Обследование на гельминты: Комплексные анализы на гельминты сдать в СЗЦДМ

Содержание

Обследование на паразитов — сдать анализ по доступной цене в Сургуте

Всем детям при прохождении медицинской комиссии перед посещением детского сада, школы, спортивных секций, бассейна и пр. Паразиты способны влиять на процессы жизнедеятельности и значительно ухудшать состояние здоровья своих хозяев: от замедления реакций, стойкого ухудшения настроения, нарушения ЖКТ (тошнота, боли в животе, неустойчивый стул, перианальный зуд и др.) и иммунитета, до симптомов интоксикации, аллергии, бронхиальной астмы и других опасных заболеваний.

Показанием к обследованию также служит обнаружение в общем анализе крови повышенного числа эозинофилов и снижение гемоглобина. А также признаки авитаминоза и нарушения обмена веществ.

Определение яиц гельминтов (глистов) и простейших в кале.

Традиционным методом в диагностике лямблиоза является выявление цист и трофозоитов при помощи микроскопии.

Если в результате анализа стоит отметка «обнаружено», значит выявлены цисты простейших, яйца гельминтов или сами паразиты.

Поскольку трофозоиты можно обнаружить только в свежих образцах кала, а выделение цист обычно носит пульсирующий характер, то для анализа рекомендуется использовать несколько свежих проб, взятых в разные дни.

Срок готовности анализа 1-2 дня.

Приём биологического материала производится непосредственно в медицинской лаборатории «НАДЖА» по адресу:
г. Сургут, ул. Безверхова, 3/7 (8:00-12:00 пн-сб)

Cоскоб на энтеробиоз.

Рекомендуется при подозрении на заражение острицами, так как эти паразиты откладывают яйца на коже перианальной области.

Забор биологического материала производится непосредственно в медицинской лаборатории «НАДЖА» по адресу:
г. Сургут, ул. Безверхова, 3/7 (8:00-12:00 пн-сб)

Пробирках «ПАРАСЕП» (метод обогащения).

Для проведения исследования используется пробирка со специальным раствором, который позволяет сконцентрировать и выявить яйца паразитов и простейшие даже при небольшом их количестве. Как правило, молекулы антигенов выделяются со стулом постоянно поэтому необходимости в повторных исследованиях не возникает. Требования «свежего» биоматериала не нужны, так как тест-система обнаруживает обрывки оболочек, поэтому кал можно собирать накануне вечером в одноразовый пластиковый контейнер, хранить при температуре +2/+8 С °. Дополнительные условия подготовки уточните у врача.

Срок готовности анализа 1-2 дня.

Приём биологического материала производится непосредственно в медицинской лаборатории «НАДЖА» по адресу:
г. Сургут, ул. Безверхова, 3/7 (8:00-12:00 пн-сб)

Исследование кала методом ИХА на антигены хеликобактера (Аg Helicobakter pilori, иммунохимический метод, качественно)

Приём биологического материала производится непосредственно в медицинской лаборатории «НАДЖА» по адресу:
г. Сургут, ул. Безверхова, 3/7 (8:00-12:00 пн-сб)

Анализ крови

Методом ИФА выявляются антитела к антигенам:

  • токсокар
  • описторхиса
  • стронгилоидоза
  • хеликобактер пилори
  • лямблий
  • аскариды
  • сальмонеллёза
  • свинного цепня (к тениидоза)
  • трихинелл
  • эхинокка однокамерного
  • токсоплазме гондии

Возможна как комплексная диагностика, так и по отдельности.

ПОДГОТОВКА

Кровь рекомендуется сдавать утром, натощак, не менее 8 часов голодания. Можно пить негазированную воду.

Срок выполнения 5 рабочих дней.

Забор крови возможен во всех отделениях «НАДЖА» по адресам г. Сургут:

  • ул. Безверхова, 3/7 (8:00-12:00 пн-сб)
  • Тюменский тракт, 6 (9:00-11:00 пн-сб)
  • ул. Мелик-Карамова, 76В (8:00-14:00 пн-пт, 8:00-13:00 сб)
  • ул. Профсоюзов, 45/1 (8-12, пн-пт)

Отправка результатов на электронную почту. Оригинал получите в том отделении «Наджа», в котором осуществлялась сдача анализа. Хотите убедиться, что в Вашем организме нет паразитов? Пройдите тестирование.

404 Not Found

Адреса клиник г. Казань

Адрес: ул. Гаврилова, 1, ост. «Гаврилова» (пр. Ямашева)

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00

Автобус: 10, 10а, 18, 33, 35, 35а, 36, 44, 45, 46, 49, 55, 60, 62, 76

Троллейбус: 2, 13

Трамвай: 5, 6

Адрес: ул. Т.Миннуллина, 8а, (Луковского) ост. «Театр кукол»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00

Автобус: 1, 2, 31, 37, 47, 74

Троллейбус: 6, 8, 12

Метро: Суконная слобода

 

 

Адрес: ул. Сыртлановой, 16, ст. метро Проспект Победы, ост. ул. Сыртлановой (проспект Победы)

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00 

Автобус: 5, 34, 37, 62 77

Трамвай: 5

Метро: Проспект Победы

Адрес: ул. Назарбаева, 10, ст. метро «Суконная Слобода», ост. «Метро Суконная Слобода»

Пн-Пт: 7.

00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: выходной

Автобус: 1, 4, 25, 43, 71

Метро: Суконная слобода

 

 

Адрес: ул. Декабристов, 180, ст. метро «Северный вокзал», ост. «Гагарина»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: выходной

Автобус: 6, 18, 29, 33, 37, 40, 43, 53, 62, 76, 78, 89

Троллейбус: 13

Трамвай: 1, 6

Метро: Северный вокзал

Адрес: пр. А.Камалеева, 28/9, (жилой комплекс «XXI век»), ост. «Новый ипподром»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00 

Троллейбус: 3

 

 

Адрес: Дербышки, ул. Мира, 20, ост. «Магазин Комсомольский», «Гвоздика»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00 

Автобус: 1, 19, 25, 34, 44, 60, 84

Адрес: ул. Серова, 22/24, ост. «ул. Серова»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00 

Автобус: 10, 10а

 

 

Адрес: ул. Беломорская, 6, ст. метро «Авиастроительная», ост. «ул. Ленинградская»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00 

Автобус: 6, 18, 33, 37, 40, 42, 43, 53, 60, 78, 89, 93

Троллейбус: 13

Трамвай: 1

Метро: Авиастроительная

Адрес: ул. Закиева, 41а, ост. «Кабельное телевидение»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00 

Автобус: 5, 18, 30, 31, 34, 45, 46, 62, 63, 77, 89

Троллейбус: 3, 5, 9, 12

 

 

Адрес:
ул. Кул Гали, 27, ост. «ул. Кул Гали» (ул. Габишева)

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: выходной

Автобус: 46, 90

Адрес: ул. Рихарда Зорге, 95, м. «Дубравная», ост. «ул. Юлиуса Фучика»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00

Автобусы: 5, 18, 30, 31, 33, 34, 45, 68, 74, 77

Троллейбусы: 5, 9, 12

Трамвай: 4

Метро: Дубравная

Адрес: ул. Фрунзе, 3а, ост. «Идель»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: выходной 

Автобусы: 10а, 36, 49, 53, 63, 72, 106

Троллейбус:1

 

Анализ крови на паразитов (гельминты)

К паразитарным относятся заболевания, которые вызываются простейшими и гельминтами. В России каждый год регистрируется около 20 миллионов случаев инвазии. Кроме того, имеется тенденция к росту заболеваемости. Чаще всего встречаются такие болезни, как описторхоз, эхинококкоз, лямблиоз, токсокароз, аскаридоз и трихинеллез.

Клиническая картина может отличаться, но присутствует и общая симптоматика для всех заболеваний. Это боли в животе, быстрая утомляемость, аллергические реакции, снижение аппетита, нарушение сна, беспричинная раздражительность. У детей с паразитарными заболеваниями вероятна задержка психического развития.

Анализы, которые входят в комплексный тест

Возбудитель аскаридоза. В ходе исследований в крови выявляются специфические антитела, которые вырабатываются организмом в ответ на заражение аскаридами. Результаты рассматривают в комплексе с клиническими симптомами и анамнезом.

Возбудитель лямблиоза. Исследование используется для выявления паразитоносителей, диагностики лямблиоза и дифференциальной диагностики других заболеваний, которые имеют сходные симптомы с паразитарными инвазиями.

Возбудитель описторхоза. Заболевание может протекать почти бессимптомно, поэтому выявить его во многих случаях можно только путем лабораторных исследований.

Возбудитель токсокароза. Заболевание чаще всего наблюдается в одной из двух форм: глазной или синдрома «блуждающей личинки». Анализ необходим как для диагностики, так и для контроля хода лечения.

Возбудитель трихинеллеза. Анализ необходим, чтобы установить, инфицирован пациент трихинеллами или нет.

Возбудитель эхинококкоза. Заболевание характеризуется поражением печени и других органов личинками ленточного червя. Наличие в крови специфических антител свидетельствует о заражении.

Следует учитывать, что результаты серологического исследования не являются достаточными для подтверждения или исключения паразитарной инвазии, и их следует интерпретировать только в комплексе с эпидемиологическим анамнезом и другими клиническими данными.

▷ Медицинский центр Eurolab

Общая характеристика

Гельминты (глисты) паразитические черви, вызывающие группу болезней, называемых гельминтозами. По данным ВОЗ, ежегодно приблизительно каждый второй человек на планете заражается одним из трех основных видов гельминтов.

Показания для назначения

Диагностика гельминтоза проводится в случаях подозрения на заражение гельминтами, перед плановым стационарным лечением, а также при оформлении детей в дошкольные и школьные учреждения, оформлении медицинских книжек и т. п.

Клиническая значимость

Заболевание может проходить в острой и хронической форме. Во время острой формы, наиболее часто оно проявляется в виде: желудочно-кишечных расстройств, кожных отеков и высыпаний, болей в суставах, общей аллергической реакции, лихорадки, увеличения лимфатических узлов, печени и селезенки, поражения легких. В некоторых случаях оно может привести к тяжелым поражениям органов.

Среди признаков хронического гельминтоза: анемия, вялость, слабость, похудение, снижение общей активности и аппетита. Могут отмечаться: незначительное повышение температуры тела, неприятные ощущения, тяжесть в правом подреберье, расстройства стула, непереносимость некоторых пищевых продуктов.

Во время хронического протекания заболевания происходят изменения обменных процессов организма. Они обусловлены тем, что гельминты потребляют питательные вещества, вызывая дефицит витаминов, минералов, аминокислот и других пищевых компонентов.

Защитные функции организма снижаются, могут возникнуть всевозможные нарушения нервно-психической деятельности, анемия. В связи с изменениями в иммунной системе, у детей учащаются инфекционные и вирусные заболевания.

Методы исследований

  • метод Като;
  • метод обогащения;
  • метод флотации (в модификации Калантарян и Фюллиборна) для обнаружения нематод, цистод, трематод;
  • метод Борисенка для обнаружения кишечной угрицы;
  • соскоб перианальных складок для обнаружения остриц.

Правила подготовки

Для достоверного результата анализа биологический материал (кал) доставляется в медицинскую лабораторию в день сбора. До транспортировки в лабораторию он должен храниться в холодильнике при температуре +4-8° С.

Забор материала желательно проводить в пробирку Mini Parasep SF (формалин + тритон X) – одноразовые пробирки, предназначенные для концентрации кишечных паразитов, что значительно увеличивает выявляемость гельминтов.

Для анализа на энтеробиоз делают соскоб с перианальных складок утром, до дефекации.

Анализ на гельминты в Уфе и РБ

Гельминты – это обобщенное имя для паразитических червей, которые могут обосноваться в человеческом организме и вызывать заболевания различной степени тяжести. Кстати, около 90% населения всего мира даже не подозревают о том, что они — носители гельминтов, так как эти черви могут никак себя не проявлять. Чтобы диагностировать наличие или отсутствие данных паразитов нужно ежегодно сдавать профилактические анализы.

Сдать анализ на гельминтов в Уфе вы можете, выбрав удобный вам офис лаборатории «МедиаЛаб».

Анализ на гельминтов в «МедиаЛаб»: исследования

В нашей клинико-диагностической лаборатории мы проводим исследования на основные типы гельминтов, которые можно найти у человека. К ним относятся:

  • Аскариды. Данный гельминт может находят как у детей, так и у взрослых, а локализуется он в кишечнике зараженного пациента, где может свободно передвигаться. Аскариды редко представляют серьезную угрозу для жизни людей, в основном они вызывают те или иные нарушения в организме, которые часто люди списывают на признаки других заболеваний.
  • Описторхис. Этот опасный паразит вызывает такое заболевание, как описторхоз, которое поражает печень и желчевыводящие пути. Попадание гельминта в организм происходит через употребление в пищу рыбы, являющуюся носителем червя.
  • Свиной цепень. Человек может заразиться, если будет есть плохо обработанное свиное мяса. На фоне поражения свиным цепнем у больных возникают проблемы с пищеварением, неврологические расстройства и другие нарушения.
  • Стронгилоид. Вызывая у человека такое заболевание, как стронголоидоз, эти паразиты попадают в организм через почву в основном в тропическом и субтропическом климате.
  • Фасциолы. Эти гельминты – носители фасциолеза, довольно опасны для человека. При их обнаружении в организме, пациента отправляют на карантин.
  • Шистосомы. Гельминты, которые могут проникать в организм человека при его контакте с зараженной пресной водой. Заражение можно заметить уже через полчаса после контакта: на коже появляется сыпь, чувствуется сильный зуд.
  • Токсокары. Можно заразиться при употреблении пищи или воды, где отложены яйца данных паразитов, а также через грязных уличных животных. Чаще заражаются дети, а не взрослые, так как не соблюдают правила личной гигиены.
  • Трихинелла. При глобальном поражении развивается болезнь трихинеллез, а локализуется паразит в основном в тонком кишечнике и мускулатуре.
  • Эхинококк. Этот ленточный червь в организм человека проникает при контакте с животными, а затем образует в жизненно важных органах человека эхиноккоковые кисты.

Сдавая анализ на гельминтов в Уфе для профилактических целей, вы можете вовремя обнаружить в организме опасного паразита и начать подходящее лечение. Ждем вас в офисах лаборатории «МедиаЛаб»!

Пройти анализы на паразитов в Екатеринбурге

Паразитарные заболевания остаются самыми недооцененными в мире по уровню опасности для здоровья. Патологии имеют универсальную клиническую картину, подходящую под любые штаммы гриппа, ОРЗ, ОРВИ и других видов сезонных простуд. Типичные признаки – головокружение, слабость, тошнота, субфебрильная лихорадка, насморк, сухой кашель.  Анализ крови на паразитов поможет подтвердить или исключить из анамнеза гельминтозную инфекцию, что крайне важно в разработке эффективной схемы лечения. Стандартный комплекс исследований включает соскоб, выявление в кале яиц гельминтов и тест на антитела. Сдать кровь на паразитов рекомендуется каждые 6-12 месяцев, чтобы полностью исключить вероятность развития опасных, тяжело диагностируемых осложнений.

В медицинском центре «Шанс» можно сдать анализы на паразитов в Екатеринбурге и получить точные результаты в течение 1-7 дней. Это позволит лечащему врачу поставить достоверный диагноз и назначить адекватное лечение. В лаборатории клиники проводятся исследования на все виды глистных инвазий. Анализы на паразитов (кал и кровь) помогают выявить:

  • бычьего и свиного цепня;

  • кишечную нематоду, в том числе остриц;

  • паразитических человечьих червей аскарид;

  • ленточных червей;

  • жгутиковых протистов (лямблии).

Комплексный анализ на паразитов по крови в Екатеринбурге позволяет обнаружить простейших гельминтов, которые обитают за пределами ЖКТ и не доступны к обнаружению в каловых массах. Исследование крови на антитела классов IgM и IgG имеют самый высокий уровень точности, достигающий 99%. Тесты помогают диагностировать такие бессимптомные, но крайне опасные заболевания, как токсоплазмоз, трихинелла, демодекс, лямблиоз. Своевременно проведенный анализ крови на паразитов поможет в короткие сроки устранить инфекцию. 

Подготовка к анализам

Общие правила подготовки пациентов к сдаче лабораторных анализов.

Кровь на анализ правильно сдавать с 8 до 11 часов утра натощак. Это означает, что промежуток между последним приёмом пищи и взятием крови должен составлять 12-14 часов. Существуют суточные колебания многих гормональных и биохимических параметров, выраженные в большей или меньшей степени для разных показателей — границы «нормы» обычно отражают статистические данные, полученные в стандартных условиях, при взятии крови в утреннее время. Сок, чай, кофе, тем более с сахаром, пить нельзя! Можно пить воду без газа в обычном режиме, накануне избегать пищевых перегрузок, грудных детей не следует кормить за 3-4 часа до забора крови.

За 1-2 дня до любого исследования необходимо исключить из рациона питания жирное, жареное и алкоголь. За 1,5-2 часа до сдачи крови воздержитесь от курения, в связи с возможным изменением секреции некоторых биологически активных веществ.

Желательно исключить факторы, влияющие на результаты исследований: физическое напряжение (бег, быстрая ходьба, подъем по лестнице), эмоциональное возбуждение- это вызывает гормональные и биохимические перестройки в организме. Перед процедурой необходимо отдохнуть 10-15 минут, успокоиться.

Кровь на анализ сдают до начала приема лекарственных препаратов (например, антибактериальных и химиотерапевтических) или не ранее чем через 10-14 дней после их отмены. Если вы принимаете лекарства, обязательно предупредите об этом лечащего врача для решения вопроса о целесообразности проведения лабораторных исследований на фоне приема препарата.

При исследовании функции щитовидной железы в период лечения препаратами содержащими гормоны щитовидной железы исследование должно проводиться через 24 часа после последнего приема препарата. За 2-3 дня до взятия крови следует исключить прием препаратов, содержащих йод.

Исследования на половые гормоны у женщин (ФСГ, ЛГ, эстрадиол, прогестерон) проводятся только в соответствующие дни менструального цикла конкретного пациента, которые указал врач.

Если Вы сдаете кровь на параметры гемостаза (АЧТВ, Д-димер, волчаночный антикоагулянт, протромбиновый индекс, тромбиновое время, фибриноген) обязательно сообщите об этом сотрудникам лаборатории для отметки в направлении.

Кровь для определения ПСА должна забираться до или не ранее чем через 2 недели после биопсии простаты и массажа простаты. Постхирургический уровень ПСА определяется не ранее чем через 6 недель после вмешательства.

Сыворотка для определения СА 15-3 должна забираться до или не ранее чем через 2 недели после биопсии, хирургических вмешательств и массажа молочной железы.

Кровь не следует сдавать в день проведения рентгенографии, ректального исследования или физиотерапевтических процедур в связи с возможным временным изменением некоторых лабораторных параметров.

При контроле лабораторных показателей в динамике рекомендуется проводить повторные исследования в одинаковых условиях — в одной и той же лаборатории, в приблизительно одинаковое время суток.

Очень важно, чтобы Вы точно следовали указанным рекомендациям, так как только в этом случае будут получены ценные результаты исследования крови, реально отражающие состояние Вашего здоровья.

Правила взятия материала для общеклинических и биохимических исследований мочи.

Накануне сдачи анализов не рекомендуется употреблять овощи и фрукты, которые могут вызвать изменение цвета мочи (свекла, морковь и др.), нельзя принимать мочегонные препараты (диуретики).

Перед сбором мочи необходимо произвести тщательный туалет половых органов. Женщинам не рекомендуется сдавать анализы мочи во время менструации.

Сбор мочи необходимо производить до инструментальных методов обследования. После проведения цистоскопии не ранее чем через 5-7 дней.

При исследовании катехоламинов в моче в течение 3 дней нельзя применять препараты, содержащие раувоьфию, теофиллин, нитроглицерин, кофеин. По возможности не употреблять продукты, содержащие серотонин (шоколад, сыры, молочные продукты, бананы), алкоголь. Избегать физической нагрузки, стрессов, курения, болевых воздействий, которые могут вызвать физиологический подъем уровня катехоламинов.

Правила сбора разовой мочи для общеклинических (общий анализ мочи, анализ мочи по Нечипоренко) и биохимических исследований: сразу после сна, после тщательного туалета наружных половых органов собирают среднюю порцию мочи (50-100 мл) при свободном мочеиспускании.

Мочу для пробы Нечипоренко собирают следующим образом: утром необходимо обмыть промежность и наружные половые органы теплой водой без применения дезинфицирующих растворов. После чего удобно расположитесь над ванной или тазом, и выпустите первую порцию утренней мочи. Задержите мочеиспускание, и поднесите к уретре стерильную емкость, в которую соберите небольшое количество мочи (достаточно 25-30 мл). Оставшуюся мочу выпустите в ванну или таз. Таким образом, проба Нечипоренко собирается, как и моча для общего анализа – средняя утренняя порция.

Если необходимо получить мочу из мочевого пузыря без прохождения по уретре, то прибегают к взятию пробы с помощью катетера. Собранную мочу необходимо в максимально сжатые сроки доставить в лабораторию, так как анализ необходимо провести в течение 2 часов.

Правила сбора пробы Зимницкого — проводится в течение суток на фоне обычного питьевого и пищевого режимов, однако прием мочегонных препаратов следует отменить на этот промежуток. Чтобы собрать мочу по Зимницкому, подготовьте 8 чистых баночек, и подпишите каждую номером (1, 2, 3 и т.д.) или временем мочеиспускания (9.00, 12.00 и т. д.). В день начала сбора пробы встаньте в 6.00 утра и помочитесь в туалет. Затем через три часа (в 9.00) помочитесь в баночку с номером 1. Мочитесь в очередную баночку каждые три часа, включая ночное время. Последняя проба собирается в 6.00 следующего утра. Таким образом, вы соберете 8 баночек мочи в 9.00, 12.00, 15.00, 18.00, 21.00, 24.00, 03.00, 06.00. Все 8 баночек сдайте в лабораторию. Мочу не сливать в одну большую емкость! На протяжении суток сбора пробы Зимницкого фиксируйте количество потребленной жидкости.

Моча для трехстаканной пробы собирается утром, натощак. После пробуждения необходимо подмыться теплой водой без применения дезинфицирующих растворов, и подготовить три (или две) чистые емкости (лучше стерильные), на которых подписан номер порции мочи – 1, 2 или 3. Далее необходимо поочередно помочиться в каждую емкость, причем вторая порция мочи должна составлять чуть более половины. То есть немного мочитесь в первую емкость, затем во вторую и в третью. Женщины могут разделить мочу только на две порции.

Собранную мочу сдайте в лабораторию в максимально сжатые сроки. Далее моча каждого стакана подвергается микроскопированию, в ходе которого подсчитывается количество лейкоцитов и эритроцитов в поле зрения. Результат трехстаканной пробы позволяет идентифицировать орган, в котором локализован воспалительный процесс, при помощи сравнения количества лейкоцитов и эритроцитов в каждом стакане.

Правила сбора суточной мочи для биохимических исследований: в 07:00 опорожнить мочевой пузырь, но мочу не собирать и записать время. Следующие порции собирать в одну и ту же ёмкость. Для лучшей сохранности в течение всего времени сбора мочу хранить в холодильной камере, так как при комнатной температуре существенно снижается содержание глюкозы. Последняя порция мочи собирается в 07:00 следующего дня. Перемешать собранную за сутки мочу и измерить общий объём; записать общую цифру (в миллилитрах). Отобрать 50-100 мл в сухую, чистую пластиковую или стеклянную тару с завинчивающейся крышкой. Доставка в Лабораторию в день взятия биоматериала. В направлении указывается объём суточной мочи, время сбора.

Проба Сулковича представляет собой экспресс-тест, позволяющий выявить уровень кальция в моче. Данный метод используется для коррекциии подбора дозировок витамина D. Пробу Сулковича чаще всего выполняют детям, которые получают витамин D, чтобы отследить уровень выделения кальция и не допустить передозировки.

Для пробы Сулковича необходимо собрать утреннюю мочу ребенка перед тем, как вы его начали кормить. Поскольку суточную мочу у ребенка собрать достаточно сложно, для пробы Сулковича используют именно утреннюю мочу.

Общие правила подготовки к анализам кала

Кал, предназначенный для исследования, должен быть получен во время самопроизвольной дефекации (не рекомендуется использовать какие-либо слабительные средства, ускоряющие акт дефекации, так как это может повлиять на состав кала). Следует ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (беладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий) в течение 72 часов до сбора кала. В кале не должно быть примесей мочи или менструальной крови. Кал для анализа собирают шпателем в специальный стерильный контейнер, заполняя его примерно на треть (для анализа нужно не более 1 чайной ложки кала). Материал для исследования необходимо отдать в лабораторию в день сбора.

Анализ кала на скрытую кровь, яйца гельминтов, цисты и вегетативные формы гельминтов — исключить из рациона мясо, рыбу, зеленые овощи, томаты в течение 72 часов до исследования. Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел,

Исследование проводить перед выполнением ректороманоскопии и других диагностических манипуляций в области кишечника и желудка. Выделение яиц гельминтов, а также цист простейших с калом напрямую зависит от жизненного цикла паразитов. По этой причине результаты исследования могут оказаться отрицательными даже в случае наличия заражения.

Кальпротектин в кале — особой подготовки не требуется.

Лабораторная диагностика почвенных гельминтозов

Троп Паразитол. 2017 июль-декабрь; 7(2): 86–91.

Sumeeta Khurana

Отделение медицинской паразитологии, Институт последипломного медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия Медицинская паразитология, Институт последипломного медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия

Адрес для корреспонденции: Dr.Сумита Курана, отделение медицинской паразитологии, Институт последипломного образования медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия. Электронная почта: [email protected]

Поступила в редакцию 16 июня 2017 г.; Принято 25 сентября 2017 г.

Эта статья находится в открытом доступе и распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 3. 0, которая позволяет другим микшировать, настраивать и развивать произведение в некоммерческих целях, если автор указан, и новые творения лицензируются на тех же условиях.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Аннотация

Гельминты

включают в себя, I.E., Hookworms ( ancylostoma duodeNale , Necator anmicanicus ), круглый червя ( аскарикоидов ), кнут ( трихурис трихюра ) и синтинтоины STERCORALIS . Во всем мире около 1,5 миллиарда человек инфицированы ППГ. ППГ способствуют значительному нарушению умственного и физического развития, особенно в развивающихся странах.К сожалению, эти инфекции в основном остаются недиагностированными из-за отсутствия подготовленного персонала и соответствующих технологий. Периодическое выделение яиц или личинок еще больше затрудняет диагностику. Таким образом, существует острая необходимость в быстрых и точных тестах для диагностики ППГ. Методы диагностики включают традиционные и молекулярные методы. Обычные методы включают микроскопию, посев и подсчет яиц. Серология играет важную роль, особенно в случае S. stercoralis, когда традиционные методы имеют очень низкую чувствительность.Быстрые, высокочувствительные молекулярные методы, особенно количественная полимеразная цепная реакция, делают его пригодным для диагностики ППГ по сравнению с нечувствительными, а также трудоемкими традиционными методами. До сих пор молекулярное обнаружение ППГ в основном ограничивалось исследовательскими установками, но теперь есть рекомендация принять молекулярные тесты в программах элиминации ППГ Всемирной организации здравоохранения. Таким образом, инфекции, вызываемые ППГ, являются важной проблемой общественного здравоохранения, и их необходимо надлежащим образом диагностировать и лечить, чтобы значительно снизить смертность и заболеваемость.

Ключевые слова: 5 Ключевые слова: Диагностика, Гельминты, почва

Введение

Гельминты, передаваемые на почве, передаваемые по почве. , власоглав ( Trichuris trichiura ) и Strongyloides stercoralis , хотя Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) формально не включает S. stercoralis в список ППГ.ППГ были включены в список ВОЗ из 17 забытых тропических болезней (ЗТБ) из-за связанной с ними бедности, значительной заболеваемости и потери DALY. Большинство инфекций происходит в тропических и субтропических странах, включая Индию. Во всем мире около 1,5 миллиарда человек инфицированы ППГ.[1] Аскаридоз зарегистрирован у 771,7–891,6 млн человек, трихоцефалез — у 429,6–508 млн человек, около 406,3–480,2 млн инфицированы анкилостомами.[2] ППГ способствуют значительному нарушению умственного и физического развития и анемии, особенно у детей.Инфекции ППГ часто протекают бессимптомно, но иногда приводят к тяжелым желудочно-кишечным (ЖКТ) симптомам. ВОЗ поставила цель к 2020 году ликвидировать геогельминтозы как проблему общественного здравоохранения у детей.[3]

Большинство паразитарных заболеваний нельзя диагностировать только с помощью физического осмотра, необходимы лабораторные исследования. К сожалению, эти инфекции в основном остаются недиагностированными из-за отсутствия подготовленного персонала и соответствующих технологий. Периодическое выделение яиц или личинок еще больше затрудняет диагностику.Таким образом, существует острая необходимость в быстрых и точных тестах для диагностики ППГ. Поскольку не существует адекватного золотого стандарта для обнаружения геогельминтозов, это еще больше затрудняет сравнение и стандартизацию любого нового метода.[4] Методы диагностики включают традиционные и молекулярные методы. Кроме того, количественная оценка гельминтной нагрузки также важна для оценки интенсивности инфекции и прогноза.

ОБЫЧНАЯ ДИАГНОСТИКА

Традиционно ППГ диагностируют путем исследования фекалий или других образцов желудочно-кишечного тракта на наличие яиц гельминтов, личинок или иногда взрослых червей или их сегментов.Из-за периодического откладывания яиц и/или личинок для обнаружения паразитов требуется несколько образцов (не менее 3), собранных в течение 10 дней. [5] Свежий образец фекалий объемом приблизительно большая чайная ложка или около 10 мл образца жидкого стула должен быть доставлен в лабораторию в течение 1 часа после сбора.

Общий осмотр

Образец следует исследовать на цвет, консистенцию (сформировавшийся/полуформованный/неоформленный/водянистый), наличие червей или сегментов, наличие гноя или крови и т. д.

