лучшим решением, предупредил Ван.

    «Мы должны подумать о том, практично ли использовать ингибиторы для изменения нашего вкуса», — сказал Ван. «Но нам нужно больше исследований, чтобы определить это».

    Ван посоветовала обратить внимание на повышенную чувствительность к горечи во время болезни, чтобы определить, какие продукты вызывают этот вкус.

    «На данный момент наша цель — повысить осведомленность о горьком вкусе у больных людей, чтобы мы могли больше думать о продуктах, которые они могут есть, чтобы они не вызывали у них отвращения и были более вкусными», — сказал Ван.

    Почему у меня горечь во рту?

    Горький или неприятный привкус во рту может быть нормальной реакцией на острую или кислую пищу. Однако, когда вкус сохраняется долгое время или возникает неожиданно, это может вызывать беспокойство.

    Вкус — это сложное чувство, на которое могут влиять многие факторы, в том числе плохая гигиена полости рта, сухость во рту или беременность.

    Лечение стойкого горького привкуса включает лечение любых основных заболеваний, но тем временем люди могут справиться с неприятным привкусом с помощью некоторых простых домашних средств.

    В этой статье мы рассмотрим 13 возможных причин горького привкуса во рту. Мы также обсуждаем симптомы и методы лечения.

    Признаки и симптомы


    Дисгевзия — медицинский термин, обозначающий изменение вкуса во рту.

    Стойкое изменение вкуса во рту в медицине известно как дисгевзия. Этот вкус описывается как неприятный и может сохраняться в течение длительного времени, пока не будет устранена основная причина.

    Люди с дисгевзией могут испытывать постоянный вкус, который они часто описывают как один из следующих:

    • горький
    • металлический
    • прогорклый или неприятный
    • соленый

    Вкус может отвлекать и даже может отвлекать пробовать другие вещи во время еды или питья.У человека может сохраняться вкус даже после чистки зубов. Они также могут испытывать другие симптомы в зависимости от причины.

    Причины

    Многие причины горького привкуса во рту несерьезны. Однако симптомы могут вызывать раздражение и мешать обычному питанию человека или его повседневной жизни.

    Горький привкус во рту могут вызывать следующие состояния:

    Сухость во рту

    Сухость во рту, также известная как ксеростомия, возникает, когда во рту не вырабатывается достаточное количество слюны.Поскольку слюна помогает уменьшить количество бактерий во рту, меньшее количество слюны означает, что больше бактерий может выжить.

    Люди с ксеростомией ощущают липкость и сухость во рту. Это может быть вызвано такими факторами, как прием лекарств, ранее существовавшие заболевания или употребление табака. У человека также может быть сухость во рту, если у него заложен нос, потому что дыхание через рот может высушить его.

    Людям с постоянной сухостью во рту следует обратиться к врачу для постановки правильного диагноза.

    Проблемы с зубами

    Плохая гигиена полости рта также может вызвать горечь во рту.Это также может вызвать увеличение кариеса, инфекций и заболеваний десен или гингивита.

    Многих распространенных проблем с зубами можно избежать, если регулярно чистить зубы щеткой и пользоваться зубной нитью. Некоторые люди также могут обнаружить, что использование скребка для языка помогает устранить некоторые симптомы.

    Использование антибактериальной жидкости для полоскания рта между чистками зубов может помочь свести к минимуму количество неприятных на вкус бактерий.

    Беременность

    Горький или металлический привкус во рту является распространенной жалобой в течение первого триместра беременности.

    Гормоны в организме колеблются во время беременности. Это изменение может повлиять на органы чувств, что может вызвать определенные пристрастия и заставить некоторые продукты или запахи казаться отвратительными.

    Многие беременные также отмечают металлический, горький или оловянный привкус во рту. Это может раздражать, но обычно проходит позже во время беременности или после родов.

    Синдром жжения во рту

    Синдром жжения во рту — это состояние, при котором возникает ощущение жжения во рту.Ощущение может быть разным, но многие описывают его как поедание острого перца. Кроме того, некоторые люди могут ощущать горький или прогорклый привкус во рту.

    Симптомы синдрома жжения во рту могут проявляться спорадически, но также могут быть хроническими и продолжаться длительное время.

    Некоторые люди с синдромом могут испытывать трудности с приемом пищи или питья, в то время как другие могут обнаружить, что это облегчает их симптомы.

