Уреазный тест что это: 13С-уреазный дыхательный тест на определение Helicobacter pylori

Содержание

Диагностическое значение уреазного теста при выявлении helicobacter pylori

Citation: Кулакова Е. А. Диагностическое значение уреазного теста при выявлении Helicobacter pylori / Е. А. Кулакова, Т. Н. Амбросова // Імплементація принципів біоетики у клінічну практику : наукова конференція молодих вчених і студентів, присвячена 210-річчю ХНМУ, Харків, 10 квітня 2015 р. : матеріали конференції. – Харків, 2015. – С. 79.Abstract: В настоящее время Helicobacter pylori является наиболее частой причиной гастрита, гастродуоденита и язвенной болезни. Helicobacter pylori — спиралевидная грамотрицательная микроаэрофильная бактерия, инфицирующая слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. Диагностика инфекции Нelicobacter pylori возможна при микроскопическом исследовании биоптата слизистой оболочки, взятого при эзофагогастродуоденоскопии (ЭГДС). Эзофагогастродуоденоскопия — это современный метод визуализации и последующего обследования стенок слизистой оболочки верхних путей пищеварительного тракта, а именно: пищевода, желудка и проксимальной части двенадцатиперстной кишки.
Для проведения ЭГДС специальной подготовки не существует, но для лучшей визуализации необходимо, чтобы желудок и просвет двенадцатиперстной кишки были полностью свободны от остатков какой-либо пищи, поэтому на исследование необходимо приходить натощак. Определить наличие Helicobacter pylori возможно путем исследования фрагментов слизистой желудка, полученной путем биопсии во время эндоскопического исследования. Наиболее оптимальной манипуляцией является уреазный тест. Уреазный тест — это экспресс анализ, позволяющий быстро и недорого определить присутствие в верхних отделах пищеварительного тракта Helicobacter pylori. Основой теста является свойство H. pylori выделять фермент уреазу, которая катализирует процесс преобразования мочевины в аммиак и углекислый газ. В результате реакции кислотно-щелочный баланс желудка (рН среды) сдвигается в щелочную сторону, что фиксируется с помощью индикатора. Полученный биоптат помещается в специальную ячейку с готовыми растворами. Быстрота изменения окраски индикатора с жёлтого на ярко-красный зависит от уреазной активности, которая, в свою очередь, зависит от количества бактерий.
Интерпретация результата: количество Helicobacter pylori в биоптате оценивается по интенсивности окраски биоптата. Таким образом, +++ — значительное инфицирование Нelicobacter pylori (Hp), малиновое окрашивание теста появляется в первый час от начала исследования, ++ — умеренное инфицирование Нp, тест становится малиновым спустя 2-3 часа, + — незначительное инфицирование Нp – появление малиновой окраски в течение 24 часов. Отрицательным считается результат, если окрашивание появляется после 24 часов от начала исследования. Основное назначение метода — первичная диагностика наличия Helicobacter pylori у пациентов. Чувствительность и специфичность данного метода составляет 90 %. Метод позволяет получить заключение быстро — от нескольких минут до нескольких часов. Его использование не предполагает наличие специального лабораторного оборудования или подготовленных специалистов и выполняется непосредственно эндоскопистом. Достаточно бюджетный метод диагностики при массовом и индивидуальном применении.
В настоящее время разработано большое количество промышленно изготовленных уреазных тестов.

HP-тест (Helicobacter Pylori) в Геленджике — Клиника Ланцетъ

Уреазный экспресс тест на бактерию Helicobacter pylori – метод диагностики инфекции Helicobacter pylori с помощью специальных биохимических тест-систем. Материалом для анализа служат кусочки слизистой оболочки желудка взятые у пациента во время видеоэзофагогастродуоденоскопии (ВЭГДС). Метод обладает высокой чувствительностью, точностью и скоростью получения результата.

Суть метода

В основе теста лежит способность бактерии Helicobacter pylori продуцировать фермент уреазу, который расщепляет мочевину до аммиака и углекислоты. Система экспресс теста представляет собой одноразовый диск, пропитанный химическими реактивами: мочевиной и кислотным индикатором. Образцы тканей, полученные в ходе эндоскопического исследования, помещают на сухую поверхность диска. При наличии бактерий мочевина в течение 3 минут разлагается, а образовавшаяся углекислота окрашивает индикатор в синий цвет.

Клиника Ланцетъ предлагает своим пациентам максимально комфортное проведение процедуры ВЭГДС с уреазным экспресс тестом на бактерию Helicobacter pylori, выполняемую с помощью современного эндоскопа.

Как проходит процедура

Подробную подготовку к видеоэзофагогастродуоденоскопии (ВЭГДС) можно изучить на нашем сайте во вкладке Пациенту.

ВЭГДС проводят в положении пациента лежа на левом боку. Для минимизации неприятных ощущений ротовую полость орошают местным обезболивающим препаратом (Лидокаин 10 % — спрей). Эндоскоп, под контролем зрения, проводят в пищевод, в желудок и двенадцатиперстную кишку. Для лучшей визуализации через канал эндоскопа подается дозированный поток воздуха. Дышать во время исследования рекомендуется через нос, что частично подавит рвотный рефлекс. В целом процедура проходит как стандартная видеогастродуоденоскопия, разница заключается только в том, что во время исследования, через канал эндоскопа, в исследуемую область, проводят стерильные эндоскопические щипцы, при помощи которых осуществляют взятие кусочков ткани для проведения исследования.

Полученный биологический материал можно исследовать двумя методами. Первый – уреазный тест (кусочек ткани укладывают на специальную химическую среду, если там имеются Helicobacter Pylori, то среда изменит свой цвет). Второй – гистологический, который заключается в исследовании кусочка ткани под микроскопом.

Где сделать HP-тест (Helicobacter Pylori)

Клиника «Ланцетъ» предлагает своим пациентам пройти HP-тест с использованием новейшего оборудования (видеоэндоскопическая стойка ПЕНТАКС на базе видеопроцессора EPK-P, «ХОЯ Корпорейшн», японского производства) и современных реактивов, обеспечивающих проведение анализа на высоком уровне.

Записаться на исследование можно по телефону 8 800 500 02 03

Уреазный тест — «Золотое свечение»

13С-уреазный дыхательный тест (дыхательный тест с 13С-меченной мочевиной, 13С-УДТ) на определение Helicobacter pylori — методика неинвазивной, лабораторной диагностики инфекции, вызванной Helicobacter pylori, основанная на анализе в пробах выдыхаемого воздуха специального реагента, содержание которого изменяется под действием выделяемого бактерией фермента уреазы.

Для исследования используется выдыхаемый воздух.


Подготовка к исследованию

  • Исключить из рациона алкоголь в течение 72 часов до исследования.
  • Не принимать пищу в течение 6 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
  • Исследование проводится не ранее чем через 6 недель после окончания последнего приема антибиотиков (по любому поводу) и препаратов висмута.
  • За две недели до проведения исследования необходимо прекратить (по согласованию с лечащим врачом) прием ингибиторов протонной помпы и блокаторов гистаминовых рецепторов второго типа.
  • Исследование проводится не менее чем через сутки после выполнения гастроскопии (ФГДС) или до её проведения.

Суть метода

Основным реагентом в данном тесте является 13С-мочевина, в которой 12С-атом углерода заменён на 13С-изотоп. При наличии в желудке Helicobacter pylori продуцируемая бактерией уреаза расщепляет поступившую в желудок с тестовым раствором 13С-мочевину на аммиак и 13С-углекислый газ, который затем всасывается в кровь, попадает в лёгкие и выводится с выдыхаемым воздухом.