Методы, основанные на микроскопии

Прямая микроскопия

Сделайте гладкий, тонкий препарат (с физиологическим раствором и йодом) и накройте покровным стеклом. В случае дизентерийных и несформировавшихся образцов выберите часть образца, которая содержит кровь и слизь, чтобы сделать мазок, и без добавления физиологического раствора или красителя накройте покровным стеклом.[5] Изучите препарат под микроскопом, чтобы выявить наличие личинок или яиц гельминтов. Их следует внимательно наблюдать на предмет их формы, размера, окрашивания желчью и т. д., Яйца A. lumbricoides окрашены желчью, а яйца других ППГ — нет. Оплодотворенные яйца A. lumbricoides округлые, длиной от 45 до 75 мкм, имеют толстую скорлупу с наружным сосцевидным слоем. В некоторых случаях наружный слой отсутствует (декорированные яйца). Неоплодотворенные яйца имеют удлиненную форму и крупнее оплодотворенных яиц (~90 мкм), их скорлупа тоньше, а сосочковый слой более изменчив, либо с большими выпуклостями, либо практически без них.[6] Яйца Ancylostoma и Necator не поддаются микроскопической дифференциации.Яйца с тонкой скорлупой, бесцветные, размером 60–75 × 35–40 мкм. Яйца T. trichiura имеют размер 50–55 × 20–25 мкм, бочкообразную форму с толстой скорлупой и пару полярных «заглушек» на каждом конце. В случае S. stercoralis наблюдаются личинки без оболочки размером 200–250 мкм × 16 мкм. Они показывают типичный рабдитовидный пищевод с большим утолщением.[5] Если образец стула остается в теплой и влажной среде более 24 часов, из яиц анкилостомы могут вылупиться личинки. Их необходимо дифференцировать от личинок S. stercoralis . [7] При инфекции T. trichiura в стуле могут присутствовать эозинофилы и кристаллы Шарко-Лейдена.

Методы концентрирования фекалий

Если количество микроорганизмов в фекалиях меньше, то по возможности следует концентрировать кал. Наиболее рекомендуемой процедурой является метод концентрации формального эфира (FEC). Формалин-эфирный раствор, который имеет меньший удельный вес, чем паразитические организмы, что приводит к концентрации последних в осадке.[8] Методы флотации (флотация сульфатом цинка, флотация насыщенным хлоридом натрия и др.) широко не используются, потому что неоплодотворенные яйца Ascaris и личинки Strongyloides не плавают и, следовательно, не могут быть легко извлечены этим методом.

Подсчет яиц

Метод Като-Каца

Это наиболее распространенный метод, используемый для количественного определения яиц гельминтов. ВОЗ рекомендует исследовать дубликаты препаратов по методу Като-Каца (К-К). [9] Предметные стекла необходимо исследовать через 40–60 мин после очистки глицерином, в противном случае яйца анкилостомы имеют тенденцию разрушаться и исчезать.Количество яиц гельминтов на грамм стула (ЭПГ) в качестве стандартного показателя интенсивности инфекции рассчитывается как: количество яиц в мазке × 24 [10].

По данным ВОЗ, 5000 и 50 000 EPG для A. lumbricoides , 2000 и 4000 EPG для анкилостомы и 1000 и 10 000 EPG для T. trichiura являются пороговыми значениями для умеренных и тяжелых инфекций, соответственно [10]. ] K-K хорош для обнаружения инфекций A. lumbricoides и T. trichiura , но имеет относительно низкую чувствительность для обнаружения яиц анкилостомы, потому что яйца анкилостомы имеют тенденцию распадаться, если есть временная задержка в исследовании образцов.[11] В настоящее время это наиболее широко используемый метод в полевых эпидемиологических исследованиях из-за его низкой стоимости и относительно низкого уровня требуемых навыков. [12]

Метод Макмастера

Это еще один метод подсчета яиц, который сравнительно легко стандартизировать, чем К-К, и его эффективность также сопоставима[13]. Здесь известный объем фекальной взвеси исследуется под микроскопом с использованием счетной камеры. После этого количество EPG рассчитывается как: Общее количество яиц или ооцист × 50.[14] Здесь яйца плавают без мусора; отсюда и преимущество относительно быстрого подсчета. Единственным недостатком здесь является необходимость специальной счетной камеры.

Методы FLOTAC и mini-FLOTAC

Это недавно разработанные новые методы подсчета фекальных яиц. Здесь аппарат FLOTAC ® (Университет Неаполя, Италия) используется для проведения флотации образца в центрифуге с последующим отсечением апикальной части флотирующей суспензии и количественным определением яиц.[15] Основным преимуществом является его поливалентность, поэтому его можно использовать для одновременного обнаружения различных гельминтов, а также кишечных простейших. [16] FLOTAC имеет много практических недостатков, включая высокую стоимость, потребность в центрифуге и длительное время процедуры подготовки проб, что снижает его ценность как единственного диагностического метода. В настоящее время проводятся исследования для проверки этой методики. Был разработан метод Mini-FLOTAC, упрощенная форма FLOTAC, которая оптимальна в условиях ограниченных возможностей.[17] В предыдущих исследованиях предполагалось, что чувствительность mini-FLOTAC сравнима с K-K, но ниже, чем у FLOTAC. Дополнительным преимуществом является то, что это можно использовать с сохраненными образцами фекалий.[12]

СРАВНЕНИЕ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ НА ОСНОВЕ МИКРОСКОПИИ

В ходе метаанализа сравнивались различные методы микроскопии в областях низкой и высокой интенсивности.[12] Это сравнение было основано на байесовской модели латентного класса, предполагая вероятностную модель взаимосвязи, и результаты представлены в .

Таблица 1

Сравнение чувствительности (%) различных методов, основанных на микроскопии[12]

Метод FLOTAC показал в целом самую высокую чувствительность среди всех. Чувствительность была сопоставима как для методов Mini-FLOTAC, так и для методов K-K. Прямая микроскопия имела наименьшую чувствительность. Чувствительность теста сильно различалась в зависимости от интенсивности инфекции (группы низкой и высокой интенсивности) для всех тестов, особенно для метода КК, где чувствительность была ниже в группе низкой интенсивности по сравнению с группой высокой интенсивности (группа высокой чувствительности, 74–95%). ).Это изменение необходимо учитывать при выборе любого диагностического теста в определенных условиях.[12]

Сравнение среднего количества яиц с помощью различных методов показывает, что метод К-К оценивает большее количество яиц по сравнению с методом FLOTAC. Метод FLOTAC обычно занижает среднее количество яиц.[18] В методе McMaster также наблюдалось более высокое количество яиц по сравнению с K-K, особенно в случаях заражения T. trichiura и анкилостомозом.stercoralis , который является живородящим, в то время как анкилостомы можно искусственно культивировать в лаборатории для получения рабдитоподобных личинок. Существует множество методов, некоторые из которых устарели, а другие используются в исследовательских целях.

Культура на полосках фильтровальной бумаги Harada-Mori

Первоначально она была представлена ​​Харада и Мори в 1955 году.[7] Для этого метода требуется фильтровальная бумага, на которую добавляют фекальный материал, и пробирка с небольшим количеством воды, в которую он вставляется. После инкубации в подходящей среде происходит вылупление яйцеклеток и/или развитие личинок.В дополнение к низкой чувствительности 28% другим недостатком является то, что охлажденный или законсервированный образец нельзя использовать для культивирования. Кроме того, фильтровальная бумага, содержащая инфекционных личинок, представляет биологическую опасность.[7]

Фильтровальная бумага/метод скошенной культуры (чашка Петри)

Этот метод очень похож на метод Харада-Мори, с той лишь разницей, что это метод на основе предметного стекла, при котором предметное стекло, содержащее свежий фекальный материал, помещается в стеклянную или пластиковую чашку Петри. блюдо с водой. Этот метод позволяет проводить прямой осмотр с помощью препаровального микроскопа для поиска личинок.[7]

Культура на древесном угле

Это еще один способ культивирования с использованием гранулированного древесного угля. Древесный уголь обеспечивает среду для развития личинок, которая имитирует условия в природе.[7]

Культура на чашках с агаром Кога

В основном используется для культивирования S. stercoralis . Образец стула помещают на чашку с агаром и инкубируют во влажной камере при температуре окружающей среды. После инкубации чашки исследуют на наличие личинок S.stercoralis под световым микроскопом. Когда личинки ползают по агару, они несут с собой бактерии. Это создает видимые следы над агаром. Планшеты промывают 10% раствором ацетилформалина. Элюент центрифугируют, а осадок исследуют под микроскопом.[20] Этих личинок следует отличать от личинок анкилостомы. Это более чувствительно, чем методы прямого мазка и концентрации кала.

Техника культивирования Бермана

В основном используется для S.обнаружение личинок stercoralis . Образец стула размером с грецкий орех (10 г) помещают на марлю, которую помещают в стеклянную воронку и заливают водопроводной водой. Через 2 ч жидкость со дна собирают, центрифугируют и удаляют надосадочную жидкость. Осадок исследуют под микроскопом при увеличении в 400 раз, чтобы подтвердить наличие личинок.[7,10] Хотя этот метод требует меньше времени, требуется трудоемкость и большое количество стула, которого может не быть.[7]

Недостатки методов культивирования включают необходимость технического опыта, сложность выполнения в полевых условиях и более продолжительное время.Кроме того, старые и охлажденные образцы не подходят.[7]

Анализы на основе серологии

В ситуациях, когда образцы кала недоступны, в диагностике может помочь серология. Они делятся на две категории: анализы на обнаружение антигена и анализы на обнаружение антител. К ним относятся твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) и его производные формы, такие как скрининговый тест Falcon Assay ELISA, Dot-ELISA, система иммунопреципитации люциферазы (LIPS), непрямой иммунофлуоресцентный тест на антитела (IFAT) или прямой иммунофлуоресцентный тест на антитела, иммуноблоттинг, и некоторые экспресс-иммунохроматографические тесты (ДЭТ).[21]

Недостатками, связанными с серодиагностикой, являются ее более инвазивный характер, антитела, как правило, остаются стойкими после лечения и, таким образом, могут не указывать на активную инфекцию, перекрестную реакцию с другими нематодами, особенно с филяриатозными инфекциями.[22] Однако серология играет важную роль в диагностике инфекции S. stercoralis . Он размножается внутри хозяина, что приводит к хронической инфекции с широким спектром клинических проявлений, начиная от бессимптомной стадии и заканчивая опасной для жизни гиперинфекцией из-за диссеминации личинок, особенно у пациентов с ослабленным иммунитетом. Обычные диагностические тесты имеют очень низкую чувствительность у этих пациентов. Однократное прямое исследование мазка кала (DS) не позволяет выявить почти 70% случаев, но исследование нескольких образцов улучшает чувствительность.[22] Здесь серологические методы имеют более высокую чувствительность по сравнению с другими традиционными паразитологическими тестами (81–98%). В последнее время широко используется разработанная непрямая иммунофлуоресцентная микроскопия (IFAT) с чувствительностью 97% и специфичностью 98%.[22] Требование наличия целых живых инфекционных личинок является основным недостатком IFAT, и для преодоления этого недостатка был разработан тест агглютинации желатиновых частиц с заявленной чувствительностью 81% и специфичностью 74%.[22] С использованием иммунодоминантного антигена S. stercoralis и S. ratti были разработаны иммуноблот-тесты, которые показали чувствительность от 65 до 100%. [23] Было разработано несколько ИФА, которые продемонстрировали лучшую чувствительность (94%) по сравнению с IFAT. Недавно был разработан LIPS, который продемонстрировал очень хорошую чувствительность (97%) и специфичность (100%).[22] Эта техника может быть выполнена относительно быстро (2,5 часа), и еще более быстрая версия (<2 минут) находится в стадии изучения.[24]

Обнаружение копроантигена

Анализы на копроантиген давно разрабатывались для диагностики ряда кишечных инфекций человека и животных. Для ППГ они в основном доступны для Strongyloides и анкилостомы. Поликлональная кроличья антисыворотка, созданная против экскреторного/секреторного (Э/С) антигена Strongyloides ratti и нанесенная на микротитровальные планшеты для захвата фекального антигена.[25] Strongyloides coproAg остается стабильным при замораживании в виде экстрагированных формалином фекальных супернатантов, хранящихся при температуре -20°C.Существует множество испытаний по превращению копроИФА на основе копроАг Strongyloides в экспресс-ДЭТ, многие из них также коммерчески доступны. [26] Сообщается, что чувствительность обнаружения антигена S. stercoralis составляет 0,5 мг/мл.[26] Антитело IgG, выработанное против Ancylostoma ceylanicum ES, используется для захвата копроантигенов анкилостомы. Это позволяет обнаруживать белки ЭС от 10 нг/мл до 10 мкг/мл.[27]

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ПОДХОДЫ

Достижения в области молекулярных методов обеспечили быстрое обнаружение, а также точное количественное определение яйцеклеток ППГ.Гораздо более высокая чувствительность молекулярных методов делает их особенно полезными для мониторинга эффективности лечения или стратегий контроля. Молекулярными мишенями, используемыми в основном, являются ITS-1, ITS-2, 18S и т. д. Доступно несколько различных методов, основанных на полимеразной цепной реакции (ПЦР), т. е. обычная ПЦР, количественная ПЦР (кПЦР), мультиплексная ПЦР-реакция и т. д. [28,29] Существует множество технических проблем, связанных с молекулярными методами. Образцы стула содержат большое количество взвешенных веществ, желчных кислот и т. д., что может ингибировать молекулярные реакции.[30] Это препятствие можно преодолеть, используя этап флотации или осаждения перед процессом экстракции.[31] Многие наборы для выделения нуклеиновых кислот были разработаны с дополнительными этапами удаления ингибитора. Другая проблема заключается в том, что яичная скорлупа яиц ППГ намного прочнее, чем клеточные стенки бактерий, что приводит к низкому выходу нуклеиновой кислоты. Разрушению яичной скорлупы можно способствовать с помощью таких методов, как обработка ультразвуком или гомогенизация тканей с помощью устойчивых к разложению гранул и т. д.[32] Несмотря на ограничения, молекулярные тесты оказались более чувствительными, чем обычные методы, при обнаружении очень небольшого количества яиц.[8] С продвижением вперед можно обнаружить несколько паразитов с помощью мультиплексной ПЦР за один раз, но они, как правило, отстают по чувствительности по сравнению с одиночными анализами.

СРАВНЕНИЕ ОБЫЧНЫХ И МОЛЕКУЛЯРНЫХ МЕТОДОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ППГ

Быстрые и высокочувствительные свойства количественной ПЦР делают ее более подходящей для диагностики геогельминтозов по сравнению с нечувствительными, а также трудоемкими старыми традиционными методами. Во многих исследованиях сравнивалась чувствительность обоих методов. Согласно этим исследованиям, для A. lumbricoides микроскопия имела чувствительность 70–88%, тогда как молекулярные тесты имели чувствительность 85–100%; для анкилостомы чувствительность микроскопии составила 30–88% по сравнению с молекулярными методами с чувствительностью 75–100%; для S. stercoralis чувствительность микроскопии составила 16–50% по сравнению с молекулярными методами 76–93%; для T. trichiura микроскопия имела чувствительность 88%, в то время как молекулярные методы имели заявленную чувствительность 100%.[28]

До сих пор молекулярное обнаружение СТГ в основном ограничивалось исследовательскими установками. Однако теперь, учитывая его точность и экономическую эффективность, рекомендуется использовать молекулярные тесты и в программах элиминации геогельминтозов ВОЗ.

ДРУГИЕ МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕТОДЫ

Были введены некоторые новые тесты, например:

  1. Петлевая изотермическая амплификация: Действовать как более дешевая альтернатива, поскольку здесь для реакции используется водяная баня вместо дорогого термоциклера[8]

  2. Капельная цифровая ПЦР, технология ПЦР третьего поколения, была представлена ​​для абсолютного количественного определения генов-мишеней, применимых к патогенам. [8]

ДРУГИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ

  1. Гемограмма: Эозинофилия (>600 мкл или >6% данных тонкослойной хроматографии) может быть использована в качестве маркера инфекции ППГ. Во многих исследованиях показана корреляция между инфекцией ППГ и эозинофилией, которая обычно наблюдается примерно в 47% случаев аскаридоза, 78% случаев трихоцефалеза и 82% случаев стронгилоидоза, до 60% случаев анкилостомоза [33,34,35]. ,36] Низкий гемоглобин ≤5 г/дл (60%) и низкая концентрация ферритина (33%) (из-за железодефицитной анемии) могут наблюдаться у пациентов с инвазией анкилостомозом[7]

  2. Анализ скрытой крови: Скрытая кровь в кале у пациентов с тяжелой анемией вследствие хронической анкилостомозной инфекции использовалась в качестве суррогатного маркера[37]

  3. Другие образцы: в случае аскаридоза, анкилостомы или S.sterocoralis, в фазе миграции личинок инфекции диагноз можно поставить, найдя личинок в мокроте или смывах желудка. При аскаридозе в мокроте могут быть обнаружены кристаллы Шарко-Лейдена и эозинофилы [7]

  4. Эндоскопия: В случае S. stercoralis наиболее частыми эндоскопическими находками, которые обычно являются случайными, являются изъязвление, кровотечение, поражение двенадцатиперстной кишки. спазм, отек слизистой оболочки, утолщение складок двенадцатиперстной кишки. В случае заражения анкилостомой также важную роль играет эндоскопия верхних отделов пищеварительного тракта.[22]

Стринг-тест (капсула для энтеротеста)

В случае инфекции S. stercoralis из-за неравномерного выделения личинок с калом, особенно при хронической низкой инфекции, материал двенадцатиперстной кишки можно исследовать на предмет наличие личинок. Вкратце, нейлоновая нить, свернутая внутри желатиновой капсулы с прокладкой, проглатывается, и капсула доставляется в двенадцатиперстную кишку. Затем линия оттягивается назад с прилипшей окрашенной желчью дуоденальной слизью.[22]

  1. Диагностическая радиология: При аскаридозе могут визуализироваться кишечные ходы гельминтов.Это может быть особенно очевидно, когда два червяка лежат параллельно, как «линии троллейбуса». Также могут наблюдаться аппендицит и холецистит. При анкилостомозе отмечают гиперподвижность кишечника, дилатацию проксимального отдела тощей кишки, огрубение складок слизистой оболочки. При инфекции, вызванной S. stercoralis , могут наблюдаться изменения от нормального вида желудочно-кишечного тракта или легкого отека с утолщенными складками до значительного расширения слизистой оболочки тонкой кишки со стриктурами у гиперинфицированных пациентов [22]

  2. Гистологические исследования: это может также подтверждают диагноз, обнаруживая личинки, яйца или иногда взрослые формы, преимущественно в желудочных или двенадцатиперстных криптах вместе с эозинофильной инфильтрацией[22]

  3. Внутрикожные кожные тесты.Сообщалось, что реакция гиперчувствительности немедленного типа на различные соматические и экскреторные/секреторные антигены является надежным кожным тестом для диагностики стронгилоидоза. Основными недостатками являются перекрестные реакции и постоянство после лечения. [22]

Таким образом, геогельминтозы представляют собой серьезную проблему общественного здравоохранения, и их следует надлежащим образом диагностировать и лечить, чтобы значительно снизить смертность и заболеваемость. Необходимо разработать и утвердить новые, быстрые, чувствительные и специфические тесты для обнаружения ППГ.

Финансовая поддержка и спонсорство

Нет.

Конфликт интересов

Конфликт интересов отсутствует.

ССЫЛКИ

1. Всемирная организация здравоохранения. Инвестиции для преодоления глобального воздействия забытых тропических болезней: Третий доклад ВОЗ о забытых болезнях. Женева, Швейцария: ВОЗ Press; 2015. С. 1–191. [Google Академия]2. Пуллан Р.Л., Смит Дж.Л., Ясрасария Р., Брукер С.Дж. Глобальные показатели инфицирования и бремени болезней, вызванных гельминтозами, передающимися через почву, в 2010 г.Векторы паразитов. 2014;7:37. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]3. Всемирная организация здоровья. Элиминация передающихся через почву гельминтозов как проблемы общественного здравоохранения у детей, Отчет о ходе работы на 2001-2010 гг. и Стратегический план на 2011-2020 гг. Женева, Швейцария: ВОЗ Press; 2012. С. 1–78. [Google Академия]4. Tarafder MR, Carabin H, Joseph L, Balolong E, Jr, Olveda R, McGarvey ST. Оценка чувствительности и специфичности метода исследования стула Като-Каца для выявления анкилостомоза, инфекций Ascaris lumbricoides и Trichuris trichiura у людей при отсутствии «золотого стандарта».Int J Паразитол. 2010;40:399–404. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]5. Чизбро М. Прямая лабораторная практика в тропических странах (часть 1) Нью-Йорк: Издательство Кембриджского университета; 2009. С. 29–35. [Google Академия]7. Гарсия Л.С. Диагностическая медицинская паразитология. 4-е изд. Вашингтон, округ Колумбия: ASM Press; 2001. стр. 786–801. [Google Академия]8. Амоа И.Д., Сингх Г., Стенстрем Т.А., Редди П. Обнаружение и количественная оценка гельминтов, передающихся через почву, в образцах окружающей среды: обзор современного состояния и будущих перспектив. Acta Trop. 2017; 169:187–201. [PubMed] [Google Scholar]9. Комитет экспертов ВОЗ. Профилактика и борьба с шистосомозом и передающимися через почву гельминтозами. Представитель World Health Organ Tech Rep. 2002;912:i. [PubMed] [Google Scholar] 10. Кнопп С., Мгени А.Ф., Хамис И.С., Стейнманн П., Стотард Дж.Р., Роллинсон Д. и соавт. Диагностика передающихся через почву гельминтов в эпоху профилактической химиотерапии: влияние многократного отбора образцов стула и использования различных диагностических методов. PLoS Negl Trop Dis. 2008;2:e331. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]11.Tarafder MR, Carabin H, Joseph L, Balolong E, Jr, Olveda R, McGarvey ST. Оценка чувствительности и специфичности метода исследования стула Като-Каца для выявления анкилостомоза, инфекций Ascaris lumbricoides и Trichuris trichiura у людей при отсутствии «золотого стандарта». Int J Паразитол. 2010;40:399–404. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]12. Николай Б., Брукер С. Дж., Пуллан Р.Л. Чувствительность диагностических тестов на гельминтозы человека, передающиеся через почву: метаанализ в отсутствие истинного золотого стандарта.Int J Паразитол. 2014;44:765–74. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]13. Albonico M, Rinaldi L, Sciascia S, Morgoglione ME, Piemonte M, Maurelli MP, et al. Сравнение трех копромикроскопических методов для оценки эффективности альбендазола против передающихся через почву гельминтозов у ​​детей школьного возраста на острове Пемба. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2013; 107: 493–501. [PubMed] [Google Scholar] 14. Vadlejch J, Petrtýl M, Zaichenko I, Cadková Z, Jankovská I, Langrová I, et al. Какой метод подсчета яиц по МакМастеру является наиболее надежным? Паразитол рез.2011; 109:1387–94. [PubMed] [Google Scholar] 15. Utzinger J, Rinaldi L, Lohourignon LK, Rohner F, Zimmermann MB, Tschannen AB, et al. FLOTAC: новый чувствительный метод диагностики анкилостомозов у ​​людей. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2008; 102:84–90. [PubMed] [Google Scholar] 16. Кнопп С., Глинц Д., Ринальди Л., Мохаммед К.А., Н’Горан Э.К., Стотард Дж.Р. и соавт. FLOTAC: Перспективный метод обнаружения яиц гельминтов в фекалиях человека. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2009; 103:1190–4. [PubMed] [Google Scholar] 17.Барда Б.Д., Ринальди Л., Янниелло Д., Зеферин Х., Сальво Ф., Садутшанг Т. и др. Mini-FLOTAC, инновационный метод прямой диагностики кишечных паразитарных инфекций: практический опыт. PLoS Negl Trop Dis. 2013;7:e2344. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]18. Knopp S, Rinaldi L, Khamis IS, Stothard JR, Rollinson D, Maurelli MP, et al. Один FLOTAC более чувствителен, чем тройной анализ Kato-Katz, для диагностики вялотекущих гельминтозов, передающихся через почву. Trans R Soc Trop Med Hyg.2009; 103: 347–54. [PubMed] [Google Scholar] 19. Albonico M, Ame SM, Vercruysse J, Levecke B. Сравнение толстого мазка Kato-Katz и методов подсчета яиц McMaster для мониторинга эффективности лекарств против передаваемых через почву гельминтов у школьников на острове Пемба, Танзания. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2012;106:199–201. [PubMed] [Google Scholar] 20. Кога К., Касуя С., Кхамбуонруанг С., Сухават К., Иеда М., Такацука Н. и др. Модифицированный метод чашек с агаром для обнаружения Strongyloides stercoralis .Am J Trop Med Hyg. 1991; 45: 518–21. [PubMed] [Google Scholar] 22. Requena-Méndez A, Chiodini P, Bisoffi Z, Buonfrate D, Gotuzzo E, Muñoz J. Лабораторная диагностика и последующее наблюдение за стронгилоидозом: систематический обзор. PLoS Negl Trop Dis. 2013;7:e2002. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]23. Buonfrate D, Formenti F, Perandin F, Bisoffi Z. Новые подходы к диагностике инфекции Strongyloides stercoralis . Клиническая микробиология и инфекции. 2015; 21: 543–52. [PubMed] [Google Scholar] 24.Ramanathan R, Burbelo PD, Groot S, Ladarola MJ, Neva FA, et al. Анализ систем иммунопреципитации люциферазы повышает чувствительность и специфичность диагностики инфекции Strongyloides stercoralis . J заразить Dis. 2008; 198:444–51. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]25. Джонсон М.Дж., Бенке Дж.М., Коулз Г.К. Обнаружение желудочно-кишечных нематод с помощью ИФА с захватом копроантигенов. рез. вет. 1996; 60:7–12. [PubMed] [Google Scholar] 27. Бунгиро Р.Д., младший, Каппелло М. Обнаружение экскреторных/секреторных копроантигенов при экспериментальной инфекции анкилостомы.Am J Trop Med Hyg. 2005; 73: 915–20. [PubMed] [Google Scholar] 29. Гордон К.А., Грей ДиДжей, Гоберт Г.Н., Макманус Д.П. Подходы амплификации ДНК для диагностики основных паразитарных гельминтозов человека. Молекулярные зонды. 2011; 25:143–52. [PubMed] [Google Scholar] 30. Аль-Суд В. А., Уис И. С., Ли Д. К., Люнг С., Вадстром Т. Характеристика ингибирующего действия желчи на ПЦР для оптимизации обнаружения видов Helicobacter с помощью ПЦР в реальном времени. FEMS Immunol Med Microbiol. 2005; 44: 177–82. [PubMed] [Google Scholar] 31.Басс Д., Стентифорд Г.Д., Литтлвуд Д.Т., Хартикайнен Х. Разнообразное применение методов ДНК окружающей среды в паразитологии. Тенденции Паразитол. 2015; 31: 499–513. [PubMed] [Google Scholar] 32. Гьявали П., Ахмед В., Джагалс П., Сидху Дж. П., Тозе С. Сравнение методов концентрации для быстрого обнаружения яиц анкилостомы в матрицах сточных вод с использованием количественной ПЦР. Опыт Паразитол. 2015;159:160–7. [PubMed] [Google Scholar] 33. Дарлан Д.М., Тала З.З., Аманта С., Варли С.М., Аррасид Н.К. Корреляция между заражением гельминтами, передающимися через почву, и уровнями эозинофилов у детей начальной школы в Медане.Открытый доступ Maced J Med Sci. 2017;5:142–146. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]34. Ашрафи К., Тахбаз А., Рахмати Б. Strongyloides stercoralis : наиболее распространенная паразитарная причина эозинофилии в провинции Гилан, Северный Иран. Иран J Параситол. 2010;5:40–7. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]35. Кучик С.Дж., Мартин Г.Л., Сортор Б.В. Обычные кишечные паразиты. Ам семейный врач. 2004;69:1161–8. [PubMed] [Google Scholar] 36. Джиеро С., Али М. , Пасарибу С., Пасарибу А.П. Взаимосвязь между количеством эозинофилов и геминогенной инфекцией у детей.Азиатский Pac J Trop Dis. 2015;5:813–6. [Google Scholar]

Лабораторная диагностика почвенных гельминтозов

Троп Паразитол. 2017 июль-декабрь; 7(2): 86–91.

Sumeeta Khurana

Отделение медицинской паразитологии, Институт последипломного медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия Медицинская паразитология, Институт последипломного медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия

Адрес для корреспонденции: Dr.Сумита Курана, отделение медицинской паразитологии, Институт последипломного образования медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия. Электронная почта: [email protected]

Поступила в редакцию 16 июня 2017 г.; Принято 25 сентября 2017 г.

Эта статья находится в открытом доступе и распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 3. 0, которая позволяет другим микшировать, настраивать и развивать произведение в некоммерческих целях, если автор указан, и новые творения лицензируются на тех же условиях.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Аннотация

Гельминты

включают в себя, I.E., Hookworms ( ancylostoma duodeNale , Necator anmicanicus ), круглый червя ( аскарикоидов ), кнут ( трихурис трихюра ) и синтинтоины STERCORALIS . Во всем мире около 1,5 миллиарда человек инфицированы ППГ. ППГ способствуют значительному нарушению умственного и физического развития, особенно в развивающихся странах.К сожалению, эти инфекции в основном остаются недиагностированными из-за отсутствия подготовленного персонала и соответствующих технологий. Периодическое выделение яиц или личинок еще больше затрудняет диагностику. Таким образом, существует острая необходимость в быстрых и точных тестах для диагностики ППГ. Методы диагностики включают традиционные и молекулярные методы. Обычные методы включают микроскопию, посев и подсчет яиц. Серология играет важную роль, особенно в случае S. stercoralis, когда традиционные методы имеют очень низкую чувствительность.Быстрые, высокочувствительные молекулярные методы, особенно количественная полимеразная цепная реакция, делают его пригодным для диагностики ППГ по сравнению с нечувствительными, а также трудоемкими традиционными методами. До сих пор молекулярное обнаружение ППГ в основном ограничивалось исследовательскими установками, но теперь есть рекомендация принять молекулярные тесты в программах элиминации ППГ Всемирной организации здравоохранения. Таким образом, инфекции, вызываемые ППГ, являются важной проблемой общественного здравоохранения, и их необходимо надлежащим образом диагностировать и лечить, чтобы значительно снизить смертность и заболеваемость.

Ключевые слова: 5 Ключевые слова: Диагностика, Гельминты, почва

Введение

Гельминты, передаваемые на почве, передаваемые по почве. , власоглав ( Trichuris trichiura ) и Strongyloides stercoralis , хотя Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) формально не включает S. stercoralis в список ППГ.ППГ были включены в список ВОЗ из 17 забытых тропических болезней (ЗТБ) из-за связанной с ними бедности, значительной заболеваемости и потери DALY. Большинство инфекций происходит в тропических и субтропических странах, включая Индию. Во всем мире около 1,5 миллиарда человек инфицированы ППГ.[1] Аскаридоз зарегистрирован у 771,7–891,6 млн человек, трихоцефалез — у 429,6–508 млн человек, около 406,3–480,2 млн инфицированы анкилостомами.[2] ППГ способствуют значительному нарушению умственного и физического развития и анемии, особенно у детей.Инфекции ППГ часто протекают бессимптомно, но иногда приводят к тяжелым желудочно-кишечным (ЖКТ) симптомам. ВОЗ поставила цель к 2020 году ликвидировать геогельминтозы как проблему общественного здравоохранения у детей.[3]

Большинство паразитарных заболеваний нельзя диагностировать только с помощью физического осмотра, необходимы лабораторные исследования. К сожалению, эти инфекции в основном остаются недиагностированными из-за отсутствия подготовленного персонала и соответствующих технологий. Периодическое выделение яиц или личинок еще больше затрудняет диагностику.Таким образом, существует острая необходимость в быстрых и точных тестах для диагностики ППГ. Поскольку не существует адекватного золотого стандарта для обнаружения геогельминтозов, это еще больше затрудняет сравнение и стандартизацию любого нового метода.[4] Методы диагностики включают традиционные и молекулярные методы. Кроме того, количественная оценка гельминтной нагрузки также важна для оценки интенсивности инфекции и прогноза.