    Менопауза

    Женщины в период менопаузы также могут ощущать горечь во рту.Это может быть связано с более низким уровнем эстрогена в организме, что может привести к вторичному состоянию, такому как синдром жжения во рту. Это также может быть связано с постоянной сухостью во рту.

    ГЭРБ или кислотный рефлюкс


    Нежелательный горький привкус во рту может быть вызван ГЭРБ или кислотным рефлюксом.

    Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь (ГЭРБ) или кислотный рефлюкс могут быть причиной нежелательного горького привкуса во рту.

    Эти состояния возникают, когда мышца или сфинктер в верхней части желудка ослабевают и позволяют кислоте или желчи подниматься в пищевод.

    ГЭРБ имеет тенденцию раздражать пищевод, вызывая жжение в груди или животе. Это также может вызвать неприятный или горький привкус во рту, который может сохраняться до тех пор, пока другие симптомы.

    Молочница полости рта

    Молочница во рту часто вызывает появление белых пятен или пятен на языке, во рту или в горле. Это также может вызвать горький или неприятный вкус, который может сохраняться до тех пор, пока инфекция не будет вылечена.

    Синдром кедрового ореха

    У некоторых людей употребление кедровых орехов может вызвать горький или металлический привкус во рту.Это часто происходит через 1-3 дня после употребления кедровых орехов. Синдром также не проявляет никаких других симптомов и проходит через пару недель.

    Стресс и беспокойство

    Высокий уровень стресса и беспокойства может стимулировать реакцию организма на стресс, которая часто изменяет вкусовые ощущения человека. Беспокойство может вызвать сухость во рту, что часто приводит к горькому привкусу.

    Повреждение нерва

    Как и другие наши органы чувств, вкусовые рецепторы напрямую связаны с нервами головного мозга.Повреждение нервов может вызвать изменение вкусовых ощущений человека.

    Повреждение нерва может быть результатом травмы головы или следующих состояний:

    Лекарства и пероральные добавки

    У некоторых людей некоторые лекарства, добавки или медицинские процедуры могут вызвать горечь во рту. Это может быть связано с горьким вкусом лекарств или с тем, что содержащиеся в них химические вещества выделяются со слюной.

    Человек должен проконсультироваться со своим врачом, чтобы узнать, могут ли его лекарства вызывать горький вкус.

    Лекарства, которые могут вызывать горечь, включают:

    Болезни

    Определенные болезни, включая инфекции носовых пазух или простуду, могут сопровождаться горьким привкусом во рту.

    Во время этих заболеваний организм посылает воспалительные белки для захвата вредных клеток. Эти белки могут также воздействовать на язык и вкусовые рецепторы, из-за чего человек может испытывать более горький вкус во рту, чем обычно.

    Лечение рака

    Человек, проходящий курс лечения рака, может ощущать неприятный привкус во рту во время еды или питья.

    Химиотерапия и лучевая терапия могут раздражать вкусовые рецепторы у некоторых людей, в результате чего даже простые продукты, такие как простой тост или вода, могут иметь горький или неприятный вкус.

    Лечение и домашние средства


    Рекомендуется регулярный уход за зубами, чтобы уменьшить горечь во рту.

    Чтобы навсегда избавиться от горького привкуса во рту, обычно необходимо устранить основную причину. Врач часто может диагностировать проблему, спросив о любых других симптомах и лекарствах, а также проведя анализы.Затем они могут порекомендовать соответствующее лечение.

    Домашние средства могут помочь некоторым людям найти временное облегчение симптомов при поиске постоянного решения, хотя они могут не работать для всех.

    Домашние средства, которые могут помочь уменьшить горечь во рту, включают:

    • регулярный уход за зубами, такой как чистка зубов щеткой, зубная нить и использование антибактериального ополаскивателя
    • жевательная резинка без сахара, чтобы слюна двигалась во рту
    • употребление большого количества жидкости в течение дня
    • избегание факторов риска кислотного рефлюкса, таких как употребление жирной или острой пищи, а также сокращение или исключение табачных изделий и алкоголя
    • полоскание рта чайной ложкой пищевой соды, добавленной в стакан воды

    Outlook

    Ощущение горечи во рту довольно распространено, и это не должно быть непосредственной причиной для беспокойства.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.