Техника проведения теста

Непосредственно перед исследованием пациенту необходимо выпить 200 мл апельсинового или грейпфрутового сока, чтобы замедлить эвакуацию из желудка. Через 5-10 минут производится взятие контрольной пробы воздуха — пациент делает выдох в специальный герметичный пакет, который затем закрывается и маркируется соответствующим образом. Для обеспечения точности теста особенно важно выдыхать последнюю (альвеолярную) часть воздуха. Затем пациенту дают выпить 50 мл раствора мочевины, меченной изотопом углерода

13С. Это раствор без вкуса и запаха, его прием не сопровождается никакими неприятными ощущениями. Раствор готовится непосредственно перед приемом, его необходимо выпить в течение пяти минут после приготовления. Взрослые выпивают приготовленный раствор полностью (50 мл), а дети от 5 до 12 лет — половину. Затем в течение получаса следует находиться в спокойном состоянии, чтобы на результаты исследования не повлиял углекислый газ, выделяющийся при физической нагрузке. Через 30 минут производится взятие второй пробы воздуха, пакет с которой также герметично закрывается и маркируется. Затем пробы воздуха анализируют на инфракрасном спектрометре для определения изотопного соотношения 13С/12С. Если пациент инфицирован Helicobacter pylori, то во второй пробе воздуха появится увеличенное количество
13
СО2 по сравнению с его содержанием в первой (контрольной) пробе.


Цель исследования

  • Определение инфицированности Helicobacter pylori при заболеваниях желудка и двенадцатиперстной кишки, а также для контроля за эффективностью антихеликобактерной терапии.

Исследование назначается:

  • Первичная неинвазивная диагностика инфекции Helicobacter pylori при заболеваниях желудка и двенадцатиперстной кишки;
  • Контроль эффективности эрадикационной (антихеликобактерной) терапии;
  • Наличие кислотозависимых и ассоциированных с Helicobacter pylori заболеваний в семье;
  • При отказе от фиброгастроскопии или невозможности ее проведения;
  • Длительное применение нестероидных противовоспалительных препаратов.

Важно

  • Абсолютных противопоказаний к проведению исследования не существует.
  • Побочных эффектов, обусловленных приемом 13С-мочевины, не обнаружено.
  • Относительные противопоказания — детский возраст до 5 лет и индивидуальную непереносимость экзогенной мочевины.

Неинвазивные методы диагностики Н.pylori- инфекции

Если говорить о тенденциях в развитии методов диагностики, то в последние годы произошел сдвиг в сторону неинвазивных методов, где достигнут наибольший прогресс.

Уреазный дыхательный тест (УДТ)

Прежде всего, следует сказать, что в развитых странах в последние годы стандартным методом контроля за эрадикацией стал именно этот тест.

Тест основан на способности уреазы разлагать мочевину до НСО3Ї и NH4+. Из НСО3Ї образуется СО2, который попадая в кровоток затем транспортируется в легкие.

Для проведения УДТ необходима мочевина, меченная радиоактивным углеродом 13С или 14С. Чаще в клинической практике используется нерадиоактивный стабильный углерод 13С. 14С используется реже, так как является источником излучения низко энергетических β-частиц, которые обнаруживаются сцинтиляционным счетчиком.

Изотоп количественно определяют газовым хроматомас-спектрометром или с помощью инфракрасного и лазерного оборудования.

В начале исследования берутся 2 фоновые пробы выдыхаемого воздуха. Далее пациент съедает легкий завтрак и тестовый субстрат и в течение 1 часа, с интервалом в 15 минут у него берут по 4 пробы выдыхаемого воздуха. Уровень радиоактивного изотопа в выдыхаемом воздухе определяют в течение 10-30 минут. Затем пробирки направляются на масс-спектрометрию. Результат выражается как приращение 13СО2 – д13СО2, его экскреция (%о) и считается положительным при значениях выше 5%о. В ряде стран используется определение изотопического отношения концентраций 13СО2/12СО2, что позволяет свести к минимуму влияние на конечный результат методических и инструментальных погрешностей.

В развитых странах данный тест считается основным для выявления Helicobacter pylori — инфекции, однако сдерживающими факторами для повсеместного использования этой методики являются стоимость оборудования (масс-спектрометр) и изотопа. Поскольку уменьшение стоимости изотопа невозможно, были предложены варианты масс-спектрометров на основе лазерного и инфракрасного излучения, стоимость которых существенно ниже. С другой стороны, использование микрокапсул для упаковки мочевины, меченной радиоактивным изотопом, позволило свести к минимуму трудности, связанные с хранением, утилизацией и безопасностью данного изотопа. В США продажа микрокапсул с мочевиной, меченной углеродом, разрешена FDA наравне с обычными лекарственными препаратами через аптечную сеть, что является свидетельством полной безопасности данного изотопа для обследуемых и окружающей среды. Появление такой формы меченной мочевины существенно повышает конкурентноспособность этой методики, т.к. стоимость и самого изотопа, и оборудования для его проведения в среднем меньше в 10 раз, чем масс-спектрометра.

Показаниями для проведения УДТ служат: эпидемиологические исследования, скрининг перед эндоскопией и наблюдение за больным после лечения.

Иммунологический метод

Колонизация Н.pylori вызывает системный иммунный ответ. Через 3-4 недели после инфицирования в слизистой оболочке и в крови больных появляются антитела к Н.pylori. Эти антитела определяются путем иммуноферментного анализа. Выявляют антитела IgG, IgA, IgM-классов в крови и секреторные sIgA , sIgM в слюне и желудочном соке.

Поскольку инфекция является хронической и ее спонтанный клиренс невозможен, то положительные серологические тесты у нелеченных пациентов указывают на наличие текущей инфекции. Несмотря на то, что уровень антител в процессе успешной эрадикации падает, серологическая реакция остается положительной в течение ряда лет. Этот “серологический рубец” ограничивает возможности исследования крови для оценки эффективности лечения или для диагностики наличия у больного Н. pylori. Однако быстрое падение уровня антител косвенно может указывать на санацию СОЖ.

Имеется несколько модификаций этого теста: -ELISA- (ферментный иммуносорбентный метод), реакции фиксации комплемента, бактериальной и пассивной гемагглютинации.

Классический иммуноферментный анализ с количественным определением в сыворотке или плазме крови больных антихеликобактерных антител разных классов характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью, в пользу чего свидетельствуют сравнительные исследования наборов для проведения таких анализов, выпускаемых различными производителями. Данный метод идеален для первичной диагностики, так как при высокой чувствительности и специфичности (более 90% по сравнению с инвазивными методами, включая ПЦР) он на сегодняшний день самый дешевый. Увеличение чувствительности и специфичности метода, вследствие совершенствования технологии, позволило применить его для диагностики эрадикации, и если 5 лет назад диагностика эрадикации с помощью иммуноферментного анализа была возможна только через 8-12 месяцев после лечения, то для выпускаемых в настоящее время наборов для ИФА этот срок уменьшился до 3 месяцев.

Использование же высокочувствительных наборов, в основу которых положен непрямой ИФА с применением антигена Н.pylori, меченного биотином, позволяет зафиксировать снижение концентрации специфических антител уже через 30-40 дней после окончания успешного лечения, и, таким образом, укладывается в сроки оценки эрадикации, принятые для инвазивных методов и дыхательного теста. Учитывая это обстоятельство, и то, что стоимость такого анализа ненамного выше обычного ИФА, следует признать его весьма перспективным.

ИФА в кале

Безусловной сенсацией 1998 года явилось появление на рынке теста для количественного определения антигена Н.pylori в фекалиях больных с помощью ИФА. Мультицентровое исследование в странах ЕС, проведенное более чем на 400 больных, подтвердило его высокую эффективность в определении эрадикации в сравнении с инвазивными методиками и дыхательным тестом. Более того, полученные данные свидетельствуют, что с помощью этого теста можно мониторировать лечение, то есть прогнозировать эффект антихеликобактерной терапии. Стоимость одного анализа пока остается на уровне дыхательного теста. Тест также зарегистрирован FDA в США.