ОБЫЧНАЯ ДИАГНОСТИКА

Традиционно ППГ диагностируют путем исследования фекалий или других образцов желудочно-кишечного тракта на наличие яиц гельминтов, личинок или иногда взрослых червей или их сегментов.Из-за периодического откладывания яиц и/или личинок для обнаружения паразитов требуется несколько образцов (не менее 3), собранных в течение 10 дней. [5] Свежий образец фекалий объемом приблизительно большая чайная ложка или около 10 мл образца жидкого стула должен быть доставлен в лабораторию в течение 1 часа после сбора.

Общий осмотр

Образец следует исследовать на цвет, консистенцию (сформировавшийся/полуформованный/неоформленный/водянистый), наличие червей или сегментов, наличие гноя или крови и т. д.

Методы, основанные на микроскопии

Прямая микроскопия

Сделайте гладкий, тонкий препарат (с физиологическим раствором и йодом) и накройте покровным стеклом. В случае дизентерийных и несформировавшихся образцов выберите часть образца, которая содержит кровь и слизь, чтобы сделать мазок, и без добавления физиологического раствора или красителя накройте покровным стеклом.[5] Изучите препарат под микроскопом, чтобы выявить наличие личинок или яиц гельминтов. Их следует внимательно наблюдать на предмет их формы, размера, окрашивания желчью и т. д., Яйца A. lumbricoides окрашены желчью, а яйца других ППГ — нет. Оплодотворенные яйца A. lumbricoides округлые, длиной от 45 до 75 мкм, имеют толстую скорлупу с наружным сосцевидным слоем. В некоторых случаях наружный слой отсутствует (декорированные яйца). Неоплодотворенные яйца имеют удлиненную форму и крупнее оплодотворенных яиц (~90 мкм), их скорлупа тоньше, а сосочковый слой более изменчив, либо с большими выпуклостями, либо практически без них.[6] Яйца Ancylostoma и Necator не поддаются микроскопической дифференциации.Яйца с тонкой скорлупой, бесцветные, размером 60–75 × 35–40 мкм. Яйца T. trichiura имеют размер 50–55 × 20–25 мкм, бочкообразную форму с толстой скорлупой и пару полярных «заглушек» на каждом конце. В случае S. stercoralis наблюдаются личинки без оболочки размером 200–250 мкм × 16 мкм. Они показывают типичный рабдитовидный пищевод с большим утолщением.[5] Если образец стула остается в теплой и влажной среде более 24 часов, из яиц анкилостомы могут вылупиться личинки. Их необходимо дифференцировать от личинок S. stercoralis . [7] При инфекции T. trichiura в стуле могут присутствовать эозинофилы и кристаллы Шарко-Лейдена.

Методы концентрирования фекалий

Если количество микроорганизмов в фекалиях меньше, то по возможности следует концентрировать кал. Наиболее рекомендуемой процедурой является метод концентрации формального эфира (FEC). Формалин-эфирный раствор, который имеет меньший удельный вес, чем паразитические организмы, что приводит к концентрации последних в осадке.[8] Методы флотации (флотация сульфатом цинка, флотация насыщенным хлоридом натрия и др.) широко не используются, потому что неоплодотворенные яйца Ascaris и личинки Strongyloides не плавают и, следовательно, не могут быть легко извлечены этим методом.

Подсчет яиц

Метод Като-Каца

Это наиболее распространенный метод, используемый для количественного определения яиц гельминтов. ВОЗ рекомендует исследовать дубликаты препаратов по методу Като-Каца (К-К). [9] Предметные стекла необходимо исследовать через 40–60 мин после очистки глицерином, в противном случае яйца анкилостомы имеют тенденцию разрушаться и исчезать.Количество яиц гельминтов на грамм стула (ЭПГ) в качестве стандартного показателя интенсивности инфекции рассчитывается как: количество яиц в мазке × 24 [10].

По данным ВОЗ, 5000 и 50 000 EPG для A. lumbricoides , 2000 и 4000 EPG для анкилостомы и 1000 и 10 000 EPG для T. trichiura являются пороговыми значениями для умеренных и тяжелых инфекций, соответственно [10]. ] K-K хорош для обнаружения инфекций A. lumbricoides и T. trichiura , но имеет относительно низкую чувствительность для обнаружения яиц анкилостомы, потому что яйца анкилостомы имеют тенденцию распадаться, если есть временная задержка в исследовании образцов.[11] В настоящее время это наиболее широко используемый метод в полевых эпидемиологических исследованиях из-за его низкой стоимости и относительно низкого уровня требуемых навыков. [12]

Метод Макмастера

Это еще один метод подсчета яиц, который сравнительно легко стандартизировать, чем К-К, и его эффективность также сопоставима[13]. Здесь известный объем фекальной взвеси исследуется под микроскопом с использованием счетной камеры. После этого количество EPG рассчитывается как: Общее количество яиц или ооцист × 50.[14] Здесь яйца плавают без мусора; отсюда и преимущество относительно быстрого подсчета. Единственным недостатком здесь является необходимость специальной счетной камеры.

Методы FLOTAC и mini-FLOTAC

Это недавно разработанные новые методы подсчета фекальных яиц. Здесь аппарат FLOTAC ® (Университет Неаполя, Италия) используется для проведения флотации образца в центрифуге с последующим отсечением апикальной части флотирующей суспензии и количественным определением яиц.[15] Основным преимуществом является его поливалентность, поэтому его можно использовать для одновременного обнаружения различных гельминтов, а также кишечных простейших. [16] FLOTAC имеет много практических недостатков, включая высокую стоимость, потребность в центрифуге и длительное время процедуры подготовки проб, что снижает его ценность как единственного диагностического метода. В настоящее время проводятся исследования для проверки этой методики. Был разработан метод Mini-FLOTAC, упрощенная форма FLOTAC, которая оптимальна в условиях ограниченных возможностей.[17] В предыдущих исследованиях предполагалось, что чувствительность mini-FLOTAC сравнима с K-K, но ниже, чем у FLOTAC. Дополнительным преимуществом является то, что это можно использовать с сохраненными образцами фекалий.[12]

СРАВНЕНИЕ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ НА ОСНОВЕ МИКРОСКОПИИ

В ходе метаанализа сравнивались различные методы микроскопии в областях низкой и высокой интенсивности.[12] Это сравнение было основано на байесовской модели латентного класса, предполагая вероятностную модель взаимосвязи, и результаты представлены в .

Таблица 1

Сравнение чувствительности (%) различных методов, основанных на микроскопии[12]

Метод FLOTAC показал в целом самую высокую чувствительность среди всех. Чувствительность была сопоставима как для методов Mini-FLOTAC, так и для методов K-K. Прямая микроскопия имела наименьшую чувствительность. Чувствительность теста сильно различалась в зависимости от интенсивности инфекции (группы низкой и высокой интенсивности) для всех тестов, особенно для метода КК, где чувствительность была ниже в группе низкой интенсивности по сравнению с группой высокой интенсивности (группа высокой чувствительности, 74–95%). ).Это изменение необходимо учитывать при выборе любого диагностического теста в определенных условиях.[12]

Сравнение среднего количества яиц с помощью различных методов показывает, что метод К-К оценивает большее количество яиц по сравнению с методом FLOTAC. Метод FLOTAC обычно занижает среднее количество яиц.[18] В методе McMaster также наблюдалось более высокое количество яиц по сравнению с K-K, особенно в случаях заражения T. trichiura и анкилостомозом.stercoralis , который является живородящим, в то время как анкилостомы можно искусственно культивировать в лаборатории для получения рабдитоподобных личинок. Существует множество методов, некоторые из которых устарели, а другие используются в исследовательских целях.

Культура на полосках фильтровальной бумаги Harada-Mori

Первоначально она была представлена ​​Харада и Мори в 1955 году.[7] Для этого метода требуется фильтровальная бумага, на которую добавляют фекальный материал, и пробирка с небольшим количеством воды, в которую он вставляется. После инкубации в подходящей среде происходит вылупление яйцеклеток и/или развитие личинок.В дополнение к низкой чувствительности 28% другим недостатком является то, что охлажденный или законсервированный образец нельзя использовать для культивирования. Кроме того, фильтровальная бумага, содержащая инфекционных личинок, представляет биологическую опасность.[7]

Фильтровальная бумага/метод скошенной культуры (чашка Петри)

Этот метод очень похож на метод Харада-Мори, с той лишь разницей, что это метод на основе предметного стекла, при котором предметное стекло, содержащее свежий фекальный материал, помещается в стеклянную или пластиковую чашку Петри. блюдо с водой. Этот метод позволяет проводить прямой осмотр с помощью препаровального микроскопа для поиска личинок.[7]

Культура на древесном угле

Это еще один способ культивирования с использованием гранулированного древесного угля. Древесный уголь обеспечивает среду для развития личинок, которая имитирует условия в природе.[7]

Культура на чашках с агаром Кога

В основном используется для культивирования S. stercoralis . Образец стула помещают на чашку с агаром и инкубируют во влажной камере при температуре окружающей среды. После инкубации чашки исследуют на наличие личинок S.stercoralis под световым микроскопом. Когда личинки ползают по агару, они несут с собой бактерии. Это создает видимые следы над агаром. Планшеты промывают 10% раствором ацетилформалина. Элюент центрифугируют, а осадок исследуют под микроскопом.[20] Этих личинок следует отличать от личинок анкилостомы. Это более чувствительно, чем методы прямого мазка и концентрации кала.

Техника культивирования Бермана

В основном используется для S.обнаружение личинок stercoralis . Образец стула размером с грецкий орех (10 г) помещают на марлю, которую помещают в стеклянную воронку и заливают водопроводной водой. Через 2 ч жидкость со дна собирают, центрифугируют и удаляют надосадочную жидкость. Осадок исследуют под микроскопом при увеличении в 400 раз, чтобы подтвердить наличие личинок.[7,10] Хотя этот метод требует меньше времени, требуется трудоемкость и большое количество стула, которого может не быть.[7]

Недостатки методов культивирования включают необходимость технического опыта, сложность выполнения в полевых условиях и более продолжительное время.Кроме того, старые и охлажденные образцы не подходят.[7]

Анализы на основе серологии

В ситуациях, когда образцы кала недоступны, в диагностике может помочь серология. Они делятся на две категории: анализы на обнаружение антигена и анализы на обнаружение антител. К ним относятся твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) и его производные формы, такие как скрининговый тест Falcon Assay ELISA, Dot-ELISA, система иммунопреципитации люциферазы (LIPS), непрямой иммунофлуоресцентный тест на антитела (IFAT) или прямой иммунофлуоресцентный тест на антитела, иммуноблоттинг, и некоторые экспресс-иммунохроматографические тесты (ДЭТ).[21]

Недостатками, связанными с серодиагностикой, являются ее более инвазивный характер, антитела, как правило, остаются стойкими после лечения и, таким образом, могут не указывать на активную инфекцию, перекрестную реакцию с другими нематодами, особенно с филяриатозными инфекциями.[22] Однако серология играет важную роль в диагностике инфекции S. stercoralis . Он размножается внутри хозяина, что приводит к хронической инфекции с широким спектром клинических проявлений, начиная от бессимптомной стадии и заканчивая опасной для жизни гиперинфекцией из-за диссеминации личинок, особенно у пациентов с ослабленным иммунитетом. Обычные диагностические тесты имеют очень низкую чувствительность у этих пациентов. Однократное прямое исследование мазка кала (DS) не позволяет выявить почти 70% случаев, но исследование нескольких образцов улучшает чувствительность.[22] Здесь серологические методы имеют более высокую чувствительность по сравнению с другими традиционными паразитологическими тестами (81–98%). В последнее время широко используется разработанная непрямая иммунофлуоресцентная микроскопия (IFAT) с чувствительностью 97% и специфичностью 98%.[22] Требование наличия целых живых инфекционных личинок является основным недостатком IFAT, и для преодоления этого недостатка был разработан тест агглютинации желатиновых частиц с заявленной чувствительностью 81% и специфичностью 74%.[22] С использованием иммунодоминантного антигена S. stercoralis и S. ratti были разработаны иммуноблот-тесты, которые показали чувствительность от 65 до 100%. [23] Было разработано несколько ИФА, которые продемонстрировали лучшую чувствительность (94%) по сравнению с IFAT. Недавно был разработан LIPS, который продемонстрировал очень хорошую чувствительность (97%) и специфичность (100%).[22] Эта техника может быть выполнена относительно быстро (2,5 часа), и еще более быстрая версия (<2 минут) находится в стадии изучения.[24]

Обнаружение копроантигена

Анализы на копроантиген давно разрабатывались для диагностики ряда кишечных инфекций человека и животных. Для ППГ они в основном доступны для Strongyloides и анкилостомы. Поликлональная кроличья антисыворотка, созданная против экскреторного/секреторного (Э/С) антигена Strongyloides ratti и нанесенная на микротитровальные планшеты для захвата фекального антигена.[25] Strongyloides coproAg остается стабильным при замораживании в виде экстрагированных формалином фекальных супернатантов, хранящихся при температуре -20°C.Существует множество испытаний по превращению копроИФА на основе копроАг Strongyloides в экспресс-ДЭТ, многие из них также коммерчески доступны.[26] Сообщается, что чувствительность обнаружения антигена S. stercoralis составляет 0,5 мг/мл.[26] Антитело IgG, выработанное против Ancylostoma ceylanicum ES, используется для захвата копроантигенов анкилостомы. Это позволяет обнаруживать белки ЭС от 10 нг/мл до 10 мкг/мл.[27]

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ПОДХОДЫ

Достижения в области молекулярных методов обеспечили быстрое обнаружение, а также точное количественное определение яйцеклеток ППГ.Гораздо более высокая чувствительность молекулярных методов делает их особенно полезными для мониторинга эффективности лечения или стратегий контроля. Молекулярными мишенями, используемыми в основном, являются ITS-1, ITS-2, 18S и т. д. Доступно несколько различных методов, основанных на полимеразной цепной реакции (ПЦР), т. е. обычная ПЦР, количественная ПЦР (кПЦР), мультиплексная ПЦР-реакция и т. д. [28,29] Существует множество технических проблем, связанных с молекулярными методами. Образцы стула содержат большое количество взвешенных веществ, желчных кислот и т. д., что может ингибировать молекулярные реакции.[30] Это препятствие можно преодолеть, используя этап флотации или осаждения перед процессом экстракции.[31] Многие наборы для выделения нуклеиновых кислот были разработаны с дополнительными этапами удаления ингибитора. Другая проблема заключается в том, что яичная скорлупа яиц ППГ намного прочнее, чем клеточные стенки бактерий, что приводит к низкому выходу нуклеиновой кислоты. Разрушению яичной скорлупы можно способствовать с помощью таких методов, как обработка ультразвуком или гомогенизация тканей с помощью устойчивых к разложению гранул и т. д.[32] Несмотря на ограничения, молекулярные тесты оказались более чувствительными, чем обычные методы, при обнаружении очень небольшого количества яиц.[8] С продвижением вперед можно обнаружить несколько паразитов с помощью мультиплексной ПЦР за один раз, но они, как правило, отстают по чувствительности по сравнению с одиночными анализами.

СРАВНЕНИЕ ОБЫЧНЫХ И МОЛЕКУЛЯРНЫХ МЕТОДОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ППГ

Быстрые и высокочувствительные свойства количественной ПЦР делают ее более подходящей для диагностики геогельминтозов по сравнению с нечувствительными, а также трудоемкими старыми традиционными методами.Во многих исследованиях сравнивалась чувствительность обоих методов. Согласно этим исследованиям, для A. lumbricoides микроскопия имела чувствительность 70–88%, тогда как молекулярные тесты имели чувствительность 85–100%; для анкилостомы чувствительность микроскопии составила 30–88% по сравнению с молекулярными методами с чувствительностью 75–100%; для S. stercoralis чувствительность микроскопии составила 16–50% по сравнению с молекулярными методами 76–93%; для T. trichiura микроскопия имела чувствительность 88%, в то время как молекулярные методы имели заявленную чувствительность 100%.[28]

До сих пор молекулярное обнаружение СТГ в основном ограничивалось исследовательскими установками. Однако теперь, учитывая его точность и экономическую эффективность, рекомендуется использовать молекулярные тесты и в программах элиминации геогельминтозов ВОЗ.

ДРУГИЕ МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕТОДЫ

Были введены некоторые новые тесты, например:

  1. Петлевая изотермическая амплификация: Действовать как более дешевая альтернатива, поскольку здесь для реакции используется водяная баня вместо дорогого термоциклера[8]

  2. Капельная цифровая ПЦР, технология ПЦР третьего поколения, была представлена ​​для абсолютного количественного определения генов-мишеней, применимых к патогенам.[8]

ДРУГИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ

  1. Гемограмма: Эозинофилия (>600 мкл или >6% данных тонкослойной хроматографии) может быть использована в качестве маркера инфекции ППГ. Во многих исследованиях показана корреляция между инфекцией ППГ и эозинофилией, которая обычно наблюдается примерно в 47% случаев аскаридоза, 78% случаев трихоцефалеза и 82% случаев стронгилоидоза, до 60% случаев анкилостомоза [33,34,35]. ,36] Низкий гемоглобин ≤5 г/дл (60%) и низкая концентрация ферритина (33%) (из-за железодефицитной анемии) могут наблюдаться у пациентов с инвазией анкилостомозом[7]

  2. Анализ скрытой крови: Скрытая кровь в кале у пациентов с тяжелой анемией вследствие хронической анкилостомозной инфекции использовалась в качестве суррогатного маркера[37]

  3. Другие образцы: в случае аскаридоза, анкилостомы или S.sterocoralis, в фазе миграции личинок инфекции диагноз можно поставить, найдя личинок в мокроте или смывах желудка. При аскаридозе в мокроте могут быть обнаружены кристаллы Шарко-Лейдена и эозинофилы [7]

  4. Эндоскопия: В случае S. stercoralis наиболее частыми эндоскопическими находками, которые обычно являются случайными, являются изъязвление, кровотечение, поражение двенадцатиперстной кишки. спазм, отек слизистой оболочки, утолщение складок двенадцатиперстной кишки. В случае заражения анкилостомой также важную роль играет эндоскопия верхних отделов пищеварительного тракта.[22]

Стринг-тест (капсула для энтеротеста)

В случае инфекции S. stercoralis из-за неравномерного выделения личинок с калом, особенно при хронической низкой инфекции, материал двенадцатиперстной кишки можно исследовать на предмет наличие личинок. Вкратце, нейлоновая нить, свернутая внутри желатиновой капсулы с прокладкой, проглатывается, и капсула доставляется в двенадцатиперстную кишку. Затем линия оттягивается назад с прилипшей окрашенной желчью дуоденальной слизью.[22]

  1. Диагностическая радиология: При аскаридозе могут визуализироваться кишечные ходы гельминтов.Это может быть особенно очевидно, когда два червяка лежат параллельно, как «линии троллейбуса». Также могут наблюдаться аппендицит и холецистит. При анкилостомозе отмечают гиперподвижность кишечника, дилатацию проксимального отдела тощей кишки, огрубение складок слизистой оболочки. При инфекции, вызванной S. stercoralis , могут наблюдаться изменения от нормального вида желудочно-кишечного тракта или легкого отека с утолщенными складками до значительного расширения слизистой оболочки тонкой кишки со стриктурами у гиперинфицированных пациентов [22]

  2. Гистологические исследования: это может также подтверждают диагноз, обнаруживая личинки, яйца или иногда взрослые формы, преимущественно в желудочных или двенадцатиперстных криптах вместе с эозинофильной инфильтрацией[22]

  3. Внутрикожные кожные тесты.Сообщалось, что реакция гиперчувствительности немедленного типа на различные соматические и экскреторные/секреторные антигены является надежным кожным тестом для диагностики стронгилоидоза. Основными недостатками являются перекрестные реакции и постоянство после лечения.[22]

Таким образом, геогельминтозы представляют собой серьезную проблему общественного здравоохранения, и их следует надлежащим образом диагностировать и лечить, чтобы значительно снизить смертность и заболеваемость. Необходимо разработать и утвердить новые, быстрые, чувствительные и специфические тесты для обнаружения ППГ.

Финансовая поддержка и спонсорство

Нет.

Конфликт интересов

Конфликт интересов отсутствует.

ССЫЛКИ

1. Всемирная организация здравоохранения. Инвестиции для преодоления глобального воздействия забытых тропических болезней: Третий доклад ВОЗ о забытых болезнях. Женева, Швейцария: ВОЗ Press; 2015. С. 1–191. [Google Академия]2. Пуллан Р.Л., Смит Дж.Л., Ясрасария Р., Брукер С.Дж. Глобальные показатели инфицирования и бремени болезней, вызванных гельминтозами, передающимися через почву, в 2010 г.Векторы паразитов. 2014;7:37. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]3. Всемирная организация здоровья. Элиминация передающихся через почву гельминтозов как проблемы общественного здравоохранения у детей, Отчет о ходе работы на 2001-2010 гг. и Стратегический план на 2011-2020 гг. Женева, Швейцария: ВОЗ Press; 2012. С. 1–78. [Google Академия]4. Tarafder MR, Carabin H, Joseph L, Balolong E, Jr, Olveda R, McGarvey ST. Оценка чувствительности и специфичности метода исследования стула Като-Каца для выявления анкилостомоза, инфекций Ascaris lumbricoides и Trichuris trichiura у людей при отсутствии «золотого стандарта».Int J Паразитол. 2010;40:399–404. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]5. Чизбро М. Прямая лабораторная практика в тропических странах (часть 1) Нью-Йорк: Издательство Кембриджского университета; 2009. С. 29–35. [Google Академия]7. Гарсия Л.С. Диагностическая медицинская паразитология. 4-е изд. Вашингтон, округ Колумбия: ASM Press; 2001. стр. 786–801. [Google Академия]8. Амоа И.Д., Сингх Г., Стенстрем Т.А., Редди П. Обнаружение и количественная оценка гельминтов, передающихся через почву, в образцах окружающей среды: обзор современного состояния и будущих перспектив.Acta Trop. 2017; 169:187–201. [PubMed] [Google Scholar]9. Комитет экспертов ВОЗ. Профилактика и борьба с шистосомозом и передающимися через почву гельминтозами. Представитель World Health Organ Tech Rep. 2002;912:i. [PubMed] [Google Scholar] 10. Кнопп С., Мгени А.Ф., Хамис И.С., Стейнманн П., Стотард Дж.Р., Роллинсон Д. и соавт. Диагностика передающихся через почву гельминтов в эпоху профилактической химиотерапии: влияние многократного отбора образцов стула и использования различных диагностических методов. PLoS Negl Trop Dis. 2008;2:e331. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]11.Tarafder MR, Carabin H, Joseph L, Balolong E, Jr, Olveda R, McGarvey ST. Оценка чувствительности и специфичности метода исследования стула Като-Каца для выявления анкилостомоза, инфекций Ascaris lumbricoides и Trichuris trichiura у людей при отсутствии «золотого стандарта». Int J Паразитол. 2010;40:399–404. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]12. Николай Б., Брукер С.Дж., Пуллан Р.Л. Чувствительность диагностических тестов на гельминтозы человека, передающиеся через почву: метаанализ в отсутствие истинного золотого стандарта.Int J Паразитол. 2014;44:765–74. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]13. Albonico M, Rinaldi L, Sciascia S, Morgoglione ME, Piemonte M, Maurelli MP, et al. Сравнение трех копромикроскопических методов для оценки эффективности альбендазола против передающихся через почву гельминтозов у ​​детей школьного возраста на острове Пемба. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2013; 107: 493–501. [PubMed] [Google Scholar] 14. Vadlejch J, Petrtýl M, Zaichenko I, Cadková Z, Jankovská I, Langrová I, et al. Какой метод подсчета яиц по МакМастеру является наиболее надежным? Паразитол рез.2011; 109:1387–94. [PubMed] [Google Scholar] 15. Utzinger J, Rinaldi L, Lohourignon LK, Rohner F, Zimmermann MB, Tschannen AB, et al. FLOTAC: новый чувствительный метод диагностики анкилостомозов у ​​людей. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2008; 102:84–90. [PubMed] [Google Scholar] 16. Кнопп С., Глинц Д., Ринальди Л., Мохаммед К.А., Н’Горан Э.К., Стотард Дж.Р. и соавт. FLOTAC: Перспективный метод обнаружения яиц гельминтов в фекалиях человека. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2009; 103:1190–4. [PubMed] [Google Scholar] 17.Барда Б.Д., Ринальди Л., Янниелло Д., Зеферин Х., Сальво Ф., Садутшанг Т. и др. Mini-FLOTAC, инновационный метод прямой диагностики кишечных паразитарных инфекций: практический опыт. PLoS Negl Trop Dis. 2013;7:e2344. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]18. Knopp S, Rinaldi L, Khamis IS, Stothard JR, Rollinson D, Maurelli MP, et al. Один FLOTAC более чувствителен, чем тройной анализ Kato-Katz, для диагностики вялотекущих гельминтозов, передающихся через почву. Trans R Soc Trop Med Hyg.2009; 103: 347–54. [PubMed] [Google Scholar] 19. Albonico M, Ame SM, Vercruysse J, Levecke B. Сравнение толстого мазка Kato-Katz и методов подсчета яиц McMaster для мониторинга эффективности лекарств против передаваемых через почву гельминтов у школьников на острове Пемба, Танзания. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2012;106:199–201. [PubMed] [Google Scholar] 20. Кога К., Касуя С., Кхамбуонруанг С., Сухават К., Иеда М., Такацука Н. и др. Модифицированный метод чашек с агаром для обнаружения Strongyloides stercoralis .Am J Trop Med Hyg. 1991; 45: 518–21. [PubMed] [Google Scholar] 22. Requena-Méndez A, Chiodini P, Bisoffi Z, Buonfrate D, Gotuzzo E, Muñoz J. Лабораторная диагностика и последующее наблюдение за стронгилоидозом: систематический обзор. PLoS Negl Trop Dis. 2013;7:e2002. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]23. Buonfrate D, Formenti F, Perandin F, Bisoffi Z. Новые подходы к диагностике инфекции Strongyloides stercoralis . Клиническая микробиология и инфекции. 2015; 21: 543–52. [PubMed] [Google Scholar] 24.Ramanathan R, Burbelo PD, Groot S, Ladarola MJ, Neva FA, et al. Анализ систем иммунопреципитации люциферазы повышает чувствительность и специфичность диагностики инфекции Strongyloides stercoralis . J заразить Dis. 2008; 198:444–51. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]25. Джонсон М.Дж., Бенке Дж.М., Коулз Г.К. Обнаружение желудочно-кишечных нематод с помощью ИФА с захватом копроантигенов. рез. вет. 1996; 60:7–12. [PubMed] [Google Scholar] 27. Бунгиро Р.Д., младший, Каппелло М. Обнаружение экскреторных/секреторных копроантигенов при экспериментальной инфекции анкилостомы.Am J Trop Med Hyg. 2005; 73: 915–20. [PubMed] [Google Scholar] 29. Гордон К.А., Грей ДиДжей, Гоберт Г.Н., Макманус Д.П. Подходы амплификации ДНК для диагностики основных паразитарных гельминтозов человека. Молекулярные зонды. 2011; 25:143–52. [PubMed] [Google Scholar] 30. Аль-Суд В. А., Уис И. С., Ли Д. К., Люнг С., Вадстром Т. Характеристика ингибирующего действия желчи на ПЦР для оптимизации обнаружения видов Helicobacter с помощью ПЦР в реальном времени. FEMS Immunol Med Microbiol. 2005; 44: 177–82. [PubMed] [Google Scholar] 31.Басс Д., Стентифорд Г.Д., Литтлвуд Д.Т., Хартикайнен Х. Разнообразное применение методов ДНК окружающей среды в паразитологии. Тенденции Паразитол. 2015; 31: 499–513. [PubMed] [Google Scholar] 32. Гьявали П., Ахмед В., Джагалс П., Сидху Дж. П., Тозе С. Сравнение методов концентрации для быстрого обнаружения яиц анкилостомы в матрицах сточных вод с использованием количественной ПЦР. Опыт Паразитол. 2015;159:160–7. [PubMed] [Google Scholar] 33. Дарлан Д.М., Тала З.З., Аманта С., Варли С.М., Аррасид Н.К. Корреляция между заражением гельминтами, передающимися через почву, и уровнями эозинофилов у детей начальной школы в Медане.Открытый доступ Maced J Med Sci. 2017;5:142–146. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]34. Ашрафи К., Тахбаз А., Рахмати Б. Strongyloides stercoralis : наиболее распространенная паразитарная причина эозинофилии в провинции Гилан, Северный Иран. Иран J Параситол. 2010;5:40–7. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]35. Кучик С.Дж., Мартин Г.Л., Сортор Б.В. Обычные кишечные паразиты. Ам семейный врач. 2004;69:1161–8. [PubMed] [Google Scholar] 36. Джиеро С., Али М., Пасарибу С., Пасарибу А.П. Взаимосвязь между количеством эозинофилов и геминогенной инфекцией у детей.Азиатский Pac J Trop Dis. 2015;5:813–6. [Google Scholar]

Лабораторная диагностика почвенных гельминтозов

Троп Паразитол. 2017 июль-декабрь; 7(2): 86–91.

Sumeeta Khurana

Отделение медицинской паразитологии, Институт последипломного медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия Медицинская паразитология, Институт последипломного медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия

Адрес для корреспонденции: Dr.Сумита Курана, отделение медицинской паразитологии, Институт последипломного образования медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия. Электронная почта: [email protected]

Поступила в редакцию 16 июня 2017 г.; Принято 25 сентября 2017 г.

Эта статья находится в открытом доступе и распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 3.0, которая позволяет другим микшировать, настраивать и развивать произведение в некоммерческих целях, если автор указан, и новые творения лицензируются на тех же условиях.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Аннотация

Гельминты

включают в себя, I.E., Hookworms ( ancylostoma duodeNale , Necator anmicanicus ), круглый червя ( аскарикоидов ), кнут ( трихурис трихюра ) и синтинтоины STERCORALIS . Во всем мире около 1,5 миллиарда человек инфицированы ППГ. ППГ способствуют значительному нарушению умственного и физического развития, особенно в развивающихся странах.К сожалению, эти инфекции в основном остаются недиагностированными из-за отсутствия подготовленного персонала и соответствующих технологий. Периодическое выделение яиц или личинок еще больше затрудняет диагностику. Таким образом, существует острая необходимость в быстрых и точных тестах для диагностики ППГ. Методы диагностики включают традиционные и молекулярные методы. Обычные методы включают микроскопию, посев и подсчет яиц. Серология играет важную роль, особенно в случае S. stercoralis, когда традиционные методы имеют очень низкую чувствительность.Быстрые, высокочувствительные молекулярные методы, особенно количественная полимеразная цепная реакция, делают его пригодным для диагностики ППГ по сравнению с нечувствительными, а также трудоемкими традиционными методами. До сих пор молекулярное обнаружение ППГ в основном ограничивалось исследовательскими установками, но теперь есть рекомендация принять молекулярные тесты в программах элиминации ППГ Всемирной организации здравоохранения. Таким образом, инфекции, вызываемые ППГ, являются важной проблемой общественного здравоохранения, и их необходимо надлежащим образом диагностировать и лечить, чтобы значительно снизить смертность и заболеваемость.