Иммуноблотинг существенно уступает другим иммунологическим методам как по стоимости, так и по трудоемкости выполнения анализа, однако только с его помощью можно, имея лишь сыворотку крови больного, получить данные о свойствах штамма Н.pylori (продуцирует ли он CagA и VacA).

ПЦР в кале

На конференциях Канадской группы по изучению Helicobacter pylori (CSHPG) в 1999 году и Европейской группы по изучению Helicobacter pylori (ESHPG) в 2000 году были приняты рекомендации по диагностике и лечению Н.pylori-инфекции у детей, в которых указывалось на предпочтительность неинвазивной диагностики этой инфекции, особенно при контроле лечения (P. Sherman, 1999; B. Drumm, 2000). На основании этих рекомендаций в Европе и Америке для диагностики Н.pylori-инфекции в настоящее время используют иммуноферментный анализ (ИФА) для определения антител против H. pylori (серологический метод) и уреазный дыхательный тест с С13 меченым атомом углерода ([13C]UBT).

Однако, серологический метод на практике оказался малоэффективным для диагностики Н.pylori-инфекции у детей. Так, при первичной диагностике Н.pylori-инфекции у детей в ряде случаев отмечается слабый иммунный ответ, а это, в свою очередь, затрудняет верификацию антител против H.pylori. Из-за медленного снижения титра антител после успешно проведенной противохеликобактерной терапии, которое продолжается в течение 6 месяцев, серологический метод, как оказалось, мало пригоден и при раннем контроле лечения как у детей, так и у взрослых (A. Cutler, 1996).

Несмотря на широкое использование в клинической практике в Европе и Америке уреазного дыхательного теста с С13 меченым атомом углерода он имеет ограничения при использовании его у детей раннего возраста (J. Dominiguez-Munos, 1997). В России этот тест не нашел широкого распространения из-за высокой стоимости оборудования и мочевины с С13 меченым атомом углерода.

Несколько лет назад в Европе появился новый неинвазивный тест, на основе ИФА, позволяющий определять антиген H.pylori в кале – Premier Platinum HpSA (Meridian Diagnostics, Италия). Многочисленные мультицентровые исследования, как в нашей стране, так и за рубежом показали высокую чувствительность и специфичность этого теста при первичной диагностике Н.pylori-инфекции и контроле лечения (A. Markristatis, 1998; D. Vaira, 1999; В.М. Говорун, 2000). Этот тест был признан «золотым стандартом» в диагностике Н.pylori-инфекции. Единственным ограничением широкого использования этого теста в клинической практике остается его высокая стоимость по сравнению с другими методами диагностики хеликобактериоза.

Попытки создания альтернативного, более дешевого, неинвазивного метода диагностики Н.pylori-инфекции на основе ПЦР до настоящего времени заканчивались неудачей из-за большого количества ложно-положительных результатов (A. Markristatis, 1998; D. Vaira, 1999; L Trevisani, 1999). Тем не менее, на базе научной лаборатории НПФ «ЛИТЕХ» был разработан новый тест для диагностики Н. pylori- иннфекции в кале на основе ПЦР.

Чувствительность нового неинвазивного метода диагностики Helicobacter pylori–инфекции в кале у взрослых составила 91,1%. Созданная тест-система на основе ПЦР, позволяет верифицировать ДНК H.pylori в кале у детей и взрослых и не уступает по чувствительности и специфичности Premier Platinum HpSA — тесту.

При проведении первой серии экспериментов верификации ДНК H.pylori в кале у взрослых чувствительность созданного нами теста оказалась значительно ниже и составила 75,6%. Нами, в свою очередь, было сделано предположение, что снижение чувствительности ПЦР-теста при первичной диагностике H.pylori-инфекции у взрослых связано, скорее всего, с более длительной эвакуацией каловых масс. Более длительная эвакуация каловых масс у взрослых, по сравнению с детьми, по-видимому, способствовала разрушению ДНК H.pylori. В связи со сделанным предположением, для увеличения скорости эвакуации кала, всем взрослым пациентам накануне исследования в качестве слабительного был назначен Дюфалак (СолвейкФарма, Франция) по 30 мл утром и вечером. После назначения слабительного и сокращения времени эвакуации кала чувствительность ПЦР-метода при первичной диагностике H.pylori–инфекции у взрослых стала такой же, как при первичной диагностике у детей и составила 91,1%.

Использование ПЦР-теста на 4-ой неделе после успешно проведенной противохеликобактерной терапии показало низкую специфичность, созданного нами теста, которая составила – 75,7%.

При проведении контроля лечения на 6-ой неделе нами была отмечена тенденция к снижению количества ложноположительных результатов и специфичность, созданного нами теста составила – 93,9%.

На 8-ой неделе специфичность теста составила 100%. Нами не было получено ни одного ложноположительного результата.

В 1999 г L. Trevisani и соавт. в 2000 г R. Ohkura и соавт. также обратили внимание на высокий процент ложноположительных результатов при постановке Premier Platinum HpSA теста на 4-6 неделе после успешно проведенной противохеликобактерной терапии. Полученные ложноположи-тельные результаты они объяснили возможностью персистенции в организме пролеченных пациентов кокковых форм H. pylori, количество которых, скорее всего, начинает со временем снижаться и полностью отсутствует на 8-12 неделе.

G. Masoero и соавт. показали, что подобные проблемы могут встречаться и при использовании для контроля лечения 13С УДТ.

Тем не менее, следует отметить, что потеря специфичности при использовании неинвазивных методов для контроля лечения не сопровождается потерей их чувствительности.

К преимуществам созданного нами ПЦР-теста можно, прежде всего, отнести его неинвазивность, простоту и быстроту выполнения (на постановку 30 исследований необходимо 4,5 — 5 часов) и относительно низкую себестоимость по сравнению с ИФА, дыхательным тестом, бактериологическим и гистологическим методами исследования. Ввиду невысокой стоимости данного теста он может быть использован не только для первичной диагностики H.pylori-инфекции, но и для эпидемиологических исследований.

Тест анализ на Хеликобактер пилори (дыхательный тест) в Киеве: цены, 1000 отзывов

Тест на хеликобактер пилори – это исследование, проводимое с целью обнаружения инфекции Helicobacter pylori в желудке и верхней части тонкого кишечника (двенадцатиперстной кишки). Данная инфекция может вызывать пептические язвы.

Виды тестов на хеликобактер пилори

Для определения инфекции H.pylori используются четыре теста.

Анализ крови на антитела: наличие антител означает, что пациент инфицирован в настоящее, либо был инфицированы в прошлом;

Анализ мочи: обследование определяет наличие инфекции в желудке. Данный вид теста можно использовать для контроля эффективности лечения;

Анализ кала: скрининг проверяет, есть ли вещества, которые провоцируют работу иммунной системы для противостояния данной инфекции;

Биопсия желудка: делается забор небольшого кусочка слизистой желудка и тонкой кишки в ходе проведения эндоскопии.

Показания к проведению теста на хеликобактер пилори

Врач может назначить тесты для обнаружения инфекции для диагностики причин язвы либо гастрита, а также для контроля эффективности лечения данных состояний.

Подготовка к обследованию

В случае назначения анализа крови, специальной подготовки от пациента не требуется. В случае анализа кала, стоит отказаться за двое суток от приема антибиотиков и ингибиторов протоновой помпы. Перед биопсией желудка и анализом мочи нужно отказаться от пищи и питья за 6 часов до обследования, и также воздержаться от приема лекарств. Для скринига мочи также требуется прием контрастного вещества (перорально).

Что означают результаты теста на хеликобактер пилори

Результаты обследования будут готовы в течение суток.

Нормальными считаются результаты, если:

  • взятые образцы не содержат антител к инфекции;
  • образцы не показывают роста Helicobacter pylori;
  • назначенное врачом лечение оказывает положительный эффект.

Отклонения от нормы:

  • в забранных образцах есть признаки инфекции;
  • обнаружен рост Helicobacter pylori;
  • терапия не дала положительной динамики.