Ключевые слова: 5 Ключевые слова: Диагностика, Гельминты, почва

Введение

Гельминты, передаваемые на почве, передаваемые по почве. , власоглав ( Trichuris trichiura ) и Strongyloides stercoralis , хотя Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) формально не включает S. stercoralis в список ППГ.ППГ были включены в список ВОЗ из 17 забытых тропических болезней (ЗТБ) из-за связанной с ними бедности, значительной заболеваемости и потери DALY. Большинство инфекций происходит в тропических и субтропических странах, включая Индию. Во всем мире около 1,5 миллиарда человек инфицированы ППГ.[1] Аскаридоз зарегистрирован у 771,7–891,6 млн человек, трихоцефалез — у 429,6–508 млн человек, около 406,3–480,2 млн инфицированы анкилостомами.[2] ППГ способствуют значительному нарушению умственного и физического развития и анемии, особенно у детей.Инфекции ППГ часто протекают бессимптомно, но иногда приводят к тяжелым желудочно-кишечным (ЖКТ) симптомам. ВОЗ поставила цель к 2020 году ликвидировать геогельминтозы как проблему общественного здравоохранения у детей.[3]

Большинство паразитарных заболеваний нельзя диагностировать только с помощью физического осмотра, необходимы лабораторные исследования. К сожалению, эти инфекции в основном остаются недиагностированными из-за отсутствия подготовленного персонала и соответствующих технологий. Периодическое выделение яиц или личинок еще больше затрудняет диагностику.Таким образом, существует острая необходимость в быстрых и точных тестах для диагностики ППГ. Поскольку не существует адекватного золотого стандарта для обнаружения геогельминтозов, это еще больше затрудняет сравнение и стандартизацию любого нового метода.[4] Методы диагностики включают традиционные и молекулярные методы. Кроме того, количественная оценка гельминтной нагрузки также важна для оценки интенсивности инфекции и прогноза.

ОБЫЧНАЯ ДИАГНОСТИКА

Традиционно ППГ диагностируют путем исследования фекалий или других образцов желудочно-кишечного тракта на наличие яиц гельминтов, личинок или иногда взрослых червей или их сегментов.Из-за периодического откладывания яиц и/или личинок для обнаружения паразитов требуется несколько образцов (не менее 3), собранных в течение 10 дней.[5] Свежий образец фекалий объемом приблизительно большая чайная ложка или около 10 мл образца жидкого стула должен быть доставлен в лабораторию в течение 1 часа после сбора.

Общий осмотр

Образец следует исследовать на цвет, консистенцию (сформировавшийся/полуформованный/неоформленный/водянистый), наличие червей или сегментов, наличие гноя или крови и т. д.

Методы, основанные на микроскопии

Прямая микроскопия

Сделайте гладкий, тонкий препарат (с физиологическим раствором и йодом) и накройте покровным стеклом. В случае дизентерийных и несформировавшихся образцов выберите часть образца, которая содержит кровь и слизь, чтобы сделать мазок, и без добавления физиологического раствора или красителя накройте покровным стеклом.[5] Изучите препарат под микроскопом, чтобы выявить наличие личинок или яиц гельминтов. Их следует внимательно наблюдать на предмет их формы, размера, окрашивания желчью и т. д., Яйца A. lumbricoides окрашены желчью, а яйца других ППГ — нет. Оплодотворенные яйца A. lumbricoides округлые, длиной от 45 до 75 мкм, имеют толстую скорлупу с наружным сосцевидным слоем. В некоторых случаях наружный слой отсутствует (декорированные яйца). Неоплодотворенные яйца имеют удлиненную форму и крупнее оплодотворенных яиц (~90 мкм), их скорлупа тоньше, а сосочковый слой более изменчив, либо с большими выпуклостями, либо практически без них.[6] Яйца Ancylostoma и Necator не поддаются микроскопической дифференциации.Яйца с тонкой скорлупой, бесцветные, размером 60–75 × 35–40 мкм. Яйца T. trichiura имеют размер 50–55 × 20–25 мкм, бочкообразную форму с толстой скорлупой и пару полярных «заглушек» на каждом конце. В случае S. stercoralis наблюдаются личинки без оболочки размером 200–250 мкм × 16 мкм. Они показывают типичный рабдитовидный пищевод с большим утолщением.[5] Если образец стула остается в теплой и влажной среде более 24 часов, из яиц анкилостомы могут вылупиться личинки. Их необходимо дифференцировать от личинок S.stercoralis . [7] При инфекции T. trichiura в стуле могут присутствовать эозинофилы и кристаллы Шарко-Лейдена.

Методы концентрирования фекалий

Если количество микроорганизмов в фекалиях меньше, то по возможности следует концентрировать кал. Наиболее рекомендуемой процедурой является метод концентрации формального эфира (FEC). Формалин-эфирный раствор, который имеет меньший удельный вес, чем паразитические организмы, что приводит к концентрации последних в осадке.[8] Методы флотации (флотация сульфатом цинка, флотация насыщенным хлоридом натрия и др.) широко не используются, потому что неоплодотворенные яйца Ascaris и личинки Strongyloides не плавают и, следовательно, не могут быть легко извлечены этим методом.

Подсчет яиц

Метод Като-Каца

Это наиболее распространенный метод, используемый для количественного определения яиц гельминтов. ВОЗ рекомендует исследовать дубликаты препаратов по методу Като-Каца (К-К).[9] Предметные стекла необходимо исследовать через 40–60 мин после очистки глицерином, в противном случае яйца анкилостомы имеют тенденцию разрушаться и исчезать.Количество яиц гельминтов на грамм стула (ЭПГ) в качестве стандартного показателя интенсивности инфекции рассчитывается как: количество яиц в мазке × 24 [10].

По данным ВОЗ, 5000 и 50 000 EPG для A. lumbricoides , 2000 и 4000 EPG для анкилостомы и 1000 и 10 000 EPG для T. trichiura являются пороговыми значениями для умеренных и тяжелых инфекций, соответственно [10]. ] K-K хорош для обнаружения инфекций A. lumbricoides и T. trichiura , но имеет относительно низкую чувствительность для обнаружения яиц анкилостомы, потому что яйца анкилостомы имеют тенденцию распадаться, если есть временная задержка в исследовании образцов.[11] В настоящее время это наиболее широко используемый метод в полевых эпидемиологических исследованиях из-за его низкой стоимости и относительно низкого уровня требуемых навыков.[12]

Метод Макмастера

Это еще один метод подсчета яиц, который сравнительно легко стандартизировать, чем К-К, и его эффективность также сопоставима[13]. Здесь известный объем фекальной взвеси исследуется под микроскопом с использованием счетной камеры. После этого количество EPG рассчитывается как: Общее количество яиц или ооцист × 50.[14] Здесь яйца плавают без мусора; отсюда и преимущество относительно быстрого подсчета. Единственным недостатком здесь является необходимость специальной счетной камеры.

Методы FLOTAC и mini-FLOTAC

Это недавно разработанные новые методы подсчета фекальных яиц. Здесь аппарат FLOTAC ® (Университет Неаполя, Италия) используется для проведения флотации образца в центрифуге с последующим отсечением апикальной части флотирующей суспензии и количественным определением яиц.[15] Основным преимуществом является его поливалентность, поэтому его можно использовать для одновременного обнаружения различных гельминтов, а также кишечных простейших.[16] FLOTAC имеет много практических недостатков, включая высокую стоимость, потребность в центрифуге и длительное время процедуры подготовки проб, что снижает его ценность как единственного диагностического метода. В настоящее время проводятся исследования для проверки этой методики. Был разработан метод Mini-FLOTAC, упрощенная форма FLOTAC, которая оптимальна в условиях ограниченных возможностей.[17] В предыдущих исследованиях предполагалось, что чувствительность mini-FLOTAC сравнима с K-K, но ниже, чем у FLOTAC. Дополнительным преимуществом является то, что это можно использовать с сохраненными образцами фекалий.[12]

СРАВНЕНИЕ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ НА ОСНОВЕ МИКРОСКОПИИ

В ходе метаанализа сравнивались различные методы микроскопии в областях низкой и высокой интенсивности.[12] Это сравнение было основано на байесовской модели латентного класса, предполагая вероятностную модель взаимосвязи, и результаты представлены в .

Таблица 1

Сравнение чувствительности (%) различных методов, основанных на микроскопии[12]

Метод FLOTAC показал в целом самую высокую чувствительность среди всех. Чувствительность была сопоставима как для методов Mini-FLOTAC, так и для методов K-K. Прямая микроскопия имела наименьшую чувствительность. Чувствительность теста сильно различалась в зависимости от интенсивности инфекции (группы низкой и высокой интенсивности) для всех тестов, особенно для метода КК, где чувствительность была ниже в группе низкой интенсивности по сравнению с группой высокой интенсивности (группа высокой чувствительности, 74–95%). ).Это изменение необходимо учитывать при выборе любого диагностического теста в определенных условиях.[12]

Сравнение среднего количества яиц с помощью различных методов показывает, что метод К-К оценивает большее количество яиц по сравнению с методом FLOTAC. Метод FLOTAC обычно занижает среднее количество яиц.[18] В методе McMaster также наблюдалось более высокое количество яиц по сравнению с K-K, особенно в случаях заражения T. trichiura и анкилостомозом.stercoralis , который является живородящим, в то время как анкилостомы можно искусственно культивировать в лаборатории для получения рабдитоподобных личинок. Существует множество методов, некоторые из которых устарели, а другие используются в исследовательских целях.

Культура на полосках фильтровальной бумаги Harada-Mori

Первоначально она была представлена ​​Харада и Мори в 1955 году.[7] Для этого метода требуется фильтровальная бумага, на которую добавляют фекальный материал, и пробирка с небольшим количеством воды, в которую он вставляется. После инкубации в подходящей среде происходит вылупление яйцеклеток и/или развитие личинок.В дополнение к низкой чувствительности 28% другим недостатком является то, что охлажденный или законсервированный образец нельзя использовать для культивирования. Кроме того, фильтровальная бумага, содержащая инфекционных личинок, представляет биологическую опасность.[7]

Фильтровальная бумага/метод скошенной культуры (чашка Петри)

Этот метод очень похож на метод Харада-Мори, с той лишь разницей, что это метод на основе предметного стекла, при котором предметное стекло, содержащее свежий фекальный материал, помещается в стеклянную или пластиковую чашку Петри. блюдо с водой. Этот метод позволяет проводить прямой осмотр с помощью препаровального микроскопа для поиска личинок.[7]

Культура на древесном угле

Это еще один способ культивирования с использованием гранулированного древесного угля. Древесный уголь обеспечивает среду для развития личинок, которая имитирует условия в природе.[7]

Культура на чашках с агаром Кога

В основном используется для культивирования S. stercoralis . Образец стула помещают на чашку с агаром и инкубируют во влажной камере при температуре окружающей среды. После инкубации чашки исследуют на наличие личинок S.stercoralis под световым микроскопом. Когда личинки ползают по агару, они несут с собой бактерии. Это создает видимые следы над агаром. Планшеты промывают 10% раствором ацетилформалина. Элюент центрифугируют, а осадок исследуют под микроскопом.[20] Этих личинок следует отличать от личинок анкилостомы. Это более чувствительно, чем методы прямого мазка и концентрации кала.

Техника культивирования Бермана

В основном используется для S.обнаружение личинок stercoralis . Образец стула размером с грецкий орех (10 г) помещают на марлю, которую помещают в стеклянную воронку и заливают водопроводной водой. Через 2 ч жидкость со дна собирают, центрифугируют и удаляют надосадочную жидкость. Осадок исследуют под микроскопом при увеличении в 400 раз, чтобы подтвердить наличие личинок.[7,10] Хотя этот метод требует меньше времени, требуется трудоемкость и большое количество стула, которого может не быть.[7]

Недостатки методов культивирования включают необходимость технического опыта, сложность выполнения в полевых условиях и более продолжительное время.Кроме того, старые и охлажденные образцы не подходят.[7]

Анализы на основе серологии

В ситуациях, когда образцы кала недоступны, в диагностике может помочь серология. Они делятся на две категории: анализы на обнаружение антигена и анализы на обнаружение антител. К ним относятся твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) и его производные формы, такие как скрининговый тест Falcon Assay ELISA, Dot-ELISA, система иммунопреципитации люциферазы (LIPS), непрямой иммунофлуоресцентный тест на антитела (IFAT) или прямой иммунофлуоресцентный тест на антитела, иммуноблоттинг, и некоторые экспресс-иммунохроматографические тесты (ДЭТ).[21]

Недостатками, связанными с серодиагностикой, являются ее более инвазивный характер, антитела, как правило, остаются стойкими после лечения и, таким образом, могут не указывать на активную инфекцию, перекрестную реакцию с другими нематодами, особенно с филяриатозными инфекциями.[22] Однако серология играет важную роль в диагностике инфекции S. stercoralis . Он размножается внутри хозяина, что приводит к хронической инфекции с широким спектром клинических проявлений, начиная от бессимптомной стадии и заканчивая опасной для жизни гиперинфекцией из-за диссеминации личинок, особенно у пациентов с ослабленным иммунитетом.Обычные диагностические тесты имеют очень низкую чувствительность у этих пациентов. Однократное прямое исследование мазка кала (DS) не позволяет выявить почти 70% случаев, но исследование нескольких образцов улучшает чувствительность.[22] Здесь серологические методы имеют более высокую чувствительность по сравнению с другими традиционными паразитологическими тестами (81–98%). В последнее время широко используется разработанная непрямая иммунофлуоресцентная микроскопия (IFAT) с чувствительностью 97% и специфичностью 98%.[22] Требование наличия целых живых инфекционных личинок является основным недостатком IFAT, и для преодоления этого недостатка был разработан тест агглютинации желатиновых частиц с заявленной чувствительностью 81% и специфичностью 74%.[22] С использованием иммунодоминантного антигена S. stercoralis и S. ratti были разработаны иммуноблот-тесты, которые показали чувствительность от 65 до 100%. [23] Было разработано несколько ИФА, которые продемонстрировали лучшую чувствительность (94%) по сравнению с IFAT. Недавно был разработан LIPS, который продемонстрировал очень хорошую чувствительность (97%) и специфичность (100%).[22] Эта техника может быть выполнена относительно быстро (2,5 часа), и еще более быстрая версия (<2 минут) находится в стадии изучения.[24]

Обнаружение копроантигена

Анализы на копроантиген давно разрабатывались для диагностики ряда кишечных инфекций человека и животных. Для ППГ они в основном доступны для Strongyloides и анкилостомы. Поликлональная кроличья антисыворотка, созданная против экскреторного/секреторного (Э/С) антигена Strongyloides ratti и нанесенная на микротитровальные планшеты для захвата фекального антигена.[25] Strongyloides coproAg остается стабильным при замораживании в виде экстрагированных формалином фекальных супернатантов, хранящихся при температуре -20°C.Существует множество испытаний по превращению копроИФА на основе копроАг Strongyloides в экспресс-ДЭТ, многие из них также коммерчески доступны.[26] Сообщается, что чувствительность обнаружения антигена S. stercoralis составляет 0,5 мг/мл.[26] Антитело IgG, выработанное против Ancylostoma ceylanicum ES, используется для захвата копроантигенов анкилостомы. Это позволяет обнаруживать белки ЭС от 10 нг/мл до 10 мкг/мл.[27]

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ПОДХОДЫ

Достижения в области молекулярных методов обеспечили быстрое обнаружение, а также точное количественное определение яйцеклеток ППГ.Гораздо более высокая чувствительность молекулярных методов делает их особенно полезными для мониторинга эффективности лечения или стратегий контроля. Молекулярными мишенями, используемыми в основном, являются ITS-1, ITS-2, 18S и т. д. Доступно несколько различных методов, основанных на полимеразной цепной реакции (ПЦР), т. е. обычная ПЦР, количественная ПЦР (кПЦР), мультиплексная ПЦР-реакция и т. д. [28,29] Существует множество технических проблем, связанных с молекулярными методами. Образцы стула содержат большое количество взвешенных веществ, желчных кислот и т. д., что может ингибировать молекулярные реакции.[30] Это препятствие можно преодолеть, используя этап флотации или осаждения перед процессом экстракции.[31] Многие наборы для выделения нуклеиновых кислот были разработаны с дополнительными этапами удаления ингибитора. Другая проблема заключается в том, что яичная скорлупа яиц ППГ намного прочнее, чем клеточные стенки бактерий, что приводит к низкому выходу нуклеиновой кислоты. Разрушению яичной скорлупы можно способствовать с помощью таких методов, как обработка ультразвуком или гомогенизация тканей с помощью устойчивых к разложению гранул и т. д.[32] Несмотря на ограничения, молекулярные тесты оказались более чувствительными, чем обычные методы, при обнаружении очень небольшого количества яиц.[8] С продвижением вперед можно обнаружить несколько паразитов с помощью мультиплексной ПЦР за один раз, но они, как правило, отстают по чувствительности по сравнению с одиночными анализами.

СРАВНЕНИЕ ОБЫЧНЫХ И МОЛЕКУЛЯРНЫХ МЕТОДОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ППГ

Быстрые и высокочувствительные свойства количественной ПЦР делают ее более подходящей для диагностики геогельминтозов по сравнению с нечувствительными, а также трудоемкими старыми традиционными методами.Во многих исследованиях сравнивалась чувствительность обоих методов. Согласно этим исследованиям, для A. lumbricoides микроскопия имела чувствительность 70–88%, тогда как молекулярные тесты имели чувствительность 85–100%; для анкилостомы чувствительность микроскопии составила 30–88% по сравнению с молекулярными методами с чувствительностью 75–100%; для S. stercoralis чувствительность микроскопии составила 16–50% по сравнению с молекулярными методами 76–93%; для T. trichiura микроскопия имела чувствительность 88%, в то время как молекулярные методы имели заявленную чувствительность 100%.[28]

До сих пор молекулярное обнаружение СТГ в основном ограничивалось исследовательскими установками. Однако теперь, учитывая его точность и экономическую эффективность, рекомендуется использовать молекулярные тесты и в программах элиминации геогельминтозов ВОЗ.

ДРУГИЕ МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕТОДЫ

Были введены некоторые новые тесты, например:

  1. Петлевая изотермическая амплификация: Действовать как более дешевая альтернатива, поскольку здесь для реакции используется водяная баня вместо дорогого термоциклера[8]

  2. Капельная цифровая ПЦР, технология ПЦР третьего поколения, была представлена ​​для абсолютного количественного определения генов-мишеней, применимых к патогенам.[8]

ДРУГИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ

  1. Гемограмма: Эозинофилия (>600 мкл или >6% данных тонкослойной хроматографии) может быть использована в качестве маркера инфекции ППГ. Во многих исследованиях показана корреляция между инфекцией ППГ и эозинофилией, которая обычно наблюдается примерно в 47% случаев аскаридоза, 78% случаев трихоцефалеза и 82% случаев стронгилоидоза, до 60% случаев анкилостомоза [33,34,35]. ,36] Низкий гемоглобин ≤5 г/дл (60%) и низкая концентрация ферритина (33%) (из-за железодефицитной анемии) могут наблюдаться у пациентов с инвазией анкилостомозом[7]

  2. Анализ скрытой крови: Скрытая кровь в кале у пациентов с тяжелой анемией вследствие хронической анкилостомозной инфекции использовалась в качестве суррогатного маркера[37]

  3. Другие образцы: в случае аскаридоза, анкилостомы или S.sterocoralis, в фазе миграции личинок инфекции диагноз можно поставить, найдя личинок в мокроте или смывах желудка. При аскаридозе в мокроте могут быть обнаружены кристаллы Шарко-Лейдена и эозинофилы [7]

  4. Эндоскопия: В случае S. stercoralis наиболее частыми эндоскопическими находками, которые обычно являются случайными, являются изъязвление, кровотечение, поражение двенадцатиперстной кишки. спазм, отек слизистой оболочки, утолщение складок двенадцатиперстной кишки. В случае заражения анкилостомой также важную роль играет эндоскопия верхних отделов пищеварительного тракта.[22]

Стринг-тест (капсула для энтеротеста)

В случае инфекции S. stercoralis из-за неравномерного выделения личинок с калом, особенно при хронической низкой инфекции, материал двенадцатиперстной кишки можно исследовать на предмет наличие личинок. Вкратце, нейлоновая нить, свернутая внутри желатиновой капсулы с прокладкой, проглатывается, и капсула доставляется в двенадцатиперстную кишку. Затем линия оттягивается назад с прилипшей окрашенной желчью дуоденальной слизью.[22]

  1. Диагностическая радиология: При аскаридозе могут визуализироваться кишечные ходы гельминтов.Это может быть особенно очевидно, когда два червяка лежат параллельно, как «линии троллейбуса». Также могут наблюдаться аппендицит и холецистит. При анкилостомозе отмечают гиперподвижность кишечника, дилатацию проксимального отдела тощей кишки, огрубение складок слизистой оболочки. При инфекции, вызванной S. stercoralis , могут наблюдаться изменения от нормального вида желудочно-кишечного тракта или легкого отека с утолщенными складками до значительного расширения слизистой оболочки тонкой кишки со стриктурами у гиперинфицированных пациентов [22]

  2. Гистологические исследования: это может также подтверждают диагноз, обнаруживая личинки, яйца или иногда взрослые формы, преимущественно в желудочных или двенадцатиперстных криптах вместе с эозинофильной инфильтрацией[22]

  3. Внутрикожные кожные тесты.Сообщалось, что реакция гиперчувствительности немедленного типа на различные соматические и экскреторные/секреторные антигены является надежным кожным тестом для диагностики стронгилоидоза. Основными недостатками являются перекрестные реакции и постоянство после лечения.[22]

Таким образом, геогельминтозы представляют собой серьезную проблему общественного здравоохранения, и их следует надлежащим образом диагностировать и лечить, чтобы значительно снизить смертность и заболеваемость. Необходимо разработать и утвердить новые, быстрые, чувствительные и специфические тесты для обнаружения ППГ.

Финансовая поддержка и спонсорство

Нет.

Конфликт интересов

Конфликт интересов отсутствует.

ССЫЛКИ

1. Всемирная организация здравоохранения. Инвестиции для преодоления глобального воздействия забытых тропических болезней: Третий доклад ВОЗ о забытых болезнях. Женева, Швейцария: ВОЗ Press; 2015. С. 1–191. [Google Академия]2. Пуллан Р.Л., Смит Дж.Л., Ясрасария Р., Брукер С.Дж. Глобальные показатели инфицирования и бремени болезней, вызванных гельминтозами, передающимися через почву, в 2010 г.Векторы паразитов. 2014;7:37. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]3. Всемирная организация здоровья. Элиминация передающихся через почву гельминтозов как проблемы общественного здравоохранения у детей, Отчет о ходе работы на 2001-2010 гг. и Стратегический план на 2011-2020 гг. Женева, Швейцария: ВОЗ Press; 2012. С. 1–78. [Google Академия]4. Tarafder MR, Carabin H, Joseph L, Balolong E, Jr, Olveda R, McGarvey ST. Оценка чувствительности и специфичности метода исследования стула Като-Каца для выявления анкилостомоза, инфекций Ascaris lumbricoides и Trichuris trichiura у людей при отсутствии «золотого стандарта».Int J Паразитол. 2010;40:399–404. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]5. Чизбро М. Прямая лабораторная практика в тропических странах (часть 1) Нью-Йорк: Издательство Кембриджского университета; 2009. С. 29–35. [Google Академия]7. Гарсия Л.С. Диагностическая медицинская паразитология. 4-е изд. Вашингтон, округ Колумбия: ASM Press; 2001. стр. 786–801. [Google Академия]8. Амоа И.Д., Сингх Г., Стенстрем Т.А., Редди П. Обнаружение и количественная оценка гельминтов, передающихся через почву, в образцах окружающей среды: обзор современного состояния и будущих перспектив.Acta Trop. 2017; 169:187–201. [PubMed] [Google Scholar]9. Комитет экспертов ВОЗ. Профилактика и борьба с шистосомозом и передающимися через почву гельминтозами. Представитель World Health Organ Tech Rep. 2002;912:i. [PubMed] [Google Scholar] 10. Кнопп С., Мгени А.Ф., Хамис И.С., Стейнманн П., Стотард Дж.Р., Роллинсон Д. и соавт. Диагностика передающихся через почву гельминтов в эпоху профилактической химиотерапии: влияние многократного отбора образцов стула и использования различных диагностических методов. PLoS Negl Trop Dis. 2008;2:e331. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]11.Tarafder MR, Carabin H, Joseph L, Balolong E, Jr, Olveda R, McGarvey ST. Оценка чувствительности и специфичности метода исследования стула Като-Каца для выявления анкилостомоза, инфекций Ascaris lumbricoides и Trichuris trichiura у людей при отсутствии «золотого стандарта». Int J Паразитол. 2010;40:399–404. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]12. Николай Б., Брукер С.Дж., Пуллан Р.Л. Чувствительность диагностических тестов на гельминтозы человека, передающиеся через почву: метаанализ в отсутствие истинного золотого стандарта.Int J Паразитол. 2014;44:765–74. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]13. Albonico M, Rinaldi L, Sciascia S, Morgoglione ME, Piemonte M, Maurelli MP, et al. Сравнение трех копромикроскопических методов для оценки эффективности альбендазола против передающихся через почву гельминтозов у ​​детей школьного возраста на острове Пемба. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2013; 107: 493–501. [PubMed] [Google Scholar] 14. Vadlejch J, Petrtýl M, Zaichenko I, Cadková Z, Jankovská I, Langrová I, et al. Какой метод подсчета яиц по МакМастеру является наиболее надежным? Паразитол рез.2011; 109:1387–94. [PubMed] [Google Scholar] 15. Utzinger J, Rinaldi L, Lohourignon LK, Rohner F, Zimmermann MB, Tschannen AB, et al. FLOTAC: новый чувствительный метод диагностики анкилостомозов у ​​людей. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2008; 102:84–90. [PubMed] [Google Scholar] 16. Кнопп С., Глинц Д., Ринальди Л., Мохаммед К.А., Н’Горан Э.К., Стотард Дж.Р. и соавт. FLOTAC: Перспективный метод обнаружения яиц гельминтов в фекалиях человека. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2009; 103:1190–4. [PubMed] [Google Scholar] 17.Барда Б.Д., Ринальди Л., Янниелло Д., Зеферин Х., Сальво Ф., Садутшанг Т. и др. Mini-FLOTAC, инновационный метод прямой диагностики кишечных паразитарных инфекций: практический опыт. PLoS Negl Trop Dis. 2013;7:e2344. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]18. Knopp S, Rinaldi L, Khamis IS, Stothard JR, Rollinson D, Maurelli MP, et al. Один FLOTAC более чувствителен, чем тройной анализ Kato-Katz, для диагностики вялотекущих гельминтозов, передающихся через почву. Trans R Soc Trop Med Hyg.2009; 103: 347–54. [PubMed] [Google Scholar] 19. Albonico M, Ame SM, Vercruysse J, Levecke B. Сравнение толстого мазка Kato-Katz и методов подсчета яиц McMaster для мониторинга эффективности лекарств против передаваемых через почву гельминтов у школьников на острове Пемба, Танзания. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2012;106:199–201. [PubMed] [Google Scholar] 20. Кога К., Касуя С., Кхамбуонруанг С., Сухават К., Иеда М., Такацука Н. и др. Модифицированный метод чашек с агаром для обнаружения Strongyloides stercoralis .Am J Trop Med Hyg. 1991; 45: 518–21. [PubMed] [Google Scholar] 22. Requena-Méndez A, Chiodini P, Bisoffi Z, Buonfrate D, Gotuzzo E, Muñoz J. Лабораторная диагностика и последующее наблюдение за стронгилоидозом: систематический обзор. PLoS Negl Trop Dis. 2013;7:e2002. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]23. Buonfrate D, Formenti F, Perandin F, Bisoffi Z. Новые подходы к диагностике инфекции Strongyloides stercoralis . Клиническая микробиология и инфекции. 2015; 21: 543–52. [PubMed] [Google Scholar] 24.Ramanathan R, Burbelo PD, Groot S, Ladarola MJ, Neva FA, et al. Анализ систем иммунопреципитации люциферазы повышает чувствительность и специфичность диагностики инфекции Strongyloides stercoralis . J заразить Dis. 2008; 198:444–51. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]25. Джонсон М.Дж., Бенке Дж.М., Коулз Г.К. Обнаружение желудочно-кишечных нематод с помощью ИФА с захватом копроантигенов. рез. вет. 1996; 60:7–12. [PubMed] [Google Scholar] 27. Бунгиро Р.Д., младший, Каппелло М. Обнаружение экскреторных/секреторных копроантигенов при экспериментальной инфекции анкилостомы.Am J Trop Med Hyg. 2005; 73: 915–20. [PubMed] [Google Scholar] 29. Гордон К.А., Грей ДиДжей, Гоберт Г.Н., Макманус Д.П. Подходы амплификации ДНК для диагностики основных паразитарных гельминтозов человека. Молекулярные зонды. 2011; 25:143–52. [PubMed] [Google Scholar] 30. Аль-Суд В. А., Уис И. С., Ли Д. К., Люнг С., Вадстром Т. Характеристика ингибирующего действия желчи на ПЦР для оптимизации обнаружения видов Helicobacter с помощью ПЦР в реальном времени. FEMS Immunol Med Microbiol. 2005; 44: 177–82. [PubMed] [Google Scholar] 31.Басс Д., Стентифорд Г.Д., Литтлвуд Д.Т., Хартикайнен Х. Разнообразное применение методов ДНК окружающей среды в паразитологии. Тенденции Паразитол. 2015; 31: 499–513. [PubMed] [Google Scholar] 32. Гьявали П., Ахмед В., Джагалс П., Сидху Дж. П., Тозе С. Сравнение методов концентрации для быстрого обнаружения яиц анкилостомы в матрицах сточных вод с использованием количественной ПЦР. Опыт Паразитол. 2015;159:160–7. [PubMed] [Google Scholar] 33. Дарлан Д.М., Тала З.З., Аманта С., Варли С.М., Аррасид Н.К. Корреляция между заражением гельминтами, передающимися через почву, и уровнями эозинофилов у детей начальной школы в Медане.Открытый доступ Maced J Med Sci. 2017;5:142–146. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]34. Ашрафи К., Тахбаз А., Рахмати Б. Strongyloides stercoralis : наиболее распространенная паразитарная причина эозинофилии в провинции Гилан, Северный Иран. Иран J Параситол. 2010;5:40–7. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]35. Кучик С.Дж., Мартин Г.Л., Сортор Б.В. Обычные кишечные паразиты. Ам семейный врач. 2004;69:1161–8. [PubMed] [Google Scholar] 36. Джиеро С., Али М., Пасарибу С., Пасарибу А.П. Взаимосвязь между количеством эозинофилов и геминогенной инфекцией у детей.Азиатский Pac J Trop Dis. 2015;5:813–6. [Google Scholar]

Лабораторная диагностика почвенных гельминтозов

Троп Паразитол. 2017 июль-декабрь; 7(2): 86–91.