Совет DOC.ua: если вы делаете забор образцов для исследования самостоятельно (кала или мочи), используйте только что открытые стерильные контейнеры. Иначе полученный результат обследования может оказаться не достоверным.

Диагностика Helicobacter pylori с помощью экспресс-теста на уреазу

Ann Transl Med. 2015 янв; 3(1): 9.

Медицинский факультет, Медицинский центр Майкла Э. Дебейки, штат Вирджиния, и Медицинский колледж Бэйлора, Хьюстон, Техас 77030, США

Автор, ответственный за переписку. Адрес для переписки: Дэвид И. Грэм, доктор медицины. Медицинский центр Майкла Э. Дебейки, штат Вирджиния, 2002 Holcombe Blvd- Rm 3a-320 (111d), Хьюстон, Техас 77030, США. Электронная почта: [email protected]

Поступила в редакцию 26 июля 2014 г .; Принято 14 октября 2014 г.

Copyright 2015 Анналы трансляционной медицины. Все права защищены. Эта статья цитировалась в других статьях PMC.

Abstract

Helicobacter pylori ( H. pylori ) является основным патогеном человека, вызывающим прогрессирующее поражение гастродуоденальной зоны. Руководящие принципы рекомендуют, чтобы, если нет веских причин для отсрочки, лечение было показано всем пациентам, у которых диагностирована инфекция. Экспресс-тест на уреазу (РУТ) является популярным диагностическим тестом, поскольку это быстрый, дешевый и простой тест, который определяет наличие уреазы в слизистой оболочке желудка или на ней.Чувствительность и специфичность, как правило, высоки, и многие версии были одобрены для использования на людях. Наилучшие результаты получаются, если биопсия берется как из антрального отдела, так и из тела. Образец ткани, помещенный в гель RUT, также можно использовать для других тестов, таких как молекулярные тесты на микробную чувствительность или факторы хозяина. Ложноположительные результаты редки, если RUT содержит антибактериальный агент для предотвращения роста уреазосодержащих загрязнителей, а тесты отбрасываются через 24 часа.Применение противомикробных препаратов и ингибиторов протонной помпы, а также наличие кишечной метаплазии могут привести к ложноотрицательным результатам. Отрицательный тест не следует использовать в качестве критерия излечения или в случаях, когда точность важна для ведения пациента, например, при кровотечении из верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Интерпретация теста должна учитывать претестовую вероятность и распространенность H. pylori в популяции. Тест также можно использовать для неформальной оценки точности результатов гистопатологии, а расхождения должны побудить к пересмотру гистопатологии и обсуждению с патологоанатомом.

Ключевые слова: Диагностика, Helicobacter pylori ( H. pylori ), уреаза, экспресс-тест на уреазу (РУТ), обзор, тест на кампилобактериоподобные организмы

Введение

Helicobacter pylori ) является важным патогеном человека, участвующим в патогенезе атрофического гастрита, гастродуоденальной язвы, рака желудка, MALT-лимфомы, идиопатической тромбоцитопенической пурпуры, железодефицитной анемии и дефицита витамина B12 (1).Несмотря на общее снижение распространенности инфекций H. pylori в западных странах, 30-40% населения США остается инфицированным (2,3). H. pylori не является комменсальным микроорганизмом, поскольку инфекция всегда вызывает воспаление и повреждение слизистой оболочки желудка. Основным поражением является прогрессирующее воспаление слизистой оболочки, которое может привести к предопухолевым атрофическим изменениям (1). Хотя H. pylori различаются по вирулентности (например, наличие острова патогенности cag), существует риск значительного клинического исхода, поскольку разница в риске между наименее и наиболее вирулентными составляет лишь приблизительно двукратную (1).Поскольку скорость прогрессирования повреждения слизистой оболочки непредсказуема, а инфекция всегда является трансмиссивной, было рекомендовано вылечить всякий раз, когда обнаруживается инфекция H. pylori , если нет веских причин, которые могли бы смягчить этот выбор (например, , очень пожилые люди с обширными сопутствующими заболеваниями) (4). В феврале 2013 г. правительство Японии одобрило стратегию универсального тестирования и лечения в рамках цели Японии по искоренению рака желудка (5).

Х.pylori , как и другие серьезные хронические инфекционные заболевания (например, сифилис и туберкулез), связаны с длительным латентным периодом, прежде чем они проявятся клинически. Таким образом, многие инфекции будут обнаружены в течение этого латентного периода. Был разработан ряд методов инфицирования H. pylori , и их обычно группируют как «инвазивные», что означает, что для них требуется ткань или слизь желудка, или «неинвазивные», требующие только крови, дыхания или стула или анализа. Здесь мы обсуждаем быстрый уреазный тест (БУТ) или БУТ, который является инвазивным тестом, поскольку требует забора проб слизистой оболочки желудка.Тест предоставляет косвенные доказательства инфекции, определяя присутствие фермента немлекопитающих, уреазы, в или на слизистой оболочке желудка.

История

H. pylori был впервые культивирован в 1983 году. В первоначальном отчете он описывался как уреазоотрицательный. Однако другие лаборатории, пытавшиеся воспроизвести первоначальный вывод, правильно определили, что микроорганизм был положительным по уреазе (6). Макналти и др. адаптировал стандартный лабораторный тест на активность уреазы, в котором петлю культуры помещают в субстрат, содержащий мочевину, с индикатором pH, таким как 2%-й мочевинный бульон Кристенсена; Уреаза гидролизует мочевину с образованием аммиака и углекислого газа (7). Аммиак увеличивает рН, что приводит к изменению цвета (от коричневого до розового). Макналти и др. показал, что уреаза может быть идентифицирована непосредственно из биопсии желудка с помощью этого теста, что устраняет необходимость в культуре или гистологии. За первоначальным наблюдением последовало большое клиническое исследование, опубликованное в 1989 г., в котором 1445 пациентов прошли тестирование на H. pylori с использованием модифицированного бульона Кристенсена с мочевиной (8). Они сообщили о почти 100% специфичности и 96% чувствительности по сравнению с гистологией и культурой.Барри Маршал добавил антибактериальный агент в агаровый гель, содержащий мочевину и индикатор pH, и запатентовал первый тест RUT, названный тестом на кампилобактероподобные организмы (CLO), который быстро стал стандартом для клинического использования и клинических испытаний.

Желудочная уреаза

Желудочная уреаза имела долгую историю до открытия H. pylori (9). В течение десятилетий считалось, что уреаза является ферментом млекопитающих, и предполагалось, что уреаза вырабатывается желудком для защиты желудка от переваривания желудочной кислотой (9).Уреаза была даже основой для терапии язвенной болезни. Например, Оливер Фитцджеральд, ирландский врач, лечил пептические язвы перорально и внутривенно вводимой мочевиной для нейтрализации кислотности желудка и заживления пептических язв (10). О первом уреазном дыхательном тесте, эквивалентном 13 C-мочевине, было сообщено в 1951 году, и он использовался для измерения активности уреазы в желудке лягушки (11). Когда стало очевидно, что уреаза имеет микробное происхождение, интерес к уреазе угас, поскольку стало ясно, что она не может отвечать за защиту слизистой оболочки желудка от повреждения кислотой, и поскольку большинство соответствующих экспериментов уже было проведено.Открытие того, что H. pylori продуцирует большое количество уреазы, позволило этим многочисленным экспериментам приобрести новый смысл (6).