Sumeeta Khurana

Отделение медицинской паразитологии, Институт последипломного медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия Медицинская паразитология, Институт последипломного медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия

Адрес для корреспонденции: Dr.Сумита Курана, отделение медицинской паразитологии, Институт последипломного образования медицинского образования и исследований, Чандигарх, Индия. Электронная почта: [email protected]

Поступила в редакцию 16 июня 2017 г.; Принято 25 сентября 2017 г.

Эта статья находится в открытом доступе и распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 3.0, которая позволяет другим микшировать, настраивать и развивать произведение в некоммерческих целях, если автор указан, и новые творения лицензируются на тех же условиях.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Аннотация

Гельминты

включают в себя, I.E., Hookworms ( ancylostoma duodeNale , Necator anmicanicus ), круглый червя ( аскарикоидов ), кнут ( трихурис трихюра ) и синтинтоины STERCORALIS . Во всем мире около 1,5 миллиарда человек инфицированы ППГ. ППГ способствуют значительному нарушению умственного и физического развития, особенно в развивающихся странах.К сожалению, эти инфекции в основном остаются недиагностированными из-за отсутствия подготовленного персонала и соответствующих технологий. Периодическое выделение яиц или личинок еще больше затрудняет диагностику. Таким образом, существует острая необходимость в быстрых и точных тестах для диагностики ППГ. Методы диагностики включают традиционные и молекулярные методы. Обычные методы включают микроскопию, посев и подсчет яиц. Серология играет важную роль, особенно в случае S. stercoralis, когда традиционные методы имеют очень низкую чувствительность.Быстрые, высокочувствительные молекулярные методы, особенно количественная полимеразная цепная реакция, делают его пригодным для диагностики ППГ по сравнению с нечувствительными, а также трудоемкими традиционными методами. До сих пор молекулярное обнаружение ППГ в основном ограничивалось исследовательскими установками, но теперь есть рекомендация принять молекулярные тесты в программах элиминации ППГ Всемирной организации здравоохранения. Таким образом, инфекции, вызываемые ППГ, являются важной проблемой общественного здравоохранения, и их необходимо надлежащим образом диагностировать и лечить, чтобы значительно снизить смертность и заболеваемость.

Ключевые слова: 5 Ключевые слова: Диагностика, Гельминты, почва

Введение

Гельминты, передаваемые на почве, передаваемые по почве. , власоглав ( Trichuris trichiura ) и Strongyloides stercoralis , хотя Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) формально не включает S. stercoralis в список ППГ.ППГ были включены в список ВОЗ из 17 забытых тропических болезней (ЗТБ) из-за связанной с ними бедности, значительной заболеваемости и потери DALY. Большинство инфекций происходит в тропических и субтропических странах, включая Индию. Во всем мире около 1,5 миллиарда человек инфицированы ППГ.[1] Аскаридоз зарегистрирован у 771,7–891,6 млн человек, трихоцефалез — у 429,6–508 млн человек, около 406,3–480,2 млн инфицированы анкилостомами.[2] ППГ способствуют значительному нарушению умственного и физического развития и анемии, особенно у детей.Инфекции ППГ часто протекают бессимптомно, но иногда приводят к тяжелым желудочно-кишечным (ЖКТ) симптомам. ВОЗ поставила цель к 2020 году ликвидировать геогельминтозы как проблему общественного здравоохранения у детей.[3]

Большинство паразитарных заболеваний нельзя диагностировать только с помощью физического осмотра, необходимы лабораторные исследования. К сожалению, эти инфекции в основном остаются недиагностированными из-за отсутствия подготовленного персонала и соответствующих технологий. Периодическое выделение яиц или личинок еще больше затрудняет диагностику.Таким образом, существует острая необходимость в быстрых и точных тестах для диагностики ППГ. Поскольку не существует адекватного золотого стандарта для обнаружения геогельминтозов, это еще больше затрудняет сравнение и стандартизацию любого нового метода.[4] Методы диагностики включают традиционные и молекулярные методы. Кроме того, количественная оценка гельминтной нагрузки также важна для оценки интенсивности инфекции и прогноза.

ОБЫЧНАЯ ДИАГНОСТИКА

Традиционно ППГ диагностируют путем исследования фекалий или других образцов желудочно-кишечного тракта на наличие яиц гельминтов, личинок или иногда взрослых червей или их сегментов.Из-за периодического откладывания яиц и/или личинок для обнаружения паразитов требуется несколько образцов (не менее 3), собранных в течение 10 дней.[5] Свежий образец фекалий объемом приблизительно большая чайная ложка или около 10 мл образца жидкого стула должен быть доставлен в лабораторию в течение 1 часа после сбора.

Общий осмотр

Образец следует исследовать на цвет, консистенцию (сформировавшийся/полуформованный/неоформленный/водянистый), наличие червей или сегментов, наличие гноя или крови и т. д.

Методы, основанные на микроскопии

Прямая микроскопия

Сделайте гладкий, тонкий препарат (с физиологическим раствором и йодом) и накройте покровным стеклом. В случае дизентерийных и несформировавшихся образцов выберите часть образца, которая содержит кровь и слизь, чтобы сделать мазок, и без добавления физиологического раствора или красителя накройте покровным стеклом.[5] Изучите препарат под микроскопом, чтобы выявить наличие личинок или яиц гельминтов. Их следует внимательно наблюдать на предмет их формы, размера, окрашивания желчью и т. д., Яйца A. lumbricoides окрашены желчью, а яйца других ППГ — нет. Оплодотворенные яйца A. lumbricoides округлые, длиной от 45 до 75 мкм, имеют толстую скорлупу с наружным сосцевидным слоем. В некоторых случаях наружный слой отсутствует (декорированные яйца). Неоплодотворенные яйца имеют удлиненную форму и крупнее оплодотворенных яиц (~90 мкм), их скорлупа тоньше, а сосочковый слой более изменчив, либо с большими выпуклостями, либо практически без них.[6] Яйца Ancylostoma и Necator не поддаются микроскопической дифференциации.Яйца с тонкой скорлупой, бесцветные, размером 60–75 × 35–40 мкм. Яйца T. trichiura имеют размер 50–55 × 20–25 мкм, бочкообразную форму с толстой скорлупой и пару полярных «заглушек» на каждом конце. В случае S. stercoralis наблюдаются личинки без оболочки размером 200–250 мкм × 16 мкм. Они показывают типичный рабдитовидный пищевод с большим утолщением.[5] Если образец стула остается в теплой и влажной среде более 24 часов, из яиц анкилостомы могут вылупиться личинки. Их необходимо дифференцировать от личинок S.stercoralis . [7] При инфекции T. trichiura в стуле могут присутствовать эозинофилы и кристаллы Шарко-Лейдена.

Методы концентрирования фекалий

Если количество микроорганизмов в фекалиях меньше, то по возможности следует концентрировать кал. Наиболее рекомендуемой процедурой является метод концентрации формального эфира (FEC). Формалин-эфирный раствор, который имеет меньший удельный вес, чем паразитические организмы, что приводит к концентрации последних в осадке.[8] Методы флотации (флотация сульфатом цинка, флотация насыщенным хлоридом натрия и др.) широко не используются, потому что неоплодотворенные яйца Ascaris и личинки Strongyloides не плавают и, следовательно, не могут быть легко извлечены этим методом.

Подсчет яиц

Метод Като-Каца

Это наиболее распространенный метод, используемый для количественного определения яиц гельминтов. ВОЗ рекомендует исследовать дубликаты препаратов по методу Като-Каца (К-К).[9] Предметные стекла необходимо исследовать через 40–60 мин после очистки глицерином, в противном случае яйца анкилостомы имеют тенденцию разрушаться и исчезать.Количество яиц гельминтов на грамм стула (ЭПГ) в качестве стандартного показателя интенсивности инфекции рассчитывается как: количество яиц в мазке × 24 [10].

По данным ВОЗ, 5000 и 50 000 EPG для A. lumbricoides , 2000 и 4000 EPG для анкилостомы и 1000 и 10 000 EPG для T. trichiura являются пороговыми значениями для умеренных и тяжелых инфекций, соответственно [10]. ] K-K хорош для обнаружения инфекций A. lumbricoides и T. trichiura , но имеет относительно низкую чувствительность для обнаружения яиц анкилостомы, потому что яйца анкилостомы имеют тенденцию распадаться, если есть временная задержка в исследовании образцов.[11] В настоящее время это наиболее широко используемый метод в полевых эпидемиологических исследованиях из-за его низкой стоимости и относительно низкого уровня требуемых навыков.[12]

Метод Макмастера

Это еще один метод подсчета яиц, который сравнительно легко стандартизировать, чем К-К, и его эффективность также сопоставима[13]. Здесь известный объем фекальной взвеси исследуется под микроскопом с использованием счетной камеры. После этого количество EPG рассчитывается как: Общее количество яиц или ооцист × 50.[14] Здесь яйца плавают без мусора; отсюда и преимущество относительно быстрого подсчета. Единственным недостатком здесь является необходимость специальной счетной камеры.

Методы FLOTAC и mini-FLOTAC

Это недавно разработанные новые методы подсчета фекальных яиц. Здесь аппарат FLOTAC ® (Университет Неаполя, Италия) используется для проведения флотации образца в центрифуге с последующим отсечением апикальной части флотирующей суспензии и количественным определением яиц.[15] Основным преимуществом является его поливалентность, поэтому его можно использовать для одновременного обнаружения различных гельминтов, а также кишечных простейших.[16] FLOTAC имеет много практических недостатков, включая высокую стоимость, потребность в центрифуге и длительное время процедуры подготовки проб, что снижает его ценность как единственного диагностического метода. В настоящее время проводятся исследования для проверки этой методики. Был разработан метод Mini-FLOTAC, упрощенная форма FLOTAC, которая оптимальна в условиях ограниченных возможностей.[17] В предыдущих исследованиях предполагалось, что чувствительность mini-FLOTAC сравнима с K-K, но ниже, чем у FLOTAC. Дополнительным преимуществом является то, что это можно использовать с сохраненными образцами фекалий.[12]

СРАВНЕНИЕ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ НА ОСНОВЕ МИКРОСКОПИИ

В ходе метаанализа сравнивались различные методы микроскопии в областях низкой и высокой интенсивности.[12] Это сравнение было основано на байесовской модели латентного класса, предполагая вероятностную модель взаимосвязи, и результаты представлены в .

Таблица 1

Сравнение чувствительности (%) различных методов, основанных на микроскопии[12]

Метод FLOTAC показал в целом самую высокую чувствительность среди всех. Чувствительность была сопоставима как для методов Mini-FLOTAC, так и для методов K-K. Прямая микроскопия имела наименьшую чувствительность. Чувствительность теста сильно различалась в зависимости от интенсивности инфекции (группы низкой и высокой интенсивности) для всех тестов, особенно для метода КК, где чувствительность была ниже в группе низкой интенсивности по сравнению с группой высокой интенсивности (группа высокой чувствительности, 74–95%). ).Это изменение необходимо учитывать при выборе любого диагностического теста в определенных условиях.[12]

Сравнение среднего количества яиц с помощью различных методов показывает, что метод К-К оценивает большее количество яиц по сравнению с методом FLOTAC. Метод FLOTAC обычно занижает среднее количество яиц.[18] В методе McMaster также наблюдалось более высокое количество яиц по сравнению с K-K, особенно в случаях заражения T. trichiura и анкилостомозом.stercoralis , который является живородящим, в то время как анкилостомы можно искусственно культивировать в лаборатории для получения рабдитоподобных личинок. Существует множество методов, некоторые из которых устарели, а другие используются в исследовательских целях.

Культура на полосках фильтровальной бумаги Harada-Mori

Первоначально она была представлена ​​Харада и Мори в 1955 году.[7] Для этого метода требуется фильтровальная бумага, на которую добавляют фекальный материал, и пробирка с небольшим количеством воды, в которую он вставляется. После инкубации в подходящей среде происходит вылупление яйцеклеток и/или развитие личинок.В дополнение к низкой чувствительности 28% другим недостатком является то, что охлажденный или законсервированный образец нельзя использовать для культивирования. Кроме того, фильтровальная бумага, содержащая инфекционных личинок, представляет биологическую опасность.[7]

Фильтровальная бумага/метод скошенной культуры (чашка Петри)

Этот метод очень похож на метод Харада-Мори, с той лишь разницей, что это метод на основе предметного стекла, при котором предметное стекло, содержащее свежий фекальный материал, помещается в стеклянную или пластиковую чашку Петри. блюдо с водой. Этот метод позволяет проводить прямой осмотр с помощью препаровального микроскопа для поиска личинок.[7]

Культура на древесном угле

Это еще один способ культивирования с использованием гранулированного древесного угля. Древесный уголь обеспечивает среду для развития личинок, которая имитирует условия в природе.[7]

Культура на чашках с агаром Кога

В основном используется для культивирования S. stercoralis . Образец стула помещают на чашку с агаром и инкубируют во влажной камере при температуре окружающей среды. После инкубации чашки исследуют на наличие личинок S.stercoralis под световым микроскопом. Когда личинки ползают по агару, они несут с собой бактерии. Это создает видимые следы над агаром. Планшеты промывают 10% раствором ацетилформалина. Элюент центрифугируют, а осадок исследуют под микроскопом.[20] Этих личинок следует отличать от личинок анкилостомы. Это более чувствительно, чем методы прямого мазка и концентрации кала.

Техника культивирования Бермана

В основном используется для S.обнаружение личинок stercoralis . Образец стула размером с грецкий орех (10 г) помещают на марлю, которую помещают в стеклянную воронку и заливают водопроводной водой. Через 2 ч жидкость со дна собирают, центрифугируют и удаляют надосадочную жидкость. Осадок исследуют под микроскопом при увеличении в 400 раз, чтобы подтвердить наличие личинок.[7,10] Хотя этот метод требует меньше времени, требуется трудоемкость и большое количество стула, которого может не быть.[7]

Недостатки методов культивирования включают необходимость технического опыта, сложность выполнения в полевых условиях и более продолжительное время.Кроме того, старые и охлажденные образцы не подходят.[7]

Анализы на основе серологии

В ситуациях, когда образцы кала недоступны, в диагностике может помочь серология. Они делятся на две категории: анализы на обнаружение антигена и анализы на обнаружение антител. К ним относятся твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) и его производные формы, такие как скрининговый тест Falcon Assay ELISA, Dot-ELISA, система иммунопреципитации люциферазы (LIPS), непрямой иммунофлуоресцентный тест на антитела (IFAT) или прямой иммунофлуоресцентный тест на антитела, иммуноблоттинг, и некоторые экспресс-иммунохроматографические тесты (ДЭТ).[21]

Недостатками, связанными с серодиагностикой, являются ее более инвазивный характер, антитела, как правило, остаются стойкими после лечения и, таким образом, могут не указывать на активную инфекцию, перекрестную реакцию с другими нематодами, особенно с филяриатозными инфекциями.[22] Однако серология играет важную роль в диагностике инфекции S. stercoralis . Он размножается внутри хозяина, что приводит к хронической инфекции с широким спектром клинических проявлений, начиная от бессимптомной стадии и заканчивая опасной для жизни гиперинфекцией из-за диссеминации личинок, особенно у пациентов с ослабленным иммунитетом.Обычные диагностические тесты имеют очень низкую чувствительность у этих пациентов. Однократное прямое исследование мазка кала (DS) не позволяет выявить почти 70% случаев, но исследование нескольких образцов улучшает чувствительность.[22] Здесь серологические методы имеют более высокую чувствительность по сравнению с другими традиционными паразитологическими тестами (81–98%). В последнее время широко используется разработанная непрямая иммунофлуоресцентная микроскопия (IFAT) с чувствительностью 97% и специфичностью 98%.[22] Требование наличия целых живых инфекционных личинок является основным недостатком IFAT, и для преодоления этого недостатка был разработан тест агглютинации желатиновых частиц с заявленной чувствительностью 81% и специфичностью 74%.[22] С использованием иммунодоминантного антигена S. stercoralis и S. ratti были разработаны иммуноблот-тесты, которые показали чувствительность от 65 до 100%. [23] Было разработано несколько ИФА, которые продемонстрировали лучшую чувствительность (94%) по сравнению с IFAT. Недавно был разработан LIPS, который продемонстрировал очень хорошую чувствительность (97%) и специфичность (100%).[22] Эта техника может быть выполнена относительно быстро (2,5 часа), и еще более быстрая версия (<2 минут) находится в стадии изучения.[24]

Обнаружение копроантигена

Анализы на копроантиген давно разрабатывались для диагностики ряда кишечных инфекций человека и животных. Для ППГ они в основном доступны для Strongyloides и анкилостомы. Поликлональная кроличья антисыворотка, созданная против экскреторного/секреторного (Э/С) антигена Strongyloides ratti и нанесенная на микротитровальные планшеты для захвата фекального антигена.[25] Strongyloides coproAg остается стабильным при замораживании в виде экстрагированных формалином фекальных супернатантов, хранящихся при температуре -20°C.Существует множество испытаний по превращению копроИФА на основе копроАг Strongyloides в экспресс-ДЭТ, многие из них также коммерчески доступны.[26] Сообщается, что чувствительность обнаружения антигена S. stercoralis составляет 0,5 мг/мл.[26] Антитело IgG, выработанное против Ancylostoma ceylanicum ES, используется для захвата копроантигенов анкилостомы. Это позволяет обнаруживать белки ЭС от 10 нг/мл до 10 мкг/мл.[27]

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ПОДХОДЫ

Достижения в области молекулярных методов обеспечили быстрое обнаружение, а также точное количественное определение яйцеклеток ППГ.Гораздо более высокая чувствительность молекулярных методов делает их особенно полезными для мониторинга эффективности лечения или стратегий контроля. Молекулярными мишенями, используемыми в основном, являются ITS-1, ITS-2, 18S и т. д. Доступно несколько различных методов, основанных на полимеразной цепной реакции (ПЦР), т. е. обычная ПЦР, количественная ПЦР (кПЦР), мультиплексная ПЦР-реакция и т. д. [28,29] Существует множество технических проблем, связанных с молекулярными методами. Образцы стула содержат большое количество взвешенных веществ, желчных кислот и т. д., что может ингибировать молекулярные реакции.[30] Это препятствие можно преодолеть, используя этап флотации или осаждения перед процессом экстракции.[31] Многие наборы для выделения нуклеиновых кислот были разработаны с дополнительными этапами удаления ингибитора. Другая проблема заключается в том, что яичная скорлупа яиц ППГ намного прочнее, чем клеточные стенки бактерий, что приводит к низкому выходу нуклеиновой кислоты. Разрушению яичной скорлупы можно способствовать с помощью таких методов, как обработка ультразвуком или гомогенизация тканей с помощью устойчивых к разложению гранул и т. д.[32] Несмотря на ограничения, молекулярные тесты оказались более чувствительными, чем обычные методы, при обнаружении очень небольшого количества яиц.[8] С продвижением вперед можно обнаружить несколько паразитов с помощью мультиплексной ПЦР за один раз, но они, как правило, отстают по чувствительности по сравнению с одиночными анализами.

СРАВНЕНИЕ ОБЫЧНЫХ И МОЛЕКУЛЯРНЫХ МЕТОДОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ППГ

Быстрые и высокочувствительные свойства количественной ПЦР делают ее более подходящей для диагностики геогельминтозов по сравнению с нечувствительными, а также трудоемкими старыми традиционными методами.Во многих исследованиях сравнивалась чувствительность обоих методов. Согласно этим исследованиям, для A. lumbricoides микроскопия имела чувствительность 70–88%, тогда как молекулярные тесты имели чувствительность 85–100%; для анкилостомы чувствительность микроскопии составила 30–88% по сравнению с молекулярными методами с чувствительностью 75–100%; для S. stercoralis чувствительность микроскопии составила 16–50% по сравнению с молекулярными методами 76–93%; для T. trichiura микроскопия имела чувствительность 88%, в то время как молекулярные методы имели заявленную чувствительность 100%.[28]

До сих пор молекулярное обнаружение СТГ в основном ограничивалось исследовательскими установками. Однако теперь, учитывая его точность и экономическую эффективность, рекомендуется использовать молекулярные тесты и в программах элиминации геогельминтозов ВОЗ.

ДРУГИЕ МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕТОДЫ

Были введены некоторые новые тесты, например:

  1. Петлевая изотермическая амплификация: Действовать как более дешевая альтернатива, поскольку здесь для реакции используется водяная баня вместо дорогого термоциклера[8]

  2. Капельная цифровая ПЦР, технология ПЦР третьего поколения, была представлена ​​для абсолютного количественного определения генов-мишеней, применимых к патогенам.[8]

ДРУГИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ

  1. Гемограмма: Эозинофилия (>600 мкл или >6% данных тонкослойной хроматографии) может быть использована в качестве маркера инфекции ППГ. Во многих исследованиях показана корреляция между инфекцией ППГ и эозинофилией, которая обычно наблюдается примерно в 47% случаев аскаридоза, 78% случаев трихоцефалеза и 82% случаев стронгилоидоза, до 60% случаев анкилостомоза [33,34,35]. ,36] Низкий гемоглобин ≤5 г/дл (60%) и низкая концентрация ферритина (33%) (из-за железодефицитной анемии) могут наблюдаться у пациентов с инвазией анкилостомозом[7]

  2. Анализ скрытой крови: Скрытая кровь в кале у пациентов с тяжелой анемией вследствие хронической анкилостомозной инфекции использовалась в качестве суррогатного маркера[37]

  3. Другие образцы: в случае аскаридоза, анкилостомы или S.sterocoralis, в фазе миграции личинок инфекции диагноз можно поставить, найдя личинок в мокроте или смывах желудка. При аскаридозе в мокроте могут быть обнаружены кристаллы Шарко-Лейдена и эозинофилы [7]

  4. Эндоскопия: В случае S. stercoralis наиболее частыми эндоскопическими находками, которые обычно являются случайными, являются изъязвление, кровотечение, поражение двенадцатиперстной кишки. спазм, отек слизистой оболочки, утолщение складок двенадцатиперстной кишки. В случае заражения анкилостомой также важную роль играет эндоскопия верхних отделов пищеварительного тракта.[22]

Стринг-тест (капсула для энтеротеста)

В случае инфекции S. stercoralis из-за неравномерного выделения личинок с калом, особенно при хронической низкой инфекции, материал двенадцатиперстной кишки можно исследовать на предмет наличие личинок. Вкратце, нейлоновая нить, свернутая внутри желатиновой капсулы с прокладкой, проглатывается, и капсула доставляется в двенадцатиперстную кишку. Затем линия оттягивается назад с прилипшей окрашенной желчью дуоденальной слизью.[22]

  1. Диагностическая радиология: При аскаридозе могут визуализироваться кишечные ходы гельминтов.Это может быть особенно очевидно, когда два червяка лежат параллельно, как «линии троллейбуса». Также могут наблюдаться аппендицит и холецистит. При анкилостомозе отмечают гиперподвижность кишечника, дилатацию проксимального отдела тощей кишки, огрубение складок слизистой оболочки. При инфекции, вызванной S. stercoralis , могут наблюдаться изменения от нормального вида желудочно-кишечного тракта или легкого отека с утолщенными складками до значительного расширения слизистой оболочки тонкой кишки со стриктурами у гиперинфицированных пациентов [22]

  2. Гистологические исследования: это может также подтверждают диагноз, обнаруживая личинки, яйца или иногда взрослые формы, преимущественно в желудочных или двенадцатиперстных криптах вместе с эозинофильной инфильтрацией[22]

  3. Внутрикожные кожные тесты.Сообщалось, что реакция гиперчувствительности немедленного типа на различные соматические и экскреторные/секреторные антигены является надежным кожным тестом для диагностики стронгилоидоза. Основными недостатками являются перекрестные реакции и постоянство после лечения.[22]

Таким образом, геогельминтозы представляют собой серьезную проблему общественного здравоохранения, и их следует надлежащим образом диагностировать и лечить, чтобы значительно снизить смертность и заболеваемость. Необходимо разработать и утвердить новые, быстрые, чувствительные и специфические тесты для обнаружения ППГ.

Финансовая поддержка и спонсорство

Нет.

Конфликт интересов

Конфликт интересов отсутствует.

ССЫЛКИ

1. Всемирная организация здравоохранения. Инвестиции для преодоления глобального воздействия забытых тропических болезней: Третий доклад ВОЗ о забытых болезнях. Женева, Швейцария: ВОЗ Press; 2015. С. 1–191. [Google Академия]2. Пуллан Р.Л., Смит Дж.Л., Ясрасария Р., Брукер С.Дж. Глобальные показатели инфицирования и бремени болезней, вызванных гельминтозами, передающимися через почву, в 2010 г.Векторы паразитов. 2014;7:37. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]3. Всемирная организация здоровья. Элиминация передающихся через почву гельминтозов как проблемы общественного здравоохранения у детей, Отчет о ходе работы на 2001-2010 гг. и Стратегический план на 2011-2020 гг. Женева, Швейцария: ВОЗ Press; 2012. С. 1–78. [Google Академия]4. Tarafder MR, Carabin H, Joseph L, Balolong E, Jr, Olveda R, McGarvey ST. Оценка чувствительности и специфичности метода исследования стула Като-Каца для выявления анкилостомоза, инфекций Ascaris lumbricoides и Trichuris trichiura у людей при отсутствии «золотого стандарта».Int J Паразитол. 2010;40:399–404. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]5. Чизбро М. Прямая лабораторная практика в тропических странах (часть 1) Нью-Йорк: Издательство Кембриджского университета; 2009. С. 29–35. [Google Академия]7. Гарсия Л.С. Диагностическая медицинская паразитология. 4-е изд. Вашингтон, округ Колумбия: ASM Press; 2001. стр. 786–801. [Google Академия]8. Амоа И.Д., Сингх Г., Стенстрем Т.А., Редди П. Обнаружение и количественная оценка гельминтов, передающихся через почву, в образцах окружающей среды: обзор современного состояния и будущих перспектив.Acta Trop. 2017; 169:187–201. [PubMed] [Google Scholar]9. Комитет экспертов ВОЗ. Профилактика и борьба с шистосомозом и передающимися через почву гельминтозами. Представитель World Health Organ Tech Rep. 2002;912:i. [PubMed] [Google Scholar] 10. Кнопп С., Мгени А.Ф., Хамис И.С., Стейнманн П., Стотард Дж.Р., Роллинсон Д. и соавт. Диагностика передающихся через почву гельминтов в эпоху профилактической химиотерапии: влияние многократного отбора образцов стула и использования различных диагностических методов. PLoS Negl Trop Dis. 2008;2:e331. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]11.Tarafder MR, Carabin H, Joseph L, Balolong E, Jr, Olveda R, McGarvey ST. Оценка чувствительности и специфичности метода исследования стула Като-Каца для выявления анкилостомоза, инфекций Ascaris lumbricoides и Trichuris trichiura у людей при отсутствии «золотого стандарта». Int J Паразитол. 2010;40:399–404. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]12. Николай Б., Брукер С.Дж., Пуллан Р.Л. Чувствительность диагностических тестов на гельминтозы человека, передающиеся через почву: метаанализ в отсутствие истинного золотого стандарта.Int J Паразитол. 2014;44:765–74. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]13. Albonico M, Rinaldi L, Sciascia S, Morgoglione ME, Piemonte M, Maurelli MP, et al. Сравнение трех копромикроскопических методов для оценки эффективности альбендазола против передающихся через почву гельминтозов у ​​детей школьного возраста на острове Пемба. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2013; 107: 493–501. [PubMed] [Google Scholar] 14. Vadlejch J, Petrtýl M, Zaichenko I, Cadková Z, Jankovská I, Langrová I, et al. Какой метод подсчета яиц по МакМастеру является наиболее надежным? Паразитол рез.2011; 109:1387–94. [PubMed] [Google Scholar] 15. Utzinger J, Rinaldi L, Lohourignon LK, Rohner F, Zimmermann MB, Tschannen AB, et al. FLOTAC: новый чувствительный метод диагностики анкилостомозов у ​​людей. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2008; 102:84–90. [PubMed] [Google Scholar] 16. Кнопп С., Глинц Д., Ринальди Л., Мохаммед К.А., Н’Горан Э.К., Стотард Дж.Р. и соавт. FLOTAC: Перспективный метод обнаружения яиц гельминтов в фекалиях человека. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2009; 103:1190–4. [PubMed] [Google Scholar] 17.Барда Б.Д., Ринальди Л., Янниелло Д., Зеферин Х., Сальво Ф., Садутшанг Т. и др. Mini-FLOTAC, инновационный метод прямой диагностики кишечных паразитарных инфекций: практический опыт. PLoS Negl Trop Dis. 2013;7:e2344. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]18. Knopp S, Rinaldi L, Khamis IS, Stothard JR, Rollinson D, Maurelli MP, et al. Один FLOTAC более чувствителен, чем тройной анализ Kato-Katz, для диагностики вялотекущих гельминтозов, передающихся через почву. Trans R Soc Trop Med Hyg.2009; 103: 347–54. [PubMed] [Google Scholar] 19. Albonico M, Ame SM, Vercruysse J, Levecke B. Сравнение толстого мазка Kato-Katz и методов подсчета яиц McMaster для мониторинга эффективности лекарств против передаваемых через почву гельминтов у школьников на острове Пемба, Танзания. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2012;106:199–201. [PubMed] [Google Scholar] 20. Кога К., Касуя С., Кхамбуонруанг С., Сухават К., Иеда М., Такацука Н. и др. Модифицированный метод чашек с агаром для обнаружения Strongyloides stercoralis .Am J Trop Med Hyg. 1991; 45: 518–21. [PubMed] [Google Scholar] 22. Requena-Méndez A, Chiodini P, Bisoffi Z, Buonfrate D, Gotuzzo E, Muñoz J. Лабораторная диагностика и последующее наблюдение за стронгилоидозом: систематический обзор. PLoS Negl Trop Dis. 2013;7:e2002. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]23. Buonfrate D, Formenti F, Perandin F, Bisoffi Z. Новые подходы к диагностике инфекции Strongyloides stercoralis . Клиническая микробиология и инфекции. 2015; 21: 543–52. [PubMed] [Google Scholar] 24.Ramanathan R, Burbelo PD, Groot S, Ladarola MJ, Neva FA, et al. Анализ систем иммунопреципитации люциферазы повышает чувствительность и специфичность диагностики инфекции Strongyloides stercoralis . J заразить Dis. 2008; 198:444–51. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]25. Джонсон М.Дж., Бенке Дж.М., Коулз Г.К. Обнаружение желудочно-кишечных нематод с помощью ИФА с захватом копроантигенов. рез. вет. 1996; 60:7–12. [PubMed] [Google Scholar] 27. Бунгиро Р.Д., младший, Каппелло М. Обнаружение экскреторных/секреторных копроантигенов при экспериментальной инфекции анкилостомы.Am J Trop Med Hyg. 2005; 73: 915–20. [PubMed] [Google Scholar] 29. Гордон К.А., Грей ДиДжей, Гоберт Г.Н., Макманус Д.П. Подходы амплификации ДНК для диагностики основных паразитарных гельминтозов человека. Молекулярные зонды. 2011; 25:143–52. [PubMed] [Google Scholar] 30. Аль-Суд В. А., Уис И. С., Ли Д. К., Люнг С., Вадстром Т. Характеристика ингибирующего действия желчи на ПЦР для оптимизации обнаружения видов Helicobacter с помощью ПЦР в реальном времени. FEMS Immunol Med Microbiol. 2005; 44: 177–82. [PubMed] [Google Scholar] 31.Басс Д., Стентифорд Г.Д., Литтлвуд Д.Т., Хартикайнен Х. Разнообразное применение методов ДНК окружающей среды в паразитологии. Тенденции Паразитол. 2015; 31: 499–513. [PubMed] [Google Scholar] 32. Гьявали П., Ахмед В., Джагалс П., Сидху Дж. П., Тозе С. Сравнение методов концентрации для быстрого обнаружения яиц анкилостомы в матрицах сточных вод с использованием количественной ПЦР. Опыт Паразитол. 2015;159:160–7. [PubMed] [Google Scholar] 33. Дарлан Д.М., Тала З.З., Аманта С., Варли С.М., Аррасид Н.К. Корреляция между заражением гельминтами, передающимися через почву, и уровнями эозинофилов у детей начальной школы в Медане.Открытый доступ Maced J Med Sci. 2017;5:142–146. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]34. Ашрафи К., Тахбаз А., Рахмати Б. Strongyloides stercoralis : наиболее распространенная паразитарная причина эозинофилии в провинции Гилан, Северный Иран. Иран J Параситол. 2010;5:40–7. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]35. Кучик С.Дж., Мартин Г.Л., Сортор Б.В. Обычные кишечные паразиты. Ам семейный врач. 2004;69:1161–8. [PubMed] [Google Scholar] 36. Джиеро С., Али М., Пасарибу С., Пасарибу А.П. Взаимосвязь между количеством эозинофилов и геминогенной инфекцией у детей.Азиатский Pac J Trop Dis. 2015;5:813–6. [Google Scholar]