RUT представляет собой непрямой тест на присутствие H. pylori , основанный на присутствии уреазы в слизистой оболочке желудка или на ней. Его преимущество перед серологическим исследованием заключается в том, что он выявляет только наличие активной инфекции. Для теста требуется образец слизистой оболочки или слизи желудка, который добавляется в пробирку, гель или другое устройство, которое приводит этот образец в контакт с мочевиной, и метод обнаружения продуктов гидролиза мочевины, аммиака или углекислого газа.Были разработаны различные тесты для оценки активности желудочной уреазы, и они были основаны, вероятно, на каждом возможном компоненте реакции, включая те, которые оценивают изменения меченого CO 2 в сыворотке или выдыхаемом воздухе, содержание аммиака в выдыхаемом воздухе и изменение pH, вызванное действием аммиак либо для изменения цвета, либо непосредственно с помощью рН-метра. В первоначальном тесте использовался феноловый красный, в котором цвет индикатора меняется с желтого на розовый или красный по мере увеличения pH. В других тестах использовались разные индикаторы, каждый из которых имел потенциальное преимущество, например возможность начать реакцию при более низком pH, таком как 5.4 и, таким образом, снижают активность загрязняющих рот бактерий, многие из которых также содержат большое количество уреазы (например, HP fast ® ) (). Простейшие тесты самодельные и содержат небольшое количество субстрата в пробирке с индикатором pH и могут быть изготовлены по цене один-два цента каждый (12).

Примеры трех популярных коммерческих экспресс-тестов на уреазу (RUT), доступных в США, включая тест CLO и два теста второго поколения, один с использованием геля с контролируемым pH, а другой с мембраной, насыщенной мочевиной.Одна из каждой пары является контрольной, а другая – после смены цвета. CLO, кампилобактероподобный организм.

Как и для любой ферментативной реакции, необходимо учитывать параметры, влияющие на реакцию, такие как концентрация субстрата, концентрация и активность фермента, время и температура, и были проведены исследования для проверки многих различных параметров, чтобы получить надежные результаты. Важные переменные включают сбор образцов, размер образца, время до того, как тест будет признан отрицательным, а также полезность нагревания.Для положительного результата БУТ требуется приблизительно 10 5 H. pylori в образце биопсии для изменения цвета с помощью теста на основе агара, такого как тест CLO (13). Как правило, это не проблема, поскольку концентрация H. pylori обычно превышает этот минимум. Чувствительность различных тестов RUT в качестве первичных диагностических тестов высока и, как сообщается, варьируется примерно от 80% до 100%, а специфичность — от 97% до 99% (14-17).

Первое требование состоит в том, что образец биопсии должен быть взят из места, где присутствуют микроорганизмы.Пациенты с язвой двенадцатиперстной кишки обычно имеют неатрофическую слизистую оболочку, и H. pylori особенно многочисленны по всему антральному отделу. Для этих пациентов один образец из антрального отдела или угла желудка будет иметь высокий выход, обычно более 85% и часто в диапазоне от 95% до 100%. Однако, если у пациента имеется атрофический гастрит и обширные области кишечной метаплазии, содержащие небольшое количество H. pylori , результаты часто будут неутешительными. Опубликованы многочисленные исследования места биопсии.Например, в одном исследовании были взяты два образца биопсии из антрального отдела желудка, и сообщалось о чувствительности и специфичности 95% и 100% (18). В другом исследовании сравнивались результаты биопсии, взятой из угла желудка, препилорического участка и участка тела тела, с результатами 100%, 87% и 84,4% соответственно и отсутствием ложноположительных результатов (т.е. специфичность 100%) (19). . В целом, для достижения наилучших результатов достаточно двух образцов: одного из антрального отдела без участков изъязвления и явной кишечной метаплазии и одного из нормально выглядящего тела желудка, что обеспечивает наивысший результат.Два образца можно поместить в один и тот же гель или среду или в отдельные контейнеры в зависимости от предпочтений врача и от того, планируется ли использование образцов в других целях.

Размер биопсии

Чувствительность и специфичность больших чашечных щипцов (диаметром 3,3 мм) и крошечных чашечных щипцов (диаметром 1,8 мм) сравнивали с использованием антральных биопсий у одних и тех же пациентов (20). Чувствительность и специфичность джамбо-пинцетов составляли 92,1% и 95,5% по сравнению с 88,5% и 98,8% для крошечных щипцов соответственно.Таким образом, для практических целей размер чашки для биопсии, по-видимому, не имеет большого значения. Поскольку большие щипцы также предоставляют больше информации для гистологического исследования, мы рекомендуем использовать самые большие щипцы, которые проходят через канал введения эндоскопа. Если используется действительно крошечная эндоскопия, такая как сверхтонкий эндоскоп, образцы для БУТ можно взять либо с помощью прилагаемых крошечных щипцов, либо путем чистки слизистой оболочки и помещения щетки в среду БУТ.

Скорость реакции РУТ частично зависит от температуры реакции.Было проведено сравнение, в котором антральные биоптаты помещались при 38 ° C в теплицу или хранились при комнатной температуре (~ 21 ° C). Возможность поставить диагноз в течение 30 минут была на 20% выше при использовании обогревателя (21), но в целом результаты были такими же. Многие эндоскописты кладут устройство RUT в карман, чтобы согреться. В целом, использование обогревателя мало что меняет, за исключением того, что оно позволяет чаще подтверждать диагноз до того, как пациент покинет эндоскопическую зону.

Имеющиеся в продаже наборы RUT предполагают принятие решения (положительный результат против отрицательный) в течение 24 часов. Время, когда тест становится положительным, зависит от концентрации бактерий и температуры. Большинство из них станут положительными в течение 120–180 минут, но лучше всего удерживать те, которые кажутся отрицательными, в течение 24 часов (22, 23). Через 24 часа тест может стать положительным из-за присутствия организмов, не содержащих H. pylori уреазы (24). Положительные результаты через 24 часа чаще всего являются ложноположительными и не должны использоваться для принятия решения о лечении. Мы обычно выбрасываем образцы через 24 часа.Существует ряд различных коммерчески доступных наборов RUT, которые в основном различаются в зависимости от платформы (например, гель, жидкость, мембрана и т. д.). Выбор зависит от доступности и местных предпочтений, поскольку ни один из них не оказался лучше.

Ложноотрицательные и ложноположительные результаты

Как отмечалось выше, БУТ представляет собой тест на наличие фермента уреазы. Однако фактические результаты будут зависеть от заболевания желудка и вероятности атрофических изменений или экзогенных факторов, которые снижают бактериальную нагрузку и, таким образом, дают ложноотрицательные результаты.Ложноположительные результаты могут быть получены, если другие микроорганизмы, содержащие уреазу, присутствуют в достаточном количестве или если допускается контакт образца и среды в течение длительного периода времени, обычно более 24 часов. Как отмечалось ранее, для получения положительного результата в образце биопсии должно присутствовать примерно 10 5 бактерий, и все, что снижает плотность бактерий, например, использование антибиотиков, висмутсодержащих соединений или ингибиторов протонной помпы, может привести к ложноотрицательные результаты (25-27). Двумя наиболее распространенными причинами ложноотрицательных результатов являются недавнее применение ингибиторов протонной помпы и наличие кишечной метаплазии. H 2 -антагонисты рецепторов не снижают плотность бактерий и могут использоваться до дня проведения теста (28). Неясно, как долго нужно ждать после прекращения приема ингибиторов протонной помпы, прежде чем вероятность ложноотрицательного результата станет маловероятной. Рекомендация двух недель обычно дается из соображений безопасности; однако организмы обычно быстро восстанавливаются после ингибирования ингибитором протонной помпы (26, 29).Тем не менее, все тесты на активную инфекцию, включая RUT, гистологию, дыхательный тест с мочевиной и культуру, могут стать ложноотрицательными во время использования ингибитора протонной помпы или после применения висмута или антибиотиков (28). Маловероятно, что ложноотрицательный результат РУТ также будет сопровождаться гистологически невоспаленной и нормальной слизистой оболочкой желудка. Если вы сомневаетесь, а результат важен, лучше всего после прекращения приема ИПП провести неинвазивный тест (дыхательный тест с мочевиной или антиген в кале).

FALSE-POSTIVIVES Редкие и при наличии могут быть связаны с наличием другого уреализации, содержащего организмы, такие как Proteus Mirabilis , Clebsiella Pneumonia , Klebsiella Pneumonia , Enterobactor Cloacae и Staphylococcus aureus (22) .Однако, если у пациента нет ахлоргидрии или гипохлоргидрии, маловероятно, что микроорганизмы, отличные от H. pylori , будут присутствовать в достаточной концентрации для получения положительного теста, если только в субстрате БУТ отсутствует ингибитор роста бактерий, в котором они могут размножаться в течение 24 дней. часов период наблюдения.

Клиническая интерпретация результатов БУТ

Интерпретация БУТ, как и любого диагностического теста, частично зависит от претестовой вероятности инфекции (30).Таким образом, у пациента с язвой двенадцатиперстной кишки один положительный результат БУТ будет считаться подтверждением диагноза, тогда как отрицательный тест должен быть подтвержден результатами другого теста, такого как гистология (например, отсутствие признаков воспаления желудка). Напротив, у пожилого пациента, перенесшего эндоскопию по поводу гастроэзофагеальной рефлюксной болезни, можно было бы не спешить начинать терапию только на основании положительного результата БУТ. Таким образом, интерпретация зависит от претестовой вероятности и важности результата для последующего ведения пациента.Чтобы сэкономить деньги пациентов, некоторые врачи предлагают брать биопсию для БУТ, а также для гистологического исследования нормальной слизистой оболочки, а затем, если БУТ положительный, выбрасывать гистологические образцы за ненадобностью (23,31,32). В то время как это может иметь смысл при наличии высокой вероятности претеста (например, активной язвы двенадцатиперстной кишки), это не было бы разумным у пациента с неязвенной диспепсией, когда сами гистологические данные могут быть важны (например, наличие атрофических изменений, дисплазия и др.). Также было рекомендовано, чтобы БУТ не использовался в качестве единственного арбитра результатов эрадикационной терапии H. pylori , поскольку чувствительность БУТ не составляет 100%, и, таким образом, отрицательный результат теста не полностью исключает наличие активного вируса. инфекции (4,28). Это особенно важно, когда причиной обследования является проверка излечения. В действительности эндоскопия редко проводится для проверки излечения, за исключением пациентов с поражениями, требующими дальнейшего эндоскопического и/или гистологического исследования, такими как язва желудка или после резекции аденоматозных полипов, и редко возникает вопрос о роли БУТ после терапии.Для таких пациентов, вероятно, наиболее рентабельно полагаться на гистологическое исследование биоптатов антрального отдела и тела желудка.

Вообще говоря, эндоскопия верхних отделов является дорогостоящим исследованием, связанным с небольшим, но определенным риском, и, если нет особых противопоказаний, обычно показана биопсия для гистологического исследования слизистой оболочки. Также можно провести тест на БУТ, который особенно полезен в сложных диагностических ситуациях, когда врач хочет начать лечение в ближайшее время. Так как такие биопсии для БУТ часто берут у пациентов с недавним кровотечением из верхних отделов желудочно-кишечного тракта.В этой ситуации может наблюдаться повышенная распространенность ложноотрицательных результатов. Было высказано предположение, что кровь приводит к снижению чувствительности RUT, что, возможно, связано с присутствием альбумина (33), факторов, убивающих H. pylori , в плазме человека (34) или крови в просвете желудка (35,36). Однако в других исследованиях сообщается, что кровь не влияет на тест (37,38). Ложноотрицательные тесты также распространены после частичной гастрэктомии, вероятно, из-за снижения бактериальной нагрузки, часто связанной с наличием желчи (39,40).Ни в одной из этих ситуаций крайне важно немедленно диагностировать или начинать лечение инфекции H. pylori . Поскольку такие ложноотрицательные результаты не имеют большого клинического значения, если только они не принимаются в качестве доказательства отсутствия инфекции H. pylori . Всегда нужно возвращаться к рассмотрению того, что вы планируете делать с информацией (т. е. положительным тестам, как правило, следует верить, но отрицательные тесты требуют гистологического или другого подтверждения, когда присутствие H.pylori , вероятно, является причиной проведения эндоскопии, например, при кровоточащей пептической язве). Поскольку большинство инфекций H. pylori были приобретены в детстве, нет необходимости в немедленном лечении, и всегда можно дождаться разрешения острых состояний.

Использование образца БУТ для дополнительных целей

Образец ткани, содержащийся в агаре теста БУТ, может быть использован для другой цели. Например, образец можно извлечь из агарового геля положительных тестов и использовать для молекулярного тестирования на H.pylori и/или на наличие устойчивости к кларитромицину (41). Поскольку образец содержит ткань хозяина, его также можно использовать для других тестов, таких как генотип CYP2C19 хозяина (42).

Резюме

RUT — это быстрый, дешевый и простой тест, который часто используется в клинической практике. RUT лучше всего рассматривать как скрининговый тест, а не как золотой стандарт для инфекции H. pylori . Для клинических испытаний диагноз инфекции H. pylori требует, чтобы два разных типа теста были положительными или положительными культурами. H. pylori отрицательный обычно определяется как отрицательный результат всех тестов. Ключом к правильному использованию является рассмотрение любого теста с точки зрения претестовой вероятности, а также важности информации с точки зрения ведения пациента. Ложноотрицательные тесты встречаются чаще, чем ложноположительные, и поэтому отрицательный результат не следует использовать для исключения H. pylori , когда неправильный диагноз может нанести ущерб лечению пациента (например, у пациента с недавним кровотечением из верхних отделов желудочно-кишечного тракта или после ЧАС.pylori эрадикационная терапия). Положительная культура считается единственным истинным золотым стандартом для диагностики H. pylori , поэтому при подозрении на ложноотрицательный результат необходимо дополнительное тестирование. Наконец, тест также можно использовать в качестве неофициальной оценки точности лаборатории патологии, и расхождения между БУТ и гистологией, особенно положительной БУТ и отрицательной гистологией, должны вызвать пересмотр гистопатологии и обсуждение с патологоанатомом.

Благодарности

Д-р Грэм частично поддерживается Управлением исследований и разработок Службы медицинских исследований Департамента по делам ветеранов, гранты Службы общественного здравоохранения R01 DK062813 и DK56338, которые финансируют Центр болезней пищеварительного тракта Техасского медицинского центра. Содержание является исключительной ответственностью авторов и не обязательно отражает официальную точку зрения VA или NIH.

Вклад авторов: Каждый из авторов участвовал в равной степени, прочитал и одобрил окончательный вариант рукописи. Каждый из них соответствует критериям авторства, установленным Международным комитетом редакторов медицинских журналов, и подтверждает достоверность сообщаемых результатов.

Раскрытие информации: Д-р Грэм является неоплачиваемым консультантом Novartis по вопросам разработки вакцины для лечения или профилактики инфекции H. pylori . Доктор Грэм является платным консультантом RedHill Biopharma по новым методам лечения H. pylori и получил поддержку в исследованиях культуры H.пилори . Он является консультантом Otsuka Pharmaceuticals по диагностическим тестам на дыхание. Доктор Грэм получил гонорары за патенты Медицинского колледжа Бэйлора, охватывающие материалы, относящиеся к 13 дыхательному тесту на C-мочевину. Доктору Уотани нечего декларировать.