Прямая микроскопия образцов стула для определения распространенности гельминтозов, передающихся через почву, среди детей начальных классов в районе Кадувела Министерства здравоохранения Шри-Ланки после наводнения в 2016 году

распространенность кишечных гельминтов, передающихся через почву, и связанных с ними факторов среди школьников в районе медицинского работника Кадувела (МЗ) округа Коломбо, пострадавшего от наводнения в 2016 г.Исследование проводилось в 9 выбранных школах в районе Кадувела Минздрава с сентября 2016 года по март 2017 года. Было получено разрешение от соответствующих органов. Учащиеся 1-х классов включались в исследование после получения информированного письменного согласия родителей/опекунов. Для сбора демографических данных и другой соответствующей информации применялась анкета, основанная на интервьюерах. Образцы стула собирали и исследовали прямым влажным мазком с физиологическим раствором. Исследуемая группа составила 53,4% студентов мужского пола. Ни один из образцов стула не был положительным на гельминтов, передающихся через почву, кроме 17.4% школьников жаловались на ночной зуд, а родители 23% из них видели, как ночью из заднего прохода их детей выходят глисты. Было обнаружено, что четырнадцать образцов стула дали положительный результат на кисту Entamoeba coli . Большинство родителей (69%) заявили, что их дети всегда моют руки с мылом перед едой, тогда как 26% ​​заявили, что их дети делают это иногда. Большинство студентов (88%) мыли руки после посещения туалета. Почти все учащиеся (86%) пользовались герметичными туалетами, и очень немногие пользовались уборными с выгребной ямой (14%).В этом исследовании 67% учащихся получали антигельминтные препараты после наводнения. Эти данные свидетельствуют о том, что нулевая распространенность гельминтозов может быть связана с антигельминтной профилактикой и надлежащей медико-санитарной практикой. Необходимо провести дальнейшие исследования в этой области с большим размером выборки для изучения истинной распространенности гельминтозов. Учащиеся и родители должны быть осведомлены об инфекции Enterobius vermicularis . Источник водоснабжения должен быть проверен на фекальное загрязнение.

1. Введение

Кишечные нематоды Ascaris lumbricoides , Trichuris trichiura и анкилостомы ( Necator americanus и Ancylostoma duodenale , которые считаются трансмиссивными для человека почвенными шлемами). Он включен в список забытых тропических болезней Всемирной организации здравоохранения [1, 2]. Подавляющее большинство инфекций и бремени произошло в Азии, где считалось, что по крайней мере одна четверть (26,4%) населения является носителем по крайней мере одного вида ППГ [3].ППГ могут привести к различным негативным последствиям для здоровья, таким как диарея, дефицит питательных веществ и задержка физического и когнитивного роста. Наиболее выраженное влияние на рост у детей можно наблюдать при самых тяжелых инфекциях, но легкие инфекции могут также способствовать дефициту роста, если статус питания в сообществе плохой [4]. ППГ остаются распространенными во всем мире, особенно в развивающихся странах, которые в основном состоят из населения с низким доходом. Низкое социально-экономическое положение, антисанитария и низкий уровень образования являются основными факторами, влияющими на передачу и распространение ППГ [5].

В Шри-Ланке недавно были зарегистрированы инфекции Ascaris lumbricoides , Trichuris trichiura и Necator americanus [6]. Национальная распространенность каждой инфекции составляла менее 5%, при кумулятивной распространенности 6,9% для всех инфекций аскаридоза, трихоцефалеза и анкилостомидоза [7]. Тем не менее, частота инфекций может сильно различаться, поскольку как факторы, специфичные для хозяина, так и факторы окружающей среды влияют на риск заражения или сокрытия тяжелых гельминтозов [8].В прибрежных районах регистрируется более высокий уровень ППГ по сравнению с внутренними районами в районе Гампаха [6]. Инфекции ППГ довольно распространены среди школьников плантационного сектора. Таким образом, плановая дегельминтизация проводится в рамках школьных программ здравоохранения. Однако, по данным Gunawardena et al., распространенность ППГ-инфекций среди таких детей может рецидивировать после прекращения массовой дегельминтизации [9].

Распространение, распространенность и численность паразита определяются наличием восприимчивых хозяев, а также порогами развития в окружающей среде [1].Люди, пострадавшие от наводнения, подвергаются большему риску заражения гельминтозами, поскольку паводковая вода может покрыть туалетные ямы и рассеять яйца гельминтов. Также у перемещенных детей повышен риск передачи гельминтозов через места сосредоточения временных убежищ, а также при употреблении зараженных продуктов питания и воды. Шри-Ланка пострадала от сильного тропического шторма, вызвавшего масштабные наводнения и оползни в мае 2016 года, что было признано крупным стихийным бедствием. Коломбо был одним из сильно пострадавших районов с потенциальным риском вспышки ППГ после отступления паводковых вод.В этом исследовании изучается распространенность кишечных гельминтов, передающихся через почву, и связанных с ними факторов среди школьников в Кадувела Минздраве, который был пострадавшим от наводнения районом округа Коломбо.

2. Материалы и методы
2.1. Исследуемая группа и место проведения исследования

Исследование проводилось в 9 выбранных школах в районе Министерства здравоохранения Кадувела (таблица 1) с сентября 2016 г. по март 2017 г. Все выбранные школы расположены в районах, пострадавших от наводнения.

№ студента

Название школы Район

Vidyawardena Vidyalaya Kolonnawa 58

Ediriweera Sarathchandra Vidyalaya Kolonnawa 19

Kotuwila Gamini Vidyalaya Kolonnawa 14

Тибет Махинда Vidyalaya Kolonnawa 20

Ихала Bomiriya СШ Kaduwela 83

Nawagamuwa Sirisumanthissa средняя школа Kaduwela 45

Kothalawala Первичная модель школы Kaduwela 24

Як ала Seelalankara средняя школа Kaduwela 40

Munidasa Kuarathunga средняя школа Kaduwela 70

Всего 373 Grade 1 студентов были зачислены в исследовании после получения информированного письменного согласия родителей/опекунов.Для сбора демографических данных и другой соответствующей информации применялась анкета, основанная на интервьюерах. Далее у каждого студента был взят образец стула. Для сбора образцов каждый родитель/опекун получил маркированный контейнер для сбора кала, и процедура сбора кала была четко объяснена. Хотя было заполнено 373 анкеты и розданы контейнеры для сбора кала, на исследование было возвращено только 156 образцов кала.

2.2. Паразитологическая оценка

Образцы стула были собраны исследователями на следующий день и доставлены на кафедру паразитологии медицинского факультета ГАИТМ.Образцы стула сразу после сбора консервировали в 10% формалине и хранили до исследования. Исследование кала проводили путем наблюдения влажных солевых мазков под микроскопом для обнаружения яиц гельминтов.

При исследовании образцов стула соблюдались стандартные паразитологические лабораторные протоколы. Заражение острицами ( Enterobius vermicularis ) оценивали по наличию перианального зуда и наблюдению родителей за прохождением нитевидных червей ночью.

2.3. Этическая оценка

Исследование было проведено после получения этического разрешения Комитета по этике SAITM (Этическая экспертиза № AS0020-16). Кроме того, было получено разрешение от Департамента образования. Наконец, перед проведением опроса было получено официальное одобрение от директоров каждой школы.

3. Результаты
3.1. Демографические данные учащихся

Всего в исследование было включено 373 ученика 1 класса.Исследуемая группа составила 53,4% студентов мужского пола (таблица 2). Среди студенческого контингента 55,8% учащихся относились к возрастной группе 5-6 лет. Большинство отцов студентов были постоянными работниками (57%), тогда как большинство матерей были домохозяйками (71%).

6-7 лет + 3.5 Отцовский род занятий 2

Variable Номер Процент

Возраст 4-5 лет 6 1.6
5-6 лет 208 55,8
158 42,4

Пол Женский 173 46,4
199 534

Количество членов семьи <3 71 19 0
4 135 2 135 36.2
5 97 26,0
> 6 69 18,5

Отеческое образование Приучение до степени 5 13 3,5
52 13.9 13.9 13.9 165 165 44.2 44.2
Прошло A / L 98 26.3
Высшее образование 13

Повседневный 142 38,1
Постоянная 214 57,4
ООН- трудоустроенные 16 4,3

Материнское образование Обучение до 5 класса 3 124 9120
Passed класс 8 43 11,5
Passed O / L 160 42,9
Passed А / л 115 30,8
Высшее образование 12 3.2 32

Painture 2 68 18.2 2 18.2
Постоянные 39 10.5
265 71.0 71.0

3
o / l: Общий сертификат образования (GCE) Обычный уровень.
A/L: Общий сертификат об образовании (GCE) продвинутого уровня.
3.2. Гельминтозы, передающиеся через почву

После исследования 156 образцов кала с помощью физиологических мазков было выявлено, что ни один из образцов не дал положительных результатов на яйца гельминтов, передающихся через почву.Однако 14 образцов стула были положительными на наличие цист Entamoeba coli .

3.3. Медицинские практики по предотвращению паразитарных инфекций

Среди родителей 61% заявили, что их дети всегда моют руки с мылом перед едой, а 36% заявили, что их дети делают это иногда. Согласно опросу, большинство учащихся (88%) всегда моют руки после посещения туалета, и почти все ученики (86%) пользуются герметичными туалетами, в то время как очень немногие (14%) пользуются уборными с выгребной ямой.

Что касается основного источника питьевой воды, то 73% учащихся использовали воду из-под крана. Кроме того, было установлено, что 67% студентов потребляют воду, очищенную кипячением или фильтрованием (табл. 3).


девяносто одна тысяча четыреста сорок восемь Питьевая вода, обработанная кипячением или фильтрацией

Variable Категория Номер Процент

Мытье рук с мылом перед едой Всегда 227 60.8%
, иногда 134 134 35,9%
22 12 222 12 32221

Стирные руки с мылом после использования туалета всегда 330 88,4%
Иногда 39 10,4%
Редко / никогда 4 1,1%

Мытье фрукты и овощи перед употреблением Всегда 306 82.1%
Иногда 64 17,1%
Редко / никогда 3 0,8%

тапочках на открытом воздухе Да 203 54,4%
NO 170 170 45.6%

ребенка играют с / погрузочный почвой Да 306 82.0%
Нет 67 17,9%

Тип туалетов, используемых детей Flush туалет 321 86,1%
Яма выгребная 52 13,9%

Основной источник питьевой воды 22222222 274 274% 73,4%
Защищенные скважины 76 20.3%
Незащищенный колодец 12 3,2%
Общественный хорошо 2 0,5%
Труба хорошо 9 2,4%

250 250 671%
NO 12222 32,9%


3.4. Противогельминтная профилактика, применяемая участниками исследования

Из 373 учащихся, протестированных в рамках данного исследования, 67% учащихся получали противогельминтные препараты после наводнения. Препарат давали санитарные инспекторы на медицинских программах, проводимых в школах. Хотя большинство из них получали антигельминтные препараты, 17,4% учащихся по-прежнему жаловались на ночной зуд, а родители 23% из них видели гельминтов, выходящих из их заднего прохода ночью. Было замечено, что большинство родителей осознают важность антигельминтной профилактики и регулярно проводят ее на своих детях.

Среди исследуемого населения 170 студентов пострадали от наводнений, во время которых 105 из них остались у родственников, а 47 студентов находились в центрах социального обеспечения. Остальные 18 студентов остались в своих домах, которые были затоплены. В течение этого периода все, кроме 13 учащихся, пользовались общими туалетами со смывом либо в центрах социального обеспечения, либо у родственников. Кроме того, 27% пострадавших семей потребляли пищу, приготовленную самостоятельно, в то время как остальные имели упакованную еду и воду в бутылках.

3.5. Клинические проявления студентов после наводнения

Среди студентов, пострадавших от наводнения, 10%, 4% и 21% имели диарею, рвоту и боль в животе соответственно. Кроме того, 34% студентов имели кожные поражения, а 7,6% и 11,7% студентов жаловались на зуд лица и зуд рук или ног соответственно.

4. Обсуждение

По данным предыдущих исследований, проведенных в Шри-Ланке, за последние десятилетия распространенность инфекций, вызываемых ППГ, снизилась [6, 7].Результаты этого исследования показали нулевую распространенность инфекций, вызываемых геогельминтозами, в районе Министерства здравоохранения Кадувела округа Коломбо даже после сильных наводнений в 2016 году. Это свидетельствует об эффективности антигельминтной профилактики в борьбе с кишечными нематодами. Однако методы концентрации не использовались для обнаружения яиц из-за финансовых ограничений, и это было одним из основных ограничений в этом исследовании.

Существует несколько факторов, обусловливающих передачу гельминтозов [8]. Было обнаружено, что СТГ приводят к задержке роста и плохому когнитивному развитию.В этом исследовании большинство родителей имели школьное образование до 8 класса или выше и были осведомлены о паразитарных инфекциях (образование отца: 44% сдали 8 класс, 26% сдали O/L и 4% сдали A/L; образование: 42% сдали 8 класс, 30% сдали O/L и 3% сдали A/L). Аналогичные результаты наблюдались при отказе родителей от ответа в исследовании, проведенном в Шри-Ланке в 2011 г. [10].

Исследования показали, что распространенность кишечных гельминтозов была высокой среди лиц, выезжавших на открытые поля для дефекации [11, 12].В этом исследовании 86 % учащихся пользовались герметичными туалетами, а 14 % пользовались уборными с выгребной ямой. Кроме того, большинство студентов (88%) всегда мыли руки после посещения туалета. Более половины студентов потребляли воду, очищенную путем фильтрации или кипячения. Эти факторы могли способствовать снижению распространенности кишечных гельминтозов.

Несмотря на то, что 67% школьников после наводнения получали антигельминтные препараты, 17,4% из них жаловались на ночной зуд, а родители 23% из них видели, как ночью из их заднего прохода выходят глисты.Мы не смогли подтвердить наличие инфекции Enterobius vermicularis из-за неспособности родителей реагировать и/или нежелания родителей проводить тест с лентой рано утром у своих детей. Кроме того, исследовательская группа столкнулась с трудностями при установлении связи с домохозяйствами, пострадавшими от наводнения. Это были другие ограничения, которые мы имели в этом исследовании. Но на основании симптомов и наблюдения червей, выходящих из заднего прохода, мы предположили, что инфекция Enterobius vermicularis довольно распространена среди исследуемой популяции.Поэтому учащиеся и родители должны быть осведомлены об инфекции Enterobius vermicularis и ее передаче, а также о профилактике.

Предыдущие исследования в Шри-Ланке показали эффективность применения антигельминтных препаратов для снижения передачи гельминтов [6]. Результаты этого исследования согласуются с ними, потому что даже после наводнения распространенность геогельминтозов была нулевой. Однако у студентов, пострадавших от наводнения, наблюдались поражения кожи (34%), зуд лица (8%), зуд рук или ног (12%).Кроме того, у 10%, 4% и 21% заболевших студентов были диарея, рвота и боль в животе соответственно, несмотря на отсутствие инфекций, вызываемых ППГ. Эти клинические проявления могут быть вызваны бактериальной, вирусной или грибковой этиологией, аллергией, диетическими изменениями, расстройством желудка из-за употребления зараженной пищи, полученной не из дома, употребления неочищенной воды, воздействия паводковых вод и проживания в многолюдных социальных центрах.

Из 170 учащихся, пострадавших от наводнения, 47 учащихся остались в центрах социального обеспечения со своими родителями, но все они не были заражены гельминтозами, передающимися через почву.Эта отрицательная распространенность, вероятно, связана с их хорошей медико-санитарной практикой по предотвращению паразитарных инфекций, а также с использованием противогельминтной профилактики после наводнений. Было замечено, что 67% учащихся прошли профилактику либо в школе, либо у родителей. Важно продолжать рутинную дегельминтизацию, которая практикуется в рамках школьных программ здравоохранения, поскольку это многообещающая стратегия контроля бремени инфекций, вызываемых ППГ, среди школьников. Текущие программы санитарного просвещения наряду с надлежащей санитарией и личной гигиеной рекомендуются для поддержания нулевой распространенности гельминтозов.Тем не менее, в этой области необходимо провести будущие исследования с большим размером выборки и стандартными диагностическими методами для изучения фактической распространенности гельминтозов. В этом исследовании студенты, у которых подозревались какие-либо проблемы со здоровьем, включая гельминтозы, были направлены в бесплатные клиники клинической больницы Невилла Фернандо, Шри-Ланка, где им было предоставлено бесплатное лечение. Всем родителям были даны рекомендации о том, как предотвратить инфекции, вызываемые геогельминтозом, посредством пропаганды передовой медицинской практики. Департаменту образования и всем школам были предоставлены результаты этого опроса и рекомендации.

Доступность данных

Данные, использованные для поддержки результатов этого исследования, можно получить у соответствующего автора по запросу.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Методы диагностики гельминтов, передающихся через почву

Введение

Более 1,5 миллиарда человек, что составляет почти четверть населения мира, инфицированы гельминтами, передающимися через почву (ПГГ). 1 Инфекции, вызываемые геогельминтозами, широко распространены в тропических и субтропических регионах мира, при этом наибольшая распространенность зарегистрирована в странах Африки к югу от Сахары, Китае, Южной Америке и Азии. Более 267 млн ​​детей дошкольного возраста и 568 млн детей школьного возраста проживают в этих районах и нуждаются в лечебно-профилактических мероприятиях. 1 Эти инфекции чаще всего регистрируются у людей, проживающих или путешествующих в регионах с плохим доступом к чистой питьевой воде, санитарии и гигиене, обычно в странах с низким или средним уровнем дохода; или среди уязвимых групп населения в странах с высоким уровнем дохода. 2 Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) признала инфекции, вызываемые четырьмя видами ППГ, а именно. Ascaris lumbricoides , анкилостомы (например, Necator americanus и Ancylostoma duodenale ) и Trichuris trichiura среди забытых тропических болезней (ЗТБ). 1 Совсем недавно в некоторых районах Юго-Восточной Азии в дополнение к человеческим анкилостомам были зарегистрированы зоонозные анкилостомы Ancylostoma ceylanicum . 2 Хотя вирус Strongyloides stercoralis еще не включен в этот список ЗТБ ВОЗ, он также является важным ППГ, учитывая значительную заболеваемость, вызываемую им, и его географическое совпадение с другими ППГ.По оценкам, более 600 миллионов человек инфицированы S. stercoralis во всем мире. 1

Инфекции ППГ обычно клинически бессимптомны, хотя могут наблюдаться неспецифические желудочно-кишечные симптомы и/или эозинофилия. Поскольку геогельминтозы редко вызывают смертность, их влияние на здоровье измеряется с помощью лет жизни с поправкой на инвалидность (DALY). Инфекции ППГ составляют высокое глобальное бремя со значительной заболеваемостью. 3,4 Последние данные показали, что геогельминтозы вызвали 2090 смертей в 2019 году, из них 1.97 миллионов (1,26–3,00) DALY, в которых анкилостомоз был преобладающей причиной. 5 На самом деле, заболеваемость прямо пропорциональна интенсивности инфекции, и у тяжело инфицированных людей, особенно у детей, наблюдаются такие изнурительные последствия, как анемия, кишечная непроходимость, задержка физического или когнитивного развития. 6–8 Железодефицитная анемия, вызванная заражением анкилостомами во время беременности, связана с неблагоприятными исходами для матери и плода, включая недоношенных детей и детей с низкой массой тела при рождении, нарушение лактации и т. д. 9

На рубеже нового тысячелетия профилактическая химиотерапия (ПК) у детей школьного возраста была одобрена ВОЗ для контроля геогельминтозов и дополнительно закреплена в Лондонской декларации 2012 г. по ЗТБ с конечной целью остановить передачу геогельминтозов. 10–12 ВОЗ рекомендует комплексный подход, который включает доступ к чистой воде, содействие санитарии, гигиене и санитарному просвещению, наряду с массовым введением лекарств детям, и ожидается, что при постоянных усилиях элиминация ППГ будет достигнута к 2030 году. 11 Следует отметить, что каждый вид ППГ имеет свои эпидемиологические особенности и возрастные закономерности распространенности инфекции (максимальная распространенность A. lumbricoides и T. trichiura обычно наблюдается у детей раннего возраста, тогда как пиковая распространенность анкилостомоз наблюдается в подростковом или раннем взрослом возрасте), уровень реинфекции (короткоживущие гельминты заражаются быстрее), 12 и различная чувствительность к альбендазолу, 13 , что может повлиять на эффективность стратегии ПК. 13 Кроме того, взрослые не являются мишенями для РПЖ и остаются важными резервуарами для повторного заражения пролеченных детей. Хотя ПК применяется без необходимости оценки индивидуального инфекционного статуса, точные оценки распространенности с использованием высокочувствительной диагностики важны для установления интенсивности инфекции в разных регионах. Диагностика также информирует об эффективности мер контроля с точки зрения снижения распространенности и/или интенсивности инфекций, что может определять частоту профилактической химиотерапии.

Эпидемиологические данные свидетельствуют о повышенной распространенности инфекций, вызываемых ППГ, в связи с непосредственным контактом со сточными водами, почвой с илом и/или употреблением в пищу овощей, орошаемых ими. 14 Таким образом, помимо выявления клинических инфекций, важно также выявление ППГ в таких образцах. В этом обзоре мы подробно остановимся на различных инструментах для диагностики ППГ в клинических образцах, сточных и сточных водах.

Традиционно диагностика геогельминтозов проводится путем микроскопического исследования кала или других образцов желудочно-кишечного тракта на наличие яиц, личинок или взрослых глистов.Однако выбор диагностического метода также зависит от того, используется ли он в условиях высокой или низкой эндемичности, поскольку для эпиднадзора в низкоэндемичных районах, путешественников из этих регионов или на этапе элиминации потребуются высокочувствительные методы.

Методы на основе микроскопии

Обнаружение ППГ с помощью микроскопии, несмотря на его простоту и низкую стоимость, не обладает достаточной чувствительностью из-за многих факторов, включая прерывистое выделение яиц паразита, низкую интенсивность инфекции ниже предела обнаружения, неправильную транспортировку или хранение образца, приводящее к распаду паразита и т. д. .Морфология паразита может искажаться из-за хранения или медикаментозного лечения. Таким образом, в течение 10 дней следует исследовать не менее трех образцов свежих фекалий и использовать некоторые методы концентрации паразитов. 15–17 Различные диагностические тесты на основе микроскопии для диагностики геогельминтозов представлены на рис. 1.

Рисунок 1 Краткий обзор преимуществ (оранжевый) и недостатков (фиолетовый) микроскопических диагностических тестов на гельминты, передающиеся через почву.

Подготовка для влажного монтажа

Гладкий жидкий препарат кала с физиологическим раствором и йодом исследуют на наличие личинок или яиц гельминтов. Характеристики различных яиц или личинок ППГ представлены на рис. 2.

Мазок Като-Каца

16

В настоящее время метод Като-Каца (КК) является рекомендованным ВОЗ «золотым стандартом» для обнаружения яиц ППГ, а также для яиц Schistosoma , особенно когда требуется количественный анализ яиц.Используется несколько модификаций Като-Каца. Вкратце, крупные частицы удаляются путем продавливания фекалий через сито с последующим переносом известного количества образца на предметное стекло через шаблон с отверстием, которое удерживает фиксированное количество фекального материала (например, отверстие диаметром 9 мм на предметном стекле). шаблон толщиной 1 мм вмещает около 50 мг фекалий). Шаблон удаляют, а оставшийся образец покрывают целлофаном, смоченным в растворе глицерин-метиленового синего. Предметные стекла следует хранить при комнатной температуре или в инкубаторе при 40°C (за исключением анкилостомы) для удаления фекальных остатков.Микроскопическое исследование лучше всего проводить через 24–48 часов. Яйца гельминтов на грамм стула (ЭПГ) рассчитывают как: количество яиц в мазке × 20 (для матрицы 50 мг) для измерения интенсивности инфекции. 17 T. trichiura, A. lumbricoides и Яйца Schistosoma легко обнаруживаются и остаются распознаваемыми в течение нескольких месяцев с помощью метода Като-Каца, но он неэффективен для выявления инфекции анкилостомы, поскольку эти яйца имеют тенденцию к раннему распаду (в течение 60 минут), что приводит к ложноотрицательным результатам. 18 Кроме того, личинки S. stercoralis также остаются необнаруженными. Хотя Като-Кац экономически эффективен и прост в выполнении, образцы с низкой интенсивностью инфекции и разным временем очистки / дезинтеграции могут препятствовать одновременному обнаружению различных ППГ. 16 Сводка репрезентативных исследований, оценивающих эффективность Като-Каца с другими методами, основанными на микроскопии, представлена ​​в таблице 1.

Таблица 1 Резюме репрезентативных исследований по оценке эффективности исследования толстого мазка по Като-Кацу

Методы концентрации паразитов в стуле

Микроскопическое обнаружение паразитов можно улучшить, используя различные методы, которые концентрируют паразита в образце и удаляют фекальные остатки.Эти методы основаны либо на принципе флотации, либо на принципе центробежного осаждения.

Технологии на основе центрифугирования

Метод концентрации эфира формола или этилацетата (FEC) может использоваться как для свежих, так и для консервированных образцов и позволяет извлекать паразитов путем центрифугирования в фекальный осадок. Вкратце, небольшое количество образца стула пропускают через два слоя марли в коническую пробирку, содержащую 0,85 % солевого раствора или 10 % формалина, а затем перемешивают. К фекальной суспензии добавляют этилацетат для извлечения жира и дебриса и центрифугируют пробирку (500 g минимум 10 мин), оставляя паразитов в осадке.Супернатант декантируют, а осадок ресуспендируют в физиологическом растворе или 10% формалине и исследуют в виде влажного препарата с использованием объективов 10x и 40x, с йодом или без него. Разбавленный формалин или ацетат натрия-уксусная кислота-формалин (SAF) используются для инактивации микроорганизмов и минимизации риска лабораторной инфекции через фекалии. Образцы стула ФЭК можно исследовать через несколько часов или дней после консервации образца в формалине. Однако этот метод имеет недостатки из-за использования эфира, который является взрывоопасным, раздражающим дыхательные пути и может быть вреден для персонала лаборатории, а также требует много времени. 16 Николай и др. (2014) провели метаанализ чувствительности различных диагностических методов для геогельминтозов в отсутствие истинного золотого стандарта. 30 Несколько исследований, в которых сравнивались различные микроскопические методы с методом Като-Каца, представлены в таблице 1.

Недавно компания DiaSys Europe разработала закрытый одноразовый метод концентратора фекальных паразитов Parasep ® SF. Это удаляет остатки пробы и жир с помощью двухступенчатой ​​фильтрующей матрицы. Он не использует никаких потенциально вредных химических агентов и, кроме того, удобен в использовании, экономит время и экономит средства для диагностики гельминтозов в крупномасштабных эпидемиологических исследованиях. 31 Разработана модификация этого метода – концентратор фекальных паразитов Mini Parasep ® SF. Хотя эта модификация широко оценивалась при протозойных инфекциях, ее эффективность для диагностики ППГ сообщается лишь в нескольких исследованиях. 29–32 При использовании Mini Parasep ® был отмечен более четкий фон с меньшим количеством фекальных остатков и более высокий выход T. trichiura . 29,31–34 Кроме того, среднее время обработки с Parasep ® намного меньше, чем при обычной концентрации формол-эфир-ацетата (4–5 мин против 10–15 мин/образец), что является значительным временем. -заставка.Однако обычная ФЭК стоит меньше, чем Парасеп® (0,30 против 0,9 долларов США за образец). 33 Более высокая чувствительность Mini Parasep ® SF была зарегистрирована для A. lumbricoides , Kato-Katz для T. trichiura и McMaster для яиц анкилостомы. 34

Флотационные технологии

Большинство яиц паразитов имеют удельный вес 1,05–1,20, что позволяет им всплывать, когда образец стула смешивается с раствором с высоким удельным весом (диапазон 1.18–1.27). Обычно используемые флотационные растворы представляют собой сульфат цинка или соляной раствор. Технологии-преемники метода центробежной флотации Cornell Wisconsin, а именно метод McMaster и FLOTAC/Mini-FLOTAC, показали себя многообещающе. 17,28,35,36

Техника Макмастера

В этом методе используется счетная камера, которая позволяет исследовать под микроскопом известный объем фекальной взвеси (2 × 0,15 мл). Камера Макмастера состоит из двух отсеков, на верхней поверхности каждого из которых выгравирована сетка.При заполнении взвесью фекалий во флотационной жидкости большая часть мусора тонет, а яйца всплывают на поверхность под сеткой, где их можно легко увидеть и относительно быстро подсчитать. При известном весе фекалий и объеме флотационной жидкости, используемой для приготовления суспензии, количество ЭПГ можно легко получить, умножив количество яиц под отмеченными областями на простой коэффициент преобразования. 21 Метод Макмастера недорогой, простой и широко используется в ветеринарной паразитологии и даже в исследованиях на людях для оценки степени излечения от глистов. 35 Согласно недавнему метаанализу, общие диагностические характеристики метода Макмастера и метода Като-Каца сопоставимы для ППГ. 30 В исследовании, проведенном Periago et al., метод Като-Каца превзошел метод Макмастера для всех трех ППГ, особенно для обнаружения неоплодотворенных яиц A. lumbricoides . 21 Причиной низкой эффективности флотационных методов для обнаружения неоплодотворенных яиц Ascaris является их высокий удельный вес (SG = 1.18) и отсутствие липоидной мембраны, препятствующей уравновешиванию яйца внешней флотационной средой, в результате чего яйцо тонет, а не всплывает в солевом растворе. 21,22,36 Этот недостаток и необходимость специальной счетной камеры являются недостатками этой методики.

ФЛОТАК

Центробежная флотация является основой технологии FLOTAC и состоит из цилиндрического устройства с двумя флотационными камерами вместимостью 5 мл, что позволяет анализировать больше фекального материала по сравнению с методом Като-Каца (100 мг против 42 мг). 37–39 Обладает высокой чувствительностью и дополнительным преимуществом закрытой системы, которая защищает операторов, сохраняет образец и даже позволяет проводить повторные последующие исследования образцов. Однако методологическая сложность и потребность в специальном устройстве для центрифугирования проб могут ограничивать его применимость в лабораториях с ограниченными ресурсами. Mini-FLOTAC представляет собой упрощенную версию этого устройства без этапа центрифугирования. 20,22,37–39 Недавний метаанализ выявил чувствительность прибл.92,7% для FLOTAC против 42,8% для прямой микроскопии. 30 Метод Като–Каца имел чувствительность 74–95 % для выявления всех ППГ при высокой интенсивности инфекции, которая снижается до 53–80 % в условиях низкой интенсивности инфекции, с самой низкой эффективностью для A. lumbricoides и анкилостомы. Метод FLOTAC обладает наибольшей чувствительностью в условиях как низкой, так и высокой интенсивности инфекции; однако среднее количество яиц значительно ниже по сравнению с методом Като-Каца. 25,26,30 Таким образом, перед рекомендацией для широкомасштабного использования в сообществе необходима валидация этого метода в различных эпидемиологических условиях с различной интенсивностью инфекций.

Цифровая микроскопия

Для обеспечения объективной оценки существующих технологий и определения приоритетности продуктов для использования в программах контроля геогельминтозов была сформулирована подробная структура, позволяющая связать точки принятия программных решений с аналогичными профилями целевых продуктов (TPP). 40 Были предложены три возможности улучшения диагностики геогельминтозов: «Во-первых, интеграция контроля/обеспечения качества обработки образцов и подсчета яиц; во-вторых, увеличение пропускной способности образца и; в-третьих, подключение к Интернету, чтобы сделать результаты испытаний доступными для удаленной интерпретации. 40 Этим техническим требованиям соответствует FECPAK G2 , инструмент, разработанный для подсчета яиц гельминтов в образцах фекалий овец, крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов и т. д. 40 В FECPAK образец стула, растворенный во флотационном растворе, трубка с центральной стойкой и яйца концентрируются в одном микроскопическом поле зрения. Затем вложение делает изображения яиц, которые накопились, в одной области просмотра, и это цифровое изображение сохраняется и загружается в Интернете. 41 В исследовании Moser et al. чувствительность 75,6%, 71,5% и 65,8% для обнаружения A. lumbricoides , анкилостомы и T. trichiura , соответственно, наблюдалась для FECPAK G2 , что было намного ниже, чем метод Като-Каца. 42 Однако при тщательной разработке это могло бы стать интересным эпидемиологическим и диагностическим инструментом.

Технология «Лаборатория на диске»

Еще одним методом, соответствующим требованиям TTP, является технология «лаборатория на диске» (LOD).Это микрофлюидная платформа, основанная как на центрифугировании, так и на флотации яиц для концентрации в зоне визуализации с последующим захватом изображения. 43 Этот метод имеет потенциал для применения в местах оказания медицинской помощи, однако необходимо обеспечить адекватную подготовку и обучение пользователей, а также аспекты управления качеством с точки зрения калибровки и технического обслуживания устройства. Полевая оценка технологии LOD в образцах человека из Эфиопии показала успешный захват яиц STH в зоне просмотра изображения устройства LOD даже в условиях низкой интенсивности заражения. 43 Наблюдалось почти идеальное совпадение с Mini-FLOTAC (показатель Каппа: 0,91); на самом деле, по методике LOD было подсчитано больше яиц.

Культуральные методы

Использование культуры паразита при инфекциях, вызываемых ППГ, редко является основой для диагностики и в основном применяется в исследовательских целях, за исключением выделения S. stercoralis. 44–46 Однако следует соблюдать большую осторожность, поскольку личинки заразны и могут представлять биологическую опасность для персонала лаборатории.Сводка различных используемых методов обнаружения личинок представлена ​​в таблице 2.

Таблица 2 Характеристики методов обнаружения личинок для диагностики стронгилоидоза или анкилостомоза

Серологические методы

Обнаружение антител

Обнаружение антител в сыворотке не особенно полезно для диагностики ППГ, за исключением S. stercoralis . Хотя непрямая иммунофлуоресцентная микроскопия (IFAT) и тест агглютинации частиц желатина (GPAT) обладают высокой чувствительностью (81–98%) и специфичностью (74%), потребность в большом количестве живых инфекционных личинок ограничивает их использование. 44,47 Иммуноблот-анализ с использованием антигенов S. stercoralis и S. ratti использовался в исследовании 2003 г. для преодоления этого недостатка и показал чувствительность в диапазоне 65–100%. 48 Однако дальнейших отчетов об оценке этих тестов нет, поэтому их достоверность вызывает сомнения.

Неочищенные экстракты нитевидных личинок из S. stercoralis/S. venezuelensis или S. ratti использовались в нескольких собственных иммуноферментных анализах (ИФА) и коммерческих наборах с чувствительностью от 73 до 100% , и плохая производительность у лиц с ослабленным иммунитетом. 49 Ложноположительные результаты при инфекциях, вызванных Echinococcus и Toxocara , реже наблюдаются при использовании ELISA по сравнению с IFAT. Стоит отметить, что исследования на основе ELISA были выполнены в дизайне исследования случай-контроль с использованием образцов сыворотки от пациентов с установленным стронгилоидозом по сравнению со здоровым контролем, а не с лицами, инфицированными другими нематодными инфекциями, что приводит к ложно завышенным оценкам эффективности. Другой проблемой является переоценка бремени болезни серологическими методами по сравнению с недооценкой паразитологическими методами, поскольку исследование кала само по себе является несовершенным золотым стандартом.Хотя наблюдается повышенная специфичность на 13,3% при замене IgG на IgG4 в ИФА Strongyloides , очень немногие исследования были сосредоточены на обнаружении других изотипов антител. 50

Система иммунопреципитации люциферазы (LIPS) была разработана с использованием рекомбинантного антигена Strongyloides (NIE). 51,52 Это экспресс-тест (< 3 часов) с хорошей чувствительностью (97%) и специфичностью (100%) без перекрестной реакции. 52 Кроме того, в нем используется рекомбинантный антиген, что обеспечивает массовое производство и очистку по сравнению с трудоемкой подготовкой неочищенного антигена, которая зависит от сбора стула инфицированных людей/животных.Обнаружение специфических антител IgG и IgG4 с использованием меченого люциферазой рекомбинантного белка Ss-NIE-1 S. stercoralis с помощью LIPS показало чувствительность и специфичность 93% и 95% соответственно. 53 Недавно был разработан анализ латерального потока с помощью полоски с использованием рекомбинантных белков NIE (rNIE) и рекомбинантных белков Ss1a (rSs1a). Он продемонстрировал чувствительность 91,3% и специфичность 100% для серодиагностики стронгилоидоза и заслуживает дальнейшей оценки. 54

Обнаружение копроантигена

Обнаружение копроантигена потенциально может быть использовано в иммунологических тестах по месту оказания медицинской помощи, таких как тест на малярию.Сообщалось, что обнаружение копроантигена S. stercoralis с помощью ELISA имеет хорошую чувствительность и специфичность, но дополнительные результаты его оценки отсутствуют. 55 Недавно BA-1, экскреторно-секреторный продукт A. lumbricoides , был исследован в качестве копроантигенного маркера инфекции с помощью ELISA. 56 Ascaris BA-1 ELISA имел нижний предел количественного определения 2,74 нг/г стула, и его оценка на панели образцов стула детей школьного возраста, проживающих в Кении, показала чувствительность и специфичность 91.5% и 95,3% соответственно. Помимо качественной оценки инфекции, также наблюдалось количественное отражение интенсивности инфекции, и было обнаружено, что значение 18,2 нг/г стула ABA-1 является границей между низкой и умеренной интенсивностью инфекции. Также было замечено, что уровни ABA-1 сильно снизились после лечения. Коммерческий набор для обнаружения антигенов Ascaris , анкилостомоза и Trichuris был запатентован и продается лабораториями IDEXX для использования в ветеринарии. 57

Недавно также были оценены мочевые биомаркеры инфекции A. lumbricoides , такие как 2-метилбутирамид, 2-метилпентаноилкарнитин (2-MPC) и метаболиты 2-метилвалерамида. 58,59 Из них было установлено, что 2-MPC имеет точность 85,7% для обнаружения инфекции с лучшей эффективностью (точность 90,5%) для умеренной и тяжелой инфекции. 58 Значительное снижение после лечения альбендазолом также наблюдалось со значительной связью между уровнями 2-MPC в моче и количеством червей/яиц. 58 Однако те же авторы не обнаружили этот биомаркер у инфицированных индонезийцев. 59

Молекулярные методы

За последнее десятилетие усилия по разработке и оценке методов молекулярной диагностики геогельминтозов приобрели импульс для эпидемиологических исследований, чтобы определить интервенционные стратегии и диагностику у путешественников, возвращающихся из эндемичных районов. 60 Однако по-прежнему не хватает молекулярных платформ для обнаружения ППГ. Частично трудность оценки эффективности молекулярных тестов связана с отсутствием оптимального золотого стандарта, поскольку, как правило, методы микроскопического исследования кала используются в качестве эталонного стандарта, хотя и имеют низкую чувствительность.До сих пор нет четких соответствующих критериев для проверки ПЦР, разработанных в лаборатории. Диагностическая надежность молекулярных методов также зависит от эффективности выделения ДНК и сохранения образцов перед их тестированием. В образцах кала много ингибиторов, влияющих на чувствительность ПЦР. Более того, сохранение образцов в формалине также тормозит ПЦР. Следует отметить, что яйца гельминтов, особенно T. trichiura , труднее разбить, что влияет на эффективность выделения ДНК и ПЦР. 60,61 Аяна и др. (2019) сравнили четыре метода выделения и сохранения ДНК для молекулярного обнаружения и количественного определения гельминтов, передающихся через почву, в образцах фекалий и обнаружили значительные различия в восстановлении ДНК 60 . Однако, если образцы хранились в консерванте, не было потери чувствительности, связанной с задержкой выделения ДНК, что делает его пригодным для сбора образцов в консервантах из отдаленных районов и их последующего анализа в удаленной лаборатории. 60

Большие успехи в секвенировании геномов нематод при наличии данных о последовательностях нематод облегчили открытие и разработку анализов, основанных на более чувствительных и видоспецифичных геномных мишенях. 61,62 Рибосомные последовательности и митохондриальные мишени, такие как цитохромоксидаза, обнаружены в большинстве эукариотических клеток, что делает их привлекательными мишенями. 62 При ППГ большая часть генома состоит из повторяющихся некодирующих элементов ДНК, которые являются полезными мишенями ПЦР для ПЦР. 63 Следует отметить, что некоторые типы повторяющихся ДНК, такие как простые короткие нуклеотидные повторы или вариации последовательности внутри повтора, влияют на пригодность молекулярных анализов на основе повторов. 63,64 Повторы могут быть вариабельного типа (т. е. количество копий не соответствует внутри вида) или постоянного типа (количество копий постоянно в пределах вида), и понимание этой изменчивости для каждого вида и ее влияния на чувствительность любого молекулярного анализа. 64 Разработка новых мишеней для анализов КПЦР на основе повторов упрощается благодаря новым биоинформационным инструментам, таким как RepeatExplorer, TAREAN и т. д., которые могут помочь в амплификации всего лишь 20 мкг (аттограмм) геномной ДНК. 63

Гены-мишени, используемые в ПЦР для выявления ППГ, показаны в таблице 3.

Таблица 3 Генные мишени, используемые для молекулярной диагностики гельминтов, передающихся через почву

Основное преимущество ПЦР-тестов заключается в их более высокой чувствительности и возможности мультиплексирования для выявления сопутствующих инфекций, хотя одиночная ПЦР немного более чувствительна по сравнению с мультиплексными анализами. 65,66 Использование количественной ПЦР (кПЦР) дает еще более точные оценки распространенности по сравнению с микроскопией и поддается мультиплексированию. 69,70 Более того, поскольку частота массового лечения наркозависимости населения определяется распространенностью заболевания в сообществе, которая, в свою очередь, в значительной степени зависит от чувствительности используемого диагностического теста, количественная ПЦР играет большую роль в играть для точных оценок, а также после завершения MDA, когда очень важно определить порог, ниже которого может произойти рецидив заболевания. 69 Однако количественная ПЦР может быть технически сложной, сложной и дорогой, а в разных лабораториях отсутствует стандартизация. Кроме того, не очень просто сопоставить копии молекулярной мишени с количеством яиц в фекалиях и количеством червей в кишечнике, поскольку количество копий этой мишени и разница в плоидности среди неоплодотворенных и оплодотворенных яиц различаются. 69 Эти препятствия постепенно устраняются, и предпринимаются усилия по коммерциализации этих тестов.

В недавнем исследовании по оценке диагностической эффективности методов Kato–Katz, Mini-FLOTAC, FECPAK G2 и количественной ПЦР все диагностические методы показали чувствительность ≥90% для всех инфекций, вызываемых ППГ средней и тяжелой степени тяжести.Однако только кПЦР обладала чувствительностью, которая превосходила одиночный анализ Като-Каца для всех ППГ или инфекций очень низкой интенсивности. Для количественной ПЦР наблюдалась положительная значимая корреляция между количеством яиц одного Като-Каца и концентрацией ДНК. qPCR — единственный метод, который можно рассмотреть на этапе, направленном на получение подтверждения прекращения программы. 35 Кроме того, объединение образцов было проверено в качестве стратегии сокращения затрат и времени и оказалось экономически эффективным, экономящим время и труд без потери чувствительности или точности. 71

Более новый молекулярный инструмент, анализ петлевой амплификации (LAMP) представляет собой одноэтапный метод изотермической амплификации последовательностей ДНК-мишеней. 72–76 Для него требуется только нагревательный блок или инкубатор/водяная баня, и он более устойчив к биологическому ингибированию. Для повышения чувствительности можно использовать флуоресцентные зонды, ДНК-функционализированные наночастицы золота и т. д. Однако из-за трудностей с дизайном праймеров, ложноположительных результатов и перекрестной контаминации необходима дальнейшая валидация анализов LAMP.Недавно был разработан колориметрический изотермический анализ с использованием праймера SmartAmp2 для идентификации СТГ путем нацеливания на амплификацию специфической последовательности гена β-тубулина, визуализируемой красителем гидроксинафтоловым синим (HNB) в формате LAMP. 73 Уникальная асимметричная конструкция праймера делает этот анализ очень специфическим с легкой визуальной проверкой результатов, что позволяет использовать его в качестве портативного инструмента для полевых исследований.

Другие вспомогательные средства для клинической диагностики

Низкий гемоглобин, низкий уровень ферритина и эозинофилия (>600 мкл или>6% по данным тонкослойной хроматографии) могут быть использованы как косвенные индикаторы инфекции ППГ. 16 Скрытая кровь в кале использовалась в качестве суррогатного маркера хронической анкилостомозной инфекции. 77 При аскаридозе в мокроте могут быть обнаружены кристаллы Шарко-Лейдена и эозинофилы. В случае S. stercoralis материал двенадцатиперстной кишки можно исследовать на наличие личинок с помощью нити-теста (или капсулы для энтеротеста). 44 Сообщалось также об использовании других исследований, таких как диагностическая радиология, гистопатология и внутрикожные кожные тесты, но они редко используются рутинно. 16

Выбор правильного метода диагностики

Несмотря на значительный прогресс в борьбе с геогельминтозами за несколько десятилетий, мы все еще далеки от определения полностью адекватного диагностического теста. В целом консенсус по-прежнему заключается в том, чтобы стремиться к разработке новых чувствительных технологий или дальнейшей оптимизации существующих методов. Чтобы выбрать из существующего арсенала диагностических тестов, несколько аспектов, которые заслуживают рассмотрения, — это диагностическая эффективность, экономическая эффективность, простота выполнения, быстрота и применимость в полевых условиях.Помимо эффективности метода как такового, адекватное обучение и строгие меры контроля/обеспечения качества значительно улучшают эффективность любого диагностического анализа. Важно отметить, что на разных этапах программ контроля геогельминтозов потребуются разные методы; микроскопии будет достаточно для картирования распространенности в географической области, но потребуются более чувствительные молекулярные тесты для эпиднадзора после MDA и для измерения успеха программ контроля.

Обнаружение ППГ в пробах окружающей среды

Обнаружение яиц ППГ и количественный анализ в других типах проб, таких как сточные воды, шлам, растения и т. д., также важно для борьбы с этими инфекциями. К сожалению, из-за различий в содержании влаги и количестве твердых частиц или частиц почвы и т. д. в пробах окружающей среды существует значительная неоднородность в обнаружении ППГ в этих пробах. 78 Традиционные микроскопические методы в значительной степени нечувствительны, отнимают много времени и труда для проб окружающей среды. Таким образом, в настоящее время все чаще применяются различные модификации традиционных методов и новые молекулярные технологии.Из-за растворения в окружающей среде концентрации яиц гельминтов в сточных водах обычно очень низкие, что требует использования больших объемов (1–10 л) для обнаружения. Основным препятствием для молекулярного обнаружения яиц ППГ является выделение нуклеиновой кислоты хорошего качества и количества из-за твердой яичной скорлупы и большого количества взвешенных твердых частиц или ингибиторов ПЦР в большинстве образцов. Высокая концентрация СТГ может наблюдаться в иле, твердых биологических веществах и компосте, поскольку яйца прикрепляются к твердым частицам, и, таким образом, обычно берется около 2–5 г сухого веса ила.Достаточное количество образца почвы варьируется от 10 до 50 г сухой почвы, в основном из верхнего слоя 0–5 см. В песке наблюдается более высокий выход яиц и меньшая вариабельность количества яиц, чем в глине и иле. 80 Для образцов овощей предпочтительный вес составляет 100–250 г (меньше для травы). Однако следует отметить, что даже при одинаковых объемах пробы концентрация яиц гельминтов различается по регионам в зависимости от локальной распространенности инфекции и содержания соли в пробе. 78 Кроме того, важно определить количество жизнеспособных яиц ППГ для оценки риска в соответствии с международными рекомендациями. 78–81 Схематическая диаграмма, изображающая этапы обнаружения ППГ в пробах окружающей среды, показана на рисунке 3.

Рисунок 3 Схематическая диаграмма, изображающая этапы обнаружения ППГ в пробах окружающей среды. * экстракцию фазы можно проводить после стадии флотации.

Вкратце, образцы необходимо сначала гомогенизировать, чтобы разбить грубый материал на более мелкие частицы, а затем отделить яйца от частиц с помощью различных растворов (в основном, анионных детергентов).Затем образцы фильтруют, тем самым пропуская яйца для дальнейшего анализа. Образцы концентрируют осаждением или флотацией. Фазовую экстракцию для удаления растворимого в липидах/эфире материала из образцов можно проводить после флотации с использованием этилацетата и диэтилового эфира (для липофильной экстракции) и буфера из серной и ацетоуксусной кислот (для гидрофильной экстракции). Время воздействия должно быть минимальным, чтобы уменьшить неблагоприятное воздействие химикатов на морфологию яйца и восстановление.

После этого оценивают количество жизнеспособных яиц ППГ в образце. Оценку жизнеспособности можно провести путем инкубации для развития личинок, что требует много времени и зависит от опыта наблюдателя. Жизнеспособные и нежизнеспособные яйца также можно отличить с помощью витальных красителей. Еще один новый и быстрый метод основан на дифференциальной целостности жизнеспособных и нежизнеспособных клеточных мембран с использованием набора BacLight LIVE/DEAD Viability Kit, который изначально был разработан для подсчета жизнеспособных бактерий. 82

Недавно было разработано программное обеспечение или системы анализа изображений для идентификации и количественного определения яиц гельминтов в сточных водах с использованием различных инструментов обработки изображений и алгоритмов распознавания образов. 82 Они имеют заявленную чувствительность 80–90% и специфичность 99% в зависимости от общего содержания взвешенных твердых частиц в пробах сточных вод, а время, необходимое для исследования каждой пробы, составляет менее минуты. Следует помнить, что даже при использовании такого программного обеспечения окончательная идентификация все равно зависит от правильной обработки образца.Улучшение оптики с обеспечением более качественных изображений потенциально может использовать смартфоны, позволяя проводить консультации с удаленными экспертами для интерпретации тестов, особенно для обследований в отдаленных районах и районах с низким уровнем дохода.

Молекулярные методы, такие как ПЦР в реальном времени (кПЦР), цифровая/капельная ПЦР (ддПЦР) и т. д., также позволяют точно обнаруживать яйца ППГ в пробах окружающей среды. 76 Применение ddPCR в пробах воды домашней птицы показало лучшую эффективность по сравнению с qPCR и культуральными методами для обнаружения зоонозных патогенов. 82,83 Тем не менее, необходимы дальнейшие исследования по оптимизации ПЦР на основе чипов или ddPCR в образцах окружающей среды. Другой подход — проточная цитометрия, основанная на дифференциации яиц по размерам. 78 Фактически, флуоресцентное окрашивание может даже позволить нам определить стадию развития или жизнеспособность яйца. Однако стоимость оборудования и потребность в обученном персонале могут стать препятствием для применения этого метода.

Заключение

Инфекция, вызываемая геогельминтозом, оказывает существенное социально-экономическое воздействие и влечет за собой огромные физические последствия и последствия для развития инфицированного населения.Микроскопическое исследование кала является приемлемой мерой для оценки уровня инфекции в эндемичных районах с высокой интенсивностью. Чувствительность методов, основанных на микроскопии, может быть значительно повышена путем надлежащего обучения соответствующего персонала лаборатории. Однако основная проблема традиционных методов заключается в том, что они отнимают много времени и включают громоздкие процедуры анализа проб. В таких областях могут быть полезны менее громоздкие и более чувствительные методы FLOTAC. Однако в районах с низкой эндемичностью или на этапе элиминации применимость методов, основанных на микроскопии, ограничена, и могут потребоваться более чувствительные молекулярные методы, такие как ПЦР.Было показано, что количественная ПЦР с ее способностью обеспечивать оценку интенсивности инфекции имеет потенциал, особенно когда рассматривается прекращение вмешательства путем массового введения лекарств или для наблюдения за геогельминтозами в низкоэндемичных районах или у путешественников, возвращающихся из эндемичных регионов. Кроме того, молекулярные методы важны для обнаружения новых/появляющихся видов. Тем не менее, необходимы более тщательные исследования, чтобы точно связать данные количественной ПЦР с заражением червями.

Перспектива будущего

Разработка новых диагностических методов с широким спектром применимости в различных матрицах образцов является обязательным условием для обнаружения ППГ.Хотя разработка молекулярных инструментов имеет многочисленные преимущества в контексте чувствительности, простоты выполнения, воспроизводимости и автоматизации, у них все еще есть много недостатков; наиболее важным из них является высокая стоимость, которая ограничивает применимость в регионах, где сложное оборудование и надлежащее обучение пользователей невозможны. Однако предпринимаются попытки объединения образцов и рентабельных модификаций существующих молекулярных методов, чтобы обойти проблемы, связанные с ПЦР.

Возможно обнаружение антител/антигенов, но их необходимо оценить в полевых условиях.Разработка новых методов, оцифровка/автоматизация процедур, внедрение четких протоколов, идентификация новых биомаркеров и мультиплексирование открывают перспективы для диагностики геогельминтозов. Кроме того, обязательна тщательная многоцентровая валидация новых диагностических тестов, особенно в условиях низкой эндемичности.

Раскрытие информации

Авторы сообщают об отсутствии конфликта интересов в этой работе.

Каталожные номера

1. Гельминтозы, передающиеся через почву. Доступно по адресу: https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/soil-transmitted-helminth-infections. По состоянию на 16 декабря 2020 г.

2. Колелла В., Брэдбери Р., Трауб Р. Ancylostoma ceylanicum. Тренды Паразитол . 2021; 25: S1471–4922. doi:10.1016/j.pt.2021.04.013

3. Hotez PJ, Alvarado M, Basáñez MG, et al. Исследование глобального бремени болезней, 2010 г.: интерпретация и последствия для забытых тропических болезней. PLoS Negl Trop Dis . 2014:8. doi:10.1371/journal.pntd.0002865

4.Хай С.И., Абаджобир А.А., Абате К.Х. и др. Глобальные, региональные и национальные годы жизни с поправкой на инвалидность (DALY) для 333 заболеваний и травм и ожидаемая продолжительность здоровой жизни (HALE) для 195 стран и территорий, 1990–2016 гг.: систематический анализ для исследования глобального бремени болезней, 2016 г. Ланцет . 2017; 390:1260–1344. дои: 10.1016/S0140-6736(17)32130

5. Кишечные нематодозы — причина 3 уровня | Институт показателей и оценки здоровья n.d. Доступно по адресу: http://www.healthdata.org/results/gbd_summaries/2019/intestinal-nematode-infections-level-3-cause. По состоянию на 18 января 2021 г.

6. Kuong K, Fiorentino M, Perignon M, et al. Когнитивные способности и статус железа отрицательно связаны с анкилостомозом у камбоджийских школьников. Am J Trop Med Hyg . 2016;95:856–863. doi:10.4269/ajtmh.15-0813

7. Clarke NE, Clements ACA, Doi SA, et al. Дифференциальный эффект массовой дегельминтизации и целенаправленной дегельминтизации для борьбы с передающимися через почву гельминтами у детей: систематический обзор и метаанализ. Ланцет . 2017; 389: 287–297. дои: 10.1016/S0140-6736(16)32123-7

8. Пабалан Н., Сингиан Э., Табангай Л., Джарджанази Х., Бойвин М.Дж., Эзеамама А.Е. Передающиеся через почву гельминтозы, потеря образования и когнитивные нарушения у детей школьного возраста: систематический обзор и метаанализ. PLoS Negl Trop Dis . 2018;12(1):e0005523. doi:10.1371/journal.pntd.0005523

9. Гаррисон А., Бойвин М., Хошнуд Б. и др. Гельминтная инфекция, передающаяся через почву, во время беременности и долгосрочное нейрокогнитивное и поведенческое развитие ребенка: предполагаемая когорта матери и ребенка в Бенине. PLoS Negl Trop Dis . 2021;15(3):e0009260. doi:10.1371/journal.pntd.0009260

10. Андерсон Р., Траскотт Дж., Холлингсворт Т.Д. Охват и периодичность массового применения препаратов необходимы для ликвидации персистентной передачи почвенных гельминтов. Philos Trans R Soc B Biol Sci . 2014;369(1645):20130435. doi:10.1098/rstb.2013.0435

11. Монтрезор А., Мупфасони Д., Михайлов А. и соавт. Глобальный прогресс в борьбе с гельминтозами, передающимися через почву, в 2020 году и цели Всемирной организации здравоохранения на 2030 год. PLoS Negl Trop Dis . 2020;14:e0008505. doi:10.1371/journal.pntd.0008505

12. Hotez PJ, Bundy DAP, Beegle K, et al. Гельминтозы: гельминтозы, передающиеся через почву, и шистосомоз. В: Jamison DT, Breman JG, Measham AR, et al. редакторы. Приоритеты борьбы с болезнями в развивающихся странах . 2-е; Нью-Йорк: Издательство Оксфордского университета; 2006.

13. Кейзер Дж., Утзингер Дж. Лечение гельминтов, передающихся через почву, в масштабах всего сообщества является эффективным с точки зрения справедливости. Ланцет .2019;393(10185):2011–2012. дои: 10.1016/S0140-6736(18)32981-7

14. Амоа И.Д., Адегоке А.А., Стенстрём Т.А. Передаваемые через почву гельминтозы, связанные с повторным использованием сточных вод и ила: обзор текущих данных. Trop Med Int Heal . 2018;23:692–703. doi:10.1111/tmi.13076

15. Хурана С., Сети С. Лабораторная диагностика почвенных гельминтозов. Троп Паразитол . 2017;7:86. doi:10.4103/TP.TP_29_17

16. Garcia LS, Arrowood M, Kokoskin E, et al.Лабораторная диагностика паразитов желудочно-кишечного тракта. Clin Microbiol Rev . 2018;31:e00025–17. doi:10.1128/CMR.00025-17

17. Всемирная организация здравоохранения. Стенд для диагностики кишечных паразитов . второе изд. Женева: Всемирная организация здравоохранения; 2019.