Ссылки

1. Шиотани А., Сен П., Грэм Д.Ю. Искоренение рака желудка в настоящее время возможно и практично. Semin Cancer Biol 2013; 23:492-501. [PubMed] [Google Scholar]2. Петерсон В.Л., Фендрик А.М., Кейв Д.Р. и др.Заболевание, связанное с Helicobacter pylori: рекомендации по тестированию и лечению. Arch Intern Med 2000; 160: 1285-91. [PubMed] [Google Scholar]3. Град Ю.Х., Липсич М., Айелло А.Е. Многолетние тенденции серопревалентности Helicobacter pylori среди взрослых в Соединенных Штатах: доказательства устойчивого расового/этнического неравенства. Am J Epidemiol 2012;175:54-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]4. Malfertheiner P, Megraud F, O’Morain CA, et al. Ведение инфекции Helicobacter pylori — Консенсусный отчет Maastricht IV/Florence.Гут 2012;61:646-64. [PubMed] [Google Scholar]5. Асака М., Като М., Сакамото Н. Дорожная карта по искоренению рака желудка с помощью эрадикации Helicobacter pylori и последовательного эпиднадзора в Японии. J Гастроэнтерол 2014;49:1-8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]6. Кампилобактероподобные организмы в желудке больных и здоровых лиц. Ланцет 1984; 1:1348-9. [PubMed] [Google Scholar]7. McNulty CA, Wise R. Быстрая диагностика гастрита, ассоциированного с Campylobacter. Ланцет 1985; 1:1443-4. [PubMed] [Google Scholar]8.McNulty CA, Dent JC, Uff JS, et al. Обнаружение Campylobacter pylori с помощью уреазного теста биопсии: оценка у 1445 пациентов. Гут 1989;30:1058-62. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]9. Graham DY, Go MF, Evans DJ, Jr. Обзорная статья: уреаза, желудочный аммоний/аммиак и Helicobacter pylori — прошлое, настоящее и рекомендации для будущих исследований. Aliment Pharmacol Ther 1992;6:659-69. [PubMed] [Google Scholar] 10. Фитцджеральд О., Мерфи П. Исследования физиологической химии и клинического значения уреазы с особым упором на желудок.Irish J Med Sci 1950; 292:97-159. [Google Академия] 11. Фон Корф Р.В., Глик Д. Роль уреазы в слизистой оболочке желудка. II. Исследования in vitro с изотопной мочевиной на слизистой оболочке лягушки. Am J Physiol 1951; 165:688-94. [PubMed] [Google Scholar] 12. Хейзелл С.Л., Бороди Т.Дж., Гал А. и др. Campylobacter pyloridis гастрит I: определение уреазы как маркера бактериальной колонизации и гастрита. Am J Gastroenterol 1987;82:292-6. [PubMed] [Google Scholar] 13. Mégraud F, Bessède E, Lehours P. Текущие методы, используемые для диагностики инфекции Helicobacter pylori.В: Бузас ГМ. ред. Helicobacter pylori — мировая перспектива, 2014 г. Дубовый парк: Bentham Science, 2014: 234–58. [Google Академия] 14. Кальвет Х., Санчес-Дельгадо Дж., Монтсеррат А. и др. Точность диагностических тестов на Helicobacter pylori: переоценка. Clin Infect Dis 2009;48:1385-91. [PubMed] [Google Scholar] 15. Аль-Хумайед С.М., Ахмед М.Е., Белло К.С. и др. Сравнение 4 лабораторных методов обнаружения Helicobacter pylori. Саудовская Медицина J 2008; 29: 530-2. [PubMed] [Google Scholar] 16. Редеен С., Петерссон Ф., Торнкранц Э. и др.Надежность диагностических тестов на инфекцию Helicobacter pylori. Gastroenterol Res Pract 2011; 2011:940650. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] 17. Вайра Д., Перна Ф. Насколько полезен экспресс-тест на уреазу для оценки эффективности эрадикационной терапии Helicobacter pylori? Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol 2007; 4: 600-1. [PubMed] [Google Scholar] 18. Эль-Зимаити Х.М., Аль-Асси М.Т., Гента Р.М. и др. Подтверждение успешной терапии инфекции Helicobacter pylori: количество и место биопсии или экспресс-тест на уреазу.Am J Gastroenterol 1995; 90:1962-4. [PubMed] [Google Scholar] 19. Ву Дж. С., Эль-Зимаити Х. М., Гента Р. М. и др. Лучшее место в желудке для получения положительного экспресс-теста на мочевину. Хеликобактер 1996;1:256-9. [PubMed] [Google Scholar] 20. Юсфи М.М., Эль-Зимаити Х.М., Коул Р.А. и соавт. Обнаружение Helicobacter pylori с помощью экспресс-тестов с уреазой: является ли размер биопсии критической переменной? Gastrointest Endosc 1996;43:222-4. [PubMed] [Google Scholar] 21. Юсфи М.М., Эль-Зимаити Х.М., Коул Р.А. и соавт. Влияет ли использование грелки на результаты экспресс-теста уреазы на Helicobacter pylori? Gastrointest Endosc 1996;43:260-1.[PubMed] [Google Scholar] 22. Осаки Т., Мабе К., Ханава Т. и др. Уреазоположительные бактерии в желудке вызывают ложноположительную реакцию в уреазном дыхательном тесте для диагностики инфекции Helicobacter pylori. J Med Microbiol 2008;57:814-9. [PubMed] [Google Scholar] 23. Перна Ф., Риччи С., Гатта Л. и др. Диагностическая точность нового экспресс-теста на уреазу (Pronto Dry) до и после лечения инфекции Helicobacter pylori. Minerva Gastroenterol Dietol 2005;51:247-54. [PubMed] [Google Scholar] 25. Грэм Д.Ю., Лью Г.М., Малати Х.М. и др.Факторы, влияющие на эрадикацию Helicobacter pylori при тройной терапии. Гастроэнтерология 1992;102:493-6. [PubMed] [Google Scholar] 26. Грэм Д.Ю., Опекун А.Р., Хаммуд Ф. и др. Исследования механизма ложноотрицательных уреазных дыхательных тестов с ингибиторами протонной помпы. Am J Gastroenterol 2003;98:1005-9. [PubMed] [Google Scholar] 27. Форне М., Вивер Дж. М., Эспинос Дж. К. и соавт. Влияние коллоидного субнитрата висмута на показатели эрадикации язвы двенадцатиперстной кишки, связанной с инфекцией Helicobacter pylori, с использованием короткого режима лечения омепразолом и кларитромицином: рандомизированное исследование.Am J Gastroenterol 1995;90:718-21. [PubMed] [Google Scholar] 28. Аттуми Т.А., Грэм Д.Ю. Последующее тестирование после лечения инфекции Helicobacter pylori: предостережения, предостережения и рекомендации. Clin Gastroenterol Hepatol 2011;9:373-5. [PubMed] [Google Scholar] 29. Лейн Л., Эстрада Р., Трухильо М. и др. Влияние терапии ингибиторами протонной помпы на диагностическое тестирование Helicobacter pylori. Энн Интерн Мед 1998;129:547-50. [PubMed] [Google Scholar] 30. Веккио Т.Дж. Прогностическая ценность одного диагностического теста в невыбранных популяциях.N Engl J Med 1966; 274:1171-3. [PubMed] [Google Scholar] 31. Мидоло П., Маршалл Б.Дж. Точная диагностика Helicobacter pylori. Уреазные тесты. Gastroenterol Clin North Am 2000;29:871-8. [PubMed] [Google Scholar] 32. Лейн Л., Левин Д., Наритоку В. и др. Проспективное сравнение коммерчески доступных экспресс-тестов на уреазу для диагностики Helicobacter pylori. Gastrointest Endosc 1996;44:523-6. [PubMed] [Google Scholar] 33. Леунг В.К., Сунг Дж.Дж., Сиу К.Л. и др. Ложноотрицательный уреазный тест биопсии при кровоточащих язвах, вызванных буферным действием крови. Am J Gastroenterol 1998;93:1914-8. [PubMed] [Google Scholar] 34. Хоутон Дж., Рамамурти Р., Пандья Х. и др. Плазма человека оказывает прямое бактерицидное действие на Helicobacter pylori in vitro, что потенциально объясняет сниженное обнаружение Helicobacter pylori во время острого кровотечения из верхних отделов ЖКТ. Gastrointest Endosc 2002; 55:11-6. [PubMed] [Google Scholar] 35. Tu TC, Lee CL, Wu CH и др. Сравнение инвазивных и неинвазивных тестов для выявления инфекции Helicobacter pylori при кровоточащих пептических язвах. Gastrointest Endosc 1999;49:302-6.[PubMed] [Google Scholar] 36. Вильднер-Кристенсен М., Туборг Лассен А., Линдебьерг Дж. и соавт. Диагностика Helicobacter pylori у кровоточащих больных пептической язвой, оценка проб с мочевиной. Дайджест 2002;66:9-13. [PubMed] [Google Scholar] 37. Тан Дж. Х., Лю Н. Дж., Ченг Х. Т. и др. Эндоскопическая диагностика инфекции Helicobacter pylori с помощью быстрого уреазного теста при кровоточащих пептических язвах: проспективное исследование случай-контроль. J Clin Gastroenterol 2009;43:133-9. [PubMed] [Google Scholar] 38. Архимандритис А., Циврас М., Сугиультзис С. и др.Экспресс-тест с уреазой менее чувствителен, чем гистология, в диагностике инфекции Helicobacter pylori у пациентов с неварикозным кровотечением из верхних отделов желудочно-кишечного тракта. J Gastroenterol Hepatol 2000;15:369-73. [PubMed] [Google Scholar] 39. Тянь XY, Чжу Х, Чжао Дж и др. Диагностическая эффективность уреазного дыхательного теста, быстрого уреазного теста и гистологического исследования инфекции Helicobacter pylori у пациентов с частичной гастрэктомией: метаанализ. J Clin Gastroenterol 2012;46:285-92. [PubMed] [Google Scholar]40. Адамопулос А.Б., Стергиу Г.С., Сакизлис Г.Н. и др.Диагностическая ценность быстрого уреазного теста и уреазного дыхательного теста для выявления Helicobacter pylori у пациентов с гастрэктомией по Бильрот II: проспективное контролируемое исследование. Dig Liver Dis 2009;41:4-8. [PubMed] [Google Scholar]41. Ли Ю., Римбара Э., Тирумурти С. и др. Выявление устойчивости Helicobacter pylori к кларитромицину после некриогенного хранения экспресс-тестов на уреазу в течение 30 дней. J Dig Dis 2012; 13:54-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]42. Фурута Т., Сугимото М., Кодаира С. и др.Схемы экстренной помощи третьей линии на основе ситафлоксацина при инфекции Helicobacter pylori в Японии. J Gastroenterol Hepatol 2014;29:487-93. [PubMed] [Google Scholar]