18. Tarafder MR, Carabin H, Joseph L, Balolong E, Olveda R, McGarvey ST. Оценка чувствительности и специфичности метода исследования кала Като-Каца для выявления анкилостомоза, инфекций Ascaris lumbricoides и Trichuris trichiura у людей при отсутствии «золотого стандарта».». Int J Parasitol . 2010;40:399–404. doi:10.1016/j.ijpara.2009.09.003

19. Аллам А.Ф., Фараг Х.Ф., Лотфи В., Фаузи Х.Х., Эльхадад Х., Шехаб А.Ю. Сравнение методов концентрации FLOTAC, Kato-Katz и формалинового эфира для диагностики кишечных паразитарных инфекций у школьников в сельской местности Египта. Паразитология . 2020;148(3):289–294. дои: 10.1017/S0031182020001675

20. Coulibaly JT, Ouattara M, Becker SL, et al. Сравнение чувствительности и количества фекальных яиц Mini-FLOTAC с использованием фиксированных образцов стула и метода Като-Каца для диагностики Schistosoma mansoni и гельминтов, передающихся через почву. Акта Троп . 2016; 164:107–116. doi:10.1016/j.actatropica.2016.08.024

21. Periago MV, Diniz RC, Pinto SA, et al. Правильный инструмент для работы: обнаружение гельминтов, передающихся через почву, в районах, эндемичных по другим гельминтам. PLoS Negl Trop Dis . 2015;9(8):e0003967. doi:10.1371/journal.pntd.0003967

22. Барда Б., Кахал П., Виллагран Э. и др. Mini-FLOTAC, Kato-Katz и McMaster: три метода, одна цель; основные моменты из северной Аргентины. Векторы-паразиты .2014;7(1):271. дои: 10.1186/1756-3305-7-271

23. Эндрис М., Текесте З., Лемма В., Кассу А. Сравнение методов диагностики кишечных гельминтозов в Эфиопии с помощью като-каца, влажного препарата и концентрации формольного эфира. ISRN Паразитология . 2013;180439. дои: 10.5402/2013/180439

24. Levecke B, Behnke JM, Ajjampur SSR, et al. Сравнение чувствительности и количества фекальных яиц методов подсчета яиц Макмастера и толстого мазка Като-Каца для гельминтов, передающихся через почву. PLoS Negl Trop Dis . 2011;5:e1201. doi:10.1371/journal.pntd.0001201

25. Хабтаму К., Дегарег А., Е-Эбийо Ю., Эрко Б. Сравнение методов Като-Каца и FLOTAC для диагностики гельминтозов, передающихся через почву. Паразитол Инт . 2011;60:398–402. doi:10.1016/j.parint.2011.06.020

26. Кнопп С., Ринальди Л., Хамис И.С. и соавт. Один FLOTAC более чувствителен, чем тройной анализ Kato-Katz, для диагностики вялотекущих гельминтозов, передающихся через почву. Trans R Soc Trop Med Hyg . 2009; 103: 347–354. doi:10.1016/j.trstmh.2008.11.013

27. Utzinger J, Rinaldi L, Lohourignon LK, et al. FLOTAC: новый чувствительный метод диагностики анкилостомоза у людей. Trans R Soc Trop Med Hyg . 2008; 102:84–90. doi:10.1016/j.trstmh.2007.09.009

28. Cools P, Vlaminck J, Albonico M, et al. Диагностическая эффективность одиночного и дублированного тестов Kato-Katz, Mini-FLOTAC, FECPAKG2 и количественной ПЦР для обнаружения и количественного определения гельминтов, передающихся через почву, в трех эндемичных странах. PLoS Negl Trop Dis . 2019:13. doi:10.1371/journal.pntd.0007446

29. Adugna S, Kebede T, Mekonnen Z, Degarege A, Liang S, Erko B. Диагностические характеристики концентратора фекальных паразитов Mini Parasep ® , не содержащего растворителей, по сравнению с Kato-Katz и McMaster для диагностики кишечных паразитарных инфекций. Trans R Soc Trop Med Hyg . 2017; 111: 572–578. doi:10.1093/trstmh/try010

30. Николай Б., Брукер С.Дж., Пуллан Р.Л. Чувствительность диагностических тестов на гельминтозы человека, передающиеся через почву: метаанализ в отсутствие истинного золотого стандарта. Int J Parasitol . 2014;44:765–774. doi:10.1016/j.ijpara.2014.05.009

31. Бег М., Зишан М., Зафар А. и др. Использование фекальных концентраторов Parasep filter для обнаружения кишечных паразитов в образцах стула в обычных условиях. Indian J Pathol Microbiol . 2011;54:121. дои: 10.4103/0377-4929.77358

32. Кханна В., Сагар С., Кханна Р., Чавла К. Сравнительное исследование метода осаждения формалина-этилацетата и метода без растворителя Mini Parasep ® в экспресс-диагностике кишечных паразитов. Троп Паразитол . 2018;8:29–32. doi:10.4103/tp.TP_44_17

33. Мевара А., Курана С., Гупта С., Мунда В.С., Сингх С., Сегал Р. Диагностические характеристики концентратора фекальных паразитов без растворителя Mini Parasep ® для диагностики кишечных паразитарных инфекций. Indian J Med Microbiol . 2019; 37: 381–386. doi:10.4103/ijmm.IJMM_19_44

34. Useh M, Asuquo A, Otu-Bassey I, Ubi O. Оценка эффективности концентратора фекальных паразитов Mini Parasep SF; Новый метод против прямого мазка и метод концентрации эфира формола для обнаружения кишечных паразитов в кале. J Med Lab Sci . 2011;20:458.

35. Levecke B, Montresor A, Albonico M, et al. Оценка антигельминтной эффективности мебендазола у школьников в шести странах, эндемичных по гельминтам, передающимся через почву. PLoS Negl Trop Dis . 2014;8(10):e3204. doi:10.1371/journal.pntd.0003204

36. Дэвид Э.Д., Линдквист В.Д. Определение удельного веса яиц некоторых гельминтов с помощью центрифугирования в градиенте плотности сахарозы. J Паразитол . 1982; 68: 916–919.дои: 10.1186/1756-3305-5-288

37. Levecke B, Cools P, Albonico M, et al. Определение пороговых значений для классификации гельминтозов, передающихся через почву, от умеренной до тяжелой для FECPAKG2, McMaster, Mini-FLOTAC и количественной ПЦР. PLoS Negl Trop Dis . 2020;14(7):e0008296. doi:10.1371/journal.pntd.0008296

38. Knopp S, Glinz D, Rinaldi L, et al. FLOTAC: перспективный метод обнаружения яиц гельминтов в фекалиях человека. Trans R Soc Trop Med Hyg . 2009;103:1190–1194.doi:10.1016/j.trstmh.2009.05.012

39. Lim MD, Brooker SJ, Belizario VY, et al. Диагностические инструменты для программ контроля и ликвидации передающихся через почву гельминтов: путь к разработке диагностических продуктов. PLoS Negl Trop Dis . 2018;12(3):e0006213. doi:10.1371/journal.pntd.0006213

40. Techion: FECPAKG2: лучшее тестирование для лучшей производительности. Доступно по адресу: https://www.techion.com/FECPAKG2. По состоянию на 17 декабря 2020 г.

41. Ayana M, Vlaminck J, Cools P, et al.Модификация и оптимизация протокола FECPAKG2 для обнаружения и количественного определения яиц гельминтов, передающихся через почву, в стуле человека. PLoS Negl Trop Dis . 2018;12(10):e0006655. doi:10.1371/journal.pntd.0006655

42. Moser W, Bärenbold O, Mirams GJ, et al. Диагностическое сравнение между FECPAKG2 и методом Като-Каца для анализа яиц гельминтов, передающихся через почву, в стуле. PLoS Negl Trop Dis . 2018;12(6):e0006562. doi:10.1371/journal.pntd.0006562

43.Сукас С., Ван Дорст Б., Крый А., Лагатие О., Де Мальше В., Стуйвер Л.Дж. Разработка платформы «лаборатория на диске» с цифровыми изображениями для идентификации и подсчета яиц паразитов в фекалиях человека и животных. Микромашины . 2019;10:852. дои: 10.3390/ми10120852

44. Requena-Méndez A, Chiodini P, Bisoffi Z, Buonfrate D, Gotuzzo E, Muñoz J. Лабораторная диагностика и последующее наблюдение стронгилоидоза: систематический обзор. PLoS Negl Trop Dis . 2013;7(1):e2002. дои: 10.1371/журнал.pntd.0002002

45. Гарсия Л.С. Диагностическая медицинская паразитология. Руководство по коммерческим методам клинической микробиологии. В: Аллан Л., редактор. Диагностическая медицинская паразитология . Вашингтон, округ Колумбия, США: ASM Press; 2014: 274–305. дои: 10.1128/9781555817961.ch21

46. Хайлегебриэль Т., Петрос Б., Эндешоу Т. Оценка паразитологических методов обнаружения Strongyloides Stercoralis среди людей в отдельных медицинских учреждениях Аддис-Абебы, Эфиопия. Ethiop J Health Sci . 2017;27:515–522. дои: 10.4314/ejhs.v27i5.10

47. Сато Ю., Тома Х., Киюна С., Широма Ю. Реакция непрямой агглютинации с желатиновыми частицами для массового обследования на стронгилоидоз. Trans R Soc Trop Med Hyg . 1991; 85: 515–518. дои: 10.1016/0035-9203(91)

-Y

48. Силва Л.П., Да Коста Барселуш И.С., Пассос-Лима А.Б., Эспиндола Ф.С., Барбоса Кампос Д.М., Коста-Крус Х.М. Вестерн-блоттинг с использованием антигена Strongyloides ratti для обнаружения антител IgG в качестве подтверждающего теста при стронгилоидозе человека. Мем Инст Освальдо Круз . 2003; 98: 687–691. дои: 10.1590/S0074-02762003000500017

49. Schaffel R, Nucci M, Carvalho E, Braga M, Portugal R, Pulcheri W. Значение иммуноферментного теста (иммуноферментного анализа) для диагностики стронгилоидоза у пациентов с иммуносупрессией из-за гематологических злокачественных новообразований. Am J Trop Med Hyg . 2001; 65: 346–350. doi:10.4269/ajtmh.2001.65.346

50. Арифин Н., Ханафия К.М., Ахмад Х., Нордин Р. Серодиагностика и раннее выявление инфекции Strongyloides stercoralis . J Microbiol Immunol Infect . 2019;52:371–378. doi:10.1016/j.jmii.2018.10.001

51. Рави В., Рамачандран С., Томпсон Р.В., Андерсен Дж.Ф., Нева Ф.А. Характеристика рекомбинантного иммунодиагностического антигена (NIE) из Strongyloides stercoralis личинок L3-стадии. Мол Биохим Паразитол . 2002; 125:73–81. дои: 10.1016/S0166-6851(02)00214-1

52. Раманатан Р., Бурбело П.Д., Грут С., Иадарола М.Дж., Нева Ф.А., Натман Т.Б. Анализ систем иммунопреципитации люциферазы повышает чувствительность и специфичность диагностики инфекции Strongyloides stercoralis . J Заразить Dis . 2008; 198: 444–451. дои: 10.1086/589718

53. Rascoe LN, Price C, Shin SH, Mcauliffe I, Priest JW, Handali S. Разработка анализов на основе рекомбинантного антигена Ss-NIE-1 для иммунодиагностики стронгилоидоза. PLoS Negl Trop Dis . 2015;9(4):e0003694. doi:10.1371/journal.pntd.0003694

54. Юнус М.Х., Арифин Н., Балачандра Д., Ануар Н.С., Нордин Р. Тест-полоска с латеральным потоком для серодиагностики стронгилоидоза. Am J Trop Med Hyg .2019;101:432–435. doi:10.4269/ajtmh.19-0053

55. Сайкс А.М., Маккарти Дж.С. Копроантигенный диагностический тест на инфекцию Strongyloides. PLoS Negl Trop Dis . 2011;5(2):e955. doi:10.1371/journal.pntd.0000955

56. Lagatie O, Verheyen A, Van Hoof K, et al. Обнаружение инфекции Ascaris lumbricoides с помощью ИФА копроантигена ABA-1. PLoS Negl Trop Dis . 2020;14:e0008807. doi:10.1371/journal.pntd.0008807

57. Элсмор Д.А. Флинн Л.А. Изобретатель; Правопреемник Idexx Laboratories Inc.Устройство, набор и способ для захвата и обнаружения антигена анкилостомы. 2007. Патент США US20080311557A1.

58. Lagatie O, Verheyen A, Van Asten S, et al. 2-метил-пентаноил-карнитин (2-MPC): биомаркер мочи для патентной инфекции Ascaris lumbricoides . Научный представитель . 2020;10:15780. doi: 10.1038/s41598-020-72804-y

59. Лагатие О., Нюмбе Эдиаге Э., Пиккемаат Дж. А., Джуарди Й., Стуйвер Л. Й. 2-метилбутирамид, ранее идентифицированный биомаркер мочи для Ascaris lumbricoides , отсутствует у инфицированных индонезийцев. Векторы-паразиты . 2017;10(1):1–3. doi: 10.1186/s13071-017-2600-z

60. Ayana M, Cools P, Mekonnen Z, et al. Сравнение четырех протоколов экстракции ДНК и трех протоколов сохранения для молекулярного обнаружения и количественного определения гельминтов, передающихся через почву, в стуле. PLoS Negl Trop Dis . 2019;13(10):e0007778. doi:10.1371/journal.pntd.0007778

61. О’Коннелл Э.М., Натман Т.Б. Обзорная статья: молекулярная диагностика гельминтов, передающихся через почву. Am J Trop Med Hyg .2016;95:508–514. doi:10.4269/ajtmh.16-0266

62. Грант Дж. Р., Пилотт Н., Уильямс С.А. Пример использования геномики и биоинформатического конвейера для разработки чувствительной и видоспецифичной диагностики на основе ПЦР гельминтов, передающихся через почву. Передняя Генетика . 2019;10:883. doi:10.3389/fgene.2019.00883

63. Howe KL, Bolt BJ, Cain S, et al. WormBase 2016: расширение для проведения исследований генома гельминтов. Рез. нуклеиновых кислот . 2016;44:D774–80. doi:10.1093/нар/gkv1217

64.Истон А.В., Оливейра Р.Г., О’Коннелл Э.М. и соавт. Мультипараллельная количественная ПЦР обеспечивает повышенную чувствительность и широту диагностики желудочно-кишечных паразитов человека: полевые выводы о влиянии массовой дегельминтизации. Векторы-паразиты . 2016;9:38. doi: 10.1186/s13071-016-1314-y

65. Pilotte N, Papaiakovou M, Grant JR, et al. Усовершенствованное обнаружение гельминтозов, передающихся через почву, на основе ПЦР с использованием подхода секвенирования нового поколения к дизайну анализа. PLoS Negl Trop Dis .2016;10:e0004578. doi:10.1371/journal.pntd.0004578

66. Линн М., Полдерман Антон М., Винкелес Мельчерс НВС. Диагностика полипаразитизма в условиях высокой распространенности в Бейре, Мозамбик: обнаружение кишечных паразитов в образцах фекалий с помощью микроскопии и ПЦР в реальном времени. PLoS Negl Trop Dis . 2017;11(1):e0005310. doi:10.1371/journal.pntd.0005310

67. Verweij JJ, Canales M, Polman K, et al. Молекулярная диагностика Strongyloides stercoralis в образцах фекалий с использованием ПЦР в реальном времени. Trans R Soc Trop Med Hyg . 2009; 103: 342–346. doi:10.1016/j.trstmh.2008.12.001

68. Verweij JJ, Brienen EA, Ziem J, Yelifari L, Polderman AM, Van Lieshout L. Одновременное обнаружение и количественная оценка Ancylostoma duodenale, Necator americanus и Oesophagostomum bifurcum в образцах фекалий с использованием мультиплексной ПЦР в реальном времени Am. J Trop Med Hyg . 2007; 77: 685–690. doi:10.4269/ajtmh.2007.77.685

69. Папаякову М., Гассер Р.Б., Литтлвуд Д.Т.Дж. Количественная ПЦР-диагностика гельминтозов, передающихся через почву: фекальные или непостоянные? Тренды Паразитол .2019;35(7):491–500. doi:10.1016/j.pt.2019.04.006

70. Dunn JC, Papaiakovou M, Han KT, et al. Повышенная чувствительность количественной ПЦР по сравнению с методом Като-Каца необходима для точной оценки распространенности гельминтоза, передающегося через почву, в условиях, в которых было проведено несколько раундов массового введения лекарств. Векторы-паразиты . 2020;13(1):324.

71. Папаякову М., Райт Дж., Пилотт Н. и соавт. Объединение как стратегия своевременной диагностики передающихся через почву гельминтов в стуле: ценность и воспроизводимость. Векторы-паразиты . 2019;12(1):443.

72. Дэн М.Х., Чжун Л.Ю., Камолнетр О., Лимпанонт Ю., Лв З.Ю. Обнаружение гельминтов методом изотермической амплификации, опосредованной петлей: обзор обновленных технологий и перспективы на будущее. Заразить бедность . 2019; 8:1–22. doi: 10.1186/s40249-019-0530-z

73. Рашван Н., Диавара А., Скотт М.Е., Причард Р.К. Изотермические диагностические тесты для выявления почвенных гельминтов на основе метода SmartAmp2. Векторы-паразиты .2017;10:496. doi: 10.1186/s13071-017-2420-1

74. Ширахо Э.А., Эрик А.Л., Мванги И.Н. и соавт. Разработка петлевой изотермической амплификации для диагностики Ascaris lumbricoide s в образцах фекалий. J Паразитол Рез . 2016;2016. дои: 10.1155/2016/7376207

75. Мугамби Р.М., Агола Э.Л., Мванги И.Н., Киньюа Дж., Ширахо Э.А., Мкодзи Г.М. Разработка и оценка метода петлевой изотермической амплификации (LAMP) для обнаружения анкилостомоза ( Necator americanu s) в образцах фекалий. Векторы-паразиты . 2015;8:574. doi:10.1186/s13071-015-1183-9

76. Watts MR, James G, Sultana Y, et al. Петлевой анализ изотермической амплификации (LAMP) Strongyloides stercoralis в стуле, в котором используется метод визуального обнаружения с флуоресцентным красителем SYTO-82. Am J Trop Med Hyg . 2014;90:306–311. doi:10.4269/ajtmh.13-0583

77. Вакид М.Х. Анализ кала на скрытую кровь и желудочно-кишечные паразитарные инфекции. J Паразитол Рез . 2010;2010:434801.дои: 10.1155/2010/434801

78. Амоа И.Д., Сингх Г., Стенстром Т.А., Редди П. Обнаружение и количественная оценка гельминтов, передающихся через почву, в образцах окружающей среды: обзор современного состояния дел и перспективы на будущее. Акта Троп . 2017; 169:187–201. doi:10.1016/J.ACTATROPICA.2017.02.014

79. Oge H, Oge S. Количественное сравнение различных методов обнаружения яиц Toxocara canis в образцах песка. Вет Паразитол . 2000;92:75–79.doi:10.1016/S0304-4017(00)00276-4

80. Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) Руководство по безопасному использованию сточных вод, экскрементов и серых вод. Том 4. Доступно по адресу: https://www.who.int/water_sanitation_health/publications/gsuweg4/en/. По состоянию на 18 января 2021 г.

81. Агентство по охране окружающей среды U. Экологические нормы и технологии, контроль патогенов и привлечение переносчиков в осадке сточных вод. Доступно по адресу: https://www.epa.gov/sites/production/files/2015-07/documents/epa-625-r-92-013.пдф. По состоянию на 18 января 2021 г.

82. Хименес Б., Майя С., Веласкес Г. и др. Идентификация и количественная оценка яиц патогенных гельминтов с помощью системы цифровых изображений. Эксперимент Паразитол . 2016; 166: 164–172. doi:10.1016/j.exppara.2016.04.016

83. Rothrock MJ, Hiett KL, Kiepper BH, Ingram K, Hinton A. Количественное определение зоонозных бактериальных патогенов в образцах воды для промышленного птицеводства с использованием капельной цифровой ПЦР. Adv Microbiol . 2013;03:403–411.doi:10.4236/прицел.2013.35055

Диагностическая эффективность прямой микроскопии во влажном мазке при выявлении кишечных гельминтов у беременных женщин, обращающихся за дородовой помощью (ANC) в Ист-Воллега, Оромия, Эфиопия | BMC Research Notes

Материалы и методы

Условия и контекст исследования

Поперечное исследование было проведено в пяти выбранных медицинских центрах Восточной зоны Воллега региона Оромия, Эфиопия, а именно в медицинском центре Джимма-Арджо, медицинском центре Арджо-Гудату, Сире. поликлиника, поликлиника Гуте и поликлиника Некемте в период с ноября 2015 г. по январь 2016 г.{2}$$

, где n – размер выборки, равный 372; P – распространенность кишечных гельминтов у беременных по данным предыдущего аналогичного исследования, которая составила 0,41 [8]; d — предельная ошибка, равная 0,05.

Наконец, 372 беременные женщины были последовательно зарегистрированы в пяти медицинских центрах с использованием пропорциональной стратифицированной выборки.

Исследуемая популяция и сбор данных

Беременные женщины, принимающие противогельминтные/антипротозойные препараты или получавшие массовое введение препаратов в течение последних 2 недель, были исключены.Специалисты медицинских лабораторий прошли обучение сбору данных для этого конкретного исследования, чтобы добиться стандартизации и надежности. Все используемые реагенты были проверены на срок годности и приготовлены в соответствии с инструкциями производителя. Мы получили все реагенты от Фармацевтического фонда и Агентства снабжения Эфиопии.

Лабораторные методы

У каждого участника был взят один образец стула. Свежие образцы кала исследовали непосредственно под микроскопом и сохраняли в 10% растворе формалина для дальнейшего анализа.Затем законсервированные образцы обрабатывали методом концентрирования в эфире формалина и исследовали под микроскопом на наличие яиц и личинок кишечных гельминтов.

Прямой анализ влажного препарата

У всех участников исследования был получен отдельный образец стула. Затем для микроскопического обнаружения кишечных паразитов использовали прямую микроскопию влажного препарата в солевом растворе каждого образца. Вкратце, на чистое предметное стекло добавляли одну каплю физиологического раствора, а затем к нему смешивали стул, эквивалентный головке спички (2 мг).Затем влажные препараты исследовали под световым микроскопом при увеличении в 100 и 400 раз [9].

Метод формольно-эфирной концентрации (FEC)

Часть каждого сохраненного образца стула была взята и обработана в соответствии со стандартными процедурами. Вкратце, 1 г стула помещали в чистую коническую центрифужную пробирку, содержащую 7 мл 10% формольной воды, с помощью палочки-аппликатора. Полученную суспензию фильтруют через сито в другую коническую пробирку. После добавления к раствору формалина 3-4 мл диэтилового эфира содержимое центрифугировали при 3200 об/мин в течение 1 мин.Супернатант отбрасывали; из этого осадка готовили мазок и исследовали под световым микроскопом с увеличением в 100 и 400 раз после высушивания на воздухе [9].

Обеспечение качества данных

Все лабораторные анализы проводились с использованием стандартных операционных процедур. Только один медицинский лаборант выполнял прямую микроскопию влажного мазка в каждом медицинском центре, а один старший медицинский лаборант вслепую выполнял метод FEC для всех образцов.

Операционные определения
  • Ложноположительный результат (FP) — у человека нет заболевания, но тест на него положительный.

  • Чувствительность — это вероятность того, что действительно инфицированный человек даст положительный результат (чувствительность = TP/(TP + FN)).

  • Специфичность — способность метода правильно идентифицировать неинфицированных лиц (специфичность = TN/(TN + FP)).

  • Положительное прогностическое значение (PPV): вероятность того, что те, кто дал положительный результат по данному методу, действительно инфицированы (PPV = TP/(TP/FP)).

  • Отрицательное прогностическое значение (NPV) – вероятность того, что те, у кого тест дал отрицательный результат, действительно не инфицированы (NPV = TN/(TN + FN)).

  • Эффективность теста (TE) – общая способность теста правильно идентифицировать положительные результаты от отрицательных и предполагает отсутствие ложноположительных и ложноотрицательных результатов (TE = (TP + TN)/(TN + TP + FN + FP)).

  • Точность: близость тестов к истинному значению (истинно положительный или истинно отрицательный результат).

Статистический анализ

Ввод и анализ данных проводились с использованием статистического программного обеспечения SPSS версии 20 для описательной и логической статистики. Распространенность, чувствительность, специфичность, положительные и отрицательные прогностические значения прямой микроскопии влажных мазков определяли с использованием FEC в качестве метода золотого стандарта.Согласованность двух методов выявления кишечных гельминтов определяли с помощью Каппа-теста. Значения каппа интерпретировались следующим образом; от 0,01 до 0,20 – слабое согласие, от 0,21 до 0,40 – удовлетворительное согласие, 0,41–0,60 – умеренное согласие, 0,61–0,80 – существенное согласие и 0,81–0,99 – полное согласие [10].

Результаты

Распространенность кишечных гельминтов

Общая распространенность кишечных гельминтов с использованием прямой микроскопии во влажных препаратах и ​​метода концентрации формольного эфира (ФЭК) составила 18.8% (70/372) и 24,7% (92/372), соответственно, с разницей в 5,9% (P < 0,001) (таблица 1).

Таблица 1 Распределение кишечных гельминтов и совпадение результатов прямой микроскопии влажных мазков и метода FEC среди беременных женщин, посещающих ДРП в Ист-Воллега, Оромия, Эфиопия, с ноября 2015 г. по январь 2016 г.

Что касается обнаружения специфических кишечных гельминтов, прямая микроскопия во влажном мазке показала 12,9% (48/372) анкилостомы, 5,37% (20/372) Ascaris lumbricoides, и 0.54% (2/372) Hymenolepis nana . Но видов Taenia и Strogyloides stercoralis этим методом не были обнаружены. Смешанная инфекция была зарегистрирована у двух (0,54%) участниц исследования с использованием этого метода, в отличие от метода FEC, который выявил смешанные инфекции у четырех (1,08%) беременных. Основываясь на методе FEC, уровень распространенности Hookworm, Ascaris lumbricoides , Hymenolepis nana , Taenia видов и Strogyloides stercoralis составил 15.1% (56/372), 6,5% (24/372), 1,6% (6/372), 1,34% (5/372) и 0,27% (1/372) соответственно. Два метода показали значительно различающиеся диагностические возможности при обнаружении кишечных гельминтов (P < 0,001) (таблица 1). Для сравнения, выявляющая способность прямой микроскопии влажного препарата была плохой при диагностике видов Hookworm, Hymenolepis nana и Taenia .

Чувствительность и отрицательная прогностическая ценность (NPV) прямой микроскопии влажных мазков

Чувствительность прямого метода влажных мазков при выявлении всех кишечных гельминтов, анкилостомы, Ascaris lumbricoides и Hymenolepis nana составила 76, 85.7, 83,3 и 33,3% соответственно. видов Taenia и Strongyloides stercoralis не были обнаружены при прямой микроскопии во влажном мазке (таблица 2). Этот результат указывает на то, что прямой микроскопии влажного препарата недостаточно, чтобы исключить отсутствие кишечных гельминтов в одном образце стула в целом.

Таблица 2. Чувствительность, NPV и TE прямой микроскопии во влажном мазке при обнаружении кишечных гельминтов у беременных женщин, посещающих ДРП в Ист-Воллега, Оромия, Эфиопия, с ноября 2015 г. по январь 2016 г.

Специфичность и положительная прогностическая ценность прямой микроскопии влажного препарата составила 100% из-за отсутствия ложноположительного результата.Способность прямого влажного препарата исключать истинные негативы как негативные в целом была лучше (выше 92,7%). Вероятность того, что действительно отрицательные беременные женщины будут отрицательными при прямой микроскопии во влажном мазке на наличие Hookworm, Ascaris lumbricoides, Hymenolepis nana, видов Taenia и Strongyloides stercoralis , составила 97,5, 98,8, 98,9, 98,6 и 99,7% соответственно (таблица 2). ).

Тестовая эффективность (TE) прямой микроскопии влажных мазков

Общая способность прямой микроскопии влажных мазков правильно диагностировать кишечных гельминтов (TE) составила 94%.Тестовая эффективность этого метода в диагностике именно анкилостомы была сравнительно низкой (97,8%). Прямая микроскопия влажного препарата показала одинаковую эффективность при диагностике Ascaris lumbricoides и Hymenolepis nana (98,9%) (таблица 2).

Согласованность методов испытаний

Два метода полностью согласованы в диагностике тотальных кишечных гельминтов, яиц анкилостомы и Ascaris lumbricoides (Каппа > 0,81). Но эти методы хорошо совпали при обнаружении яйцеклеток Hymenolepis nana (Kappa = 0.39) (Таблица 1).

Обсуждение

Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) рекомендует использовать метод Като-Каца в двойных предметных стеклах и другие методы, такие как методы FEC и McMaster, для обнаружения гельминтов, передающихся через почву (STH) человека, таких как Ascaris lumbricoides , Trichuris trichiura и Анкилостомы. Все эти методы основаны на визуальном осмотре небольшого образца стула для определения наличия и количества яиц ППГ с различной чувствительностью, особенно в районах с низкой передачей [11,12,13,14].

Традиционная прямая микроскопия во влажном мазке имеет более низкую чувствительность при обнаружении кишечных гельминтов по сравнению с методом FEC. Таким образом, использование метода FEC в качестве подтверждающего теста при рутинном лабораторном исследовании стула значительно поможет в точном определении и лечении паразитарных инфекций [7].

Результаты настоящего исследования показали, что прямая микроскопия влажных мазков показала более низкую распространенность кишечных гельминтов по сравнению с методом FEC (18.8% против 24,7%) (P < 0,001), что аналогично исследованию, проведенному в Нигерии [15]. Эти различия в диагностических характеристиках могут быть связаны с низкой чувствительностью метода прямого влажного мазка, как показано в других исследованиях, различиями между личными навыками или могут быть связаны с техническими ошибками двух методов. Это означает, что прямого влажного препарата недостаточно, чтобы исключить отсутствие кишечных гельминтов, о чем сообщают другие исследования [16]. Эта низкая способность обнаружения прямой микроскопии влажного препарата в одном образце стула может быть связана с прерывистым затенением кишечных гельминтов в одном образце стула и низкой способностью некоторых кишечных гельминтов к продукции яйцеклеток.

Прямая микроскопия во влажном мазке показала значительно низкую обнаруживающую способность, особенно при диагностике нематод , Ascaris lumbricoides, Hymenolepis nana и видов Taenia в настоящем исследовании. Это похоже на отчеты других исследований, в которых утверждается, что прямой влажный препарат имеет более низкую чувствительность при обнаружении Ascaris lumbricoides , Schistosoma mansoni , Trichuris trichiura и анкилостом [7]. Более низкая чувствительность в этом исследовании может быть связана с включением только одного образца стула, что затрудняет идентификацию кишечных гельминтов с периодическим затенением.

Чувствительность прямой микроскопии влажных мазков в целом была низкой при диагностике всех кишечных гельминтов (76%) и очень низкой при обнаружении яйцеклеток Hymenolepis nana (33,3%) в настоящем исследовании. Чувствительность прямого влажного препарата при обнаружении кишечных гельминтов в этом исследовании выше, чем в исследовании, проведенном в Эфиопии [17], которое показало чувствительность 48,9%. Это может быть связано с включением всех кишечных паразитов в предыдущее исследование и межличностными различиями в навыках.

Несмотря на то, что эти два метода показали полное совпадение в обнаружении всех кишечных гельминтов, как и в других исследованиях [17], они довольно хорошо согласовались в обнаружении Hymenolepis nana , что означает, что прямая микроскопия во влажном мазке плохо выявляет гельминтов с низким содержанием яйцеклеток из одного образец стула.

Наши результаты показали, что прямая микроскопия влажного препарата показала низкую чувствительность для обнаружения кишечных гельминтов по сравнению с методом FEC, который аналогичен другому исследованию, проведенному в Эфиопии [18].Это свидетельствует о том, что использование только прямой микроскопии влажных мазков для диагностики кишечных гельминтозов недостаточно и может привести к ложноотрицательным результатам.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.