Быстрый уреазный тест (RUT) для оценки активности уреазы в бактериях полости рта in vitro и в наддесневом зубном налете ex vivo | BMC Oral Health

Bacteria

Как видно из таблицы 1, бактериальные штаммы, использованные для оценки БУТ in vitro, включали как лабораторные эталонные штаммы (Коллекция культур, Гетеборгский университет, CCUG, Швеция; Американская коллекция типовых культур, ATCC), так и собственные клинические изоляты (Oral Microbiology, Гетеборг, Швеция, OMGS). Campylobacter Ureolyticus , H. Pylori, штаммы Epidermidis H. [14]. Кроме того, виды бактерий полости рта, например, Были включены A. naeslundii, H. parainfluenzae и S. salivarius с документально подтвержденной уреолитической способностью [3, 4].Кроме того, мы также включили ряд штаммов, обычно связанных с наддесневым и поддесневым зубным налетом (см. Таблицу 1). Свежие клинические изоляты A. naeslundii, H. parainfluenzae и S. salivarius из образцов слюны оральной микробиологической диагностической лаборатории отделения, идентифицированные общепринятыми лабораторными методами [14], использовали для оценки штаммовой изменчивости бактерий ( Таблица 2).

Таблица 1. Бактериальные виды, протестированные на уреазную активность с помощью теста БУТ, показания после 1 ч инкубации при 36 °C Таблица 2. Реакции клинических пероральных изолятов в методе БУТ, полученные через 1 час.Клетки были получены с чашек с агаром путем соскоба (1 мкл)

Уреазный тест

Микрометод NCTC (Национальная коллекция типовых культур, NCTC, Public Health England, UK) RUT, используемый для обнаружения H. pylori в желудке образцы [15, 16] были преобразованы в формат микропланшета и использованы для оценки уреазоположительных бактерий. Уреазный бульон (Bakt lab, Sahlgrenska Hospital, Гетеборг, Швеция) использовали в объеме 100 мкл в 96-луночных микротитровальных планшетах (Nunc, Копенгаген, Дания).Питательный бульон содержал 2% мочевины, рН 6,8 и феноловый красный в качестве индикатора. Бульон имеет оранжевый цвет, который становится желтым при более низком рН и от розового до красного, а затем фиолетовым при щелочном рН.

In vitro оценка активности уреазы в бактериальных штаммах

Бактериальные штаммы, представленные в таблице 1 (включая уреазоположительные и отрицательные контрольные штаммы), выращивали на чашках с кровяным агаром для бруцелл в аэробных условиях в течение 2 дней или, в случае анаэробных видов , анаэробно в течение 5–7 дней при 36 o С.Колонии из чашек собирали путем соскоба петлей (1 мкл инокуляционной петли, Sarstedt, Nümbrecht, Germany) клеток колоний, которые суспендировали в бульоне с мочевиной и инкубировали при 36 °C. Изменение цвета считывали через 15 мин, 30 мин, 1 и 2 ч. Визуальное изменение цвета оценивали как отсутствие реакции (0) за отсутствие изменения цвета (или отмечали как «изменение на желтый в результате образования кислоты»), + обозначал слабую реакцию со сдвигом в розовый цвет, ++ обозначал умеренную реакцию. реакция со сдвигом в сторону красного и +++ сильная реакция с ярко-фиолетовой окраской.

S. epidermidis (OMGS 3949), C. ureolyticus (CCUG 7319), S. salivarius (OMGS 3945) и A. naeslundii (OMGS 2466) и 9 положительных контролей (EGS 2466) .coli (OMGS 3935) в качестве отрицательного контроля в серии экспериментов, проведенных для дальнейшей оценки зависимости метода от времени и температуры. Чтобы проверить зависимость от времени, планшеты оставляли на столе и считывали каждый час в течение еще 4 часов и, наконец, через 24 часа.Температурную зависимость тестировали в аналогичные моменты времени после инкубации планшетов при температуре 20, 25 и 36 °C. Все эксперименты проводились в трехкратной повторности.

Те же самые бактериальные штаммы использовали для тестирования БУТ на зависимость от глюкозы и пониженного рН во время роста бактерий перед инокуляцией в тестовом бульоне с мочевиной. Штаммы инкубировали в пептонном бульоне, содержащем 0,1, 0,5 или 1,0% глюкозы, в течение 1–2 дней. Измеряли конечный рН, бактериальные клетки собирали центрифугированием, а затем использовали петлевое количество (1 мкл) для тестирования активности уреазы с помощью метода RUT.За реакцией следили и считывали через 1 час.

Вариабельность активности уреазы у штаммов тестировали с использованием свежих клинических изолятов S. salivarius (8 штаммов), A. naeslundii (8 штаммов) и H. parainfluenzae (5 штаммов) и с использованием обеих полученных клеток. из чашек с агаром (1 мкл) и из осадка (1 мкл) после бульонной культуры.

Ex vivo оценка активности уреазы в зубном налете

Восемнадцать добровольцев (11 женщин и 7 мужчин, средний возраст ± SD 37. 3 ± 15,4, диапазон 25–69) среди студентов и сотрудников лаборатории Института одонтологии Гетеборгского университета. У них был DMFT ± SD (пропущенные разрушенные запломбированные зубы ± стандартное отклонение) 9,7   ±   5,54. Для оценки метода RUT на зубном налете ex vivo не было сочтено необходимым никаких дополнительных конкретных критериев включения. Испытуемых проинструктировали не чистить зубы за 2 дня до теста и не есть и не пить ничего, кроме воды, за 2 часа до теста. Все они участвовали добровольно и дали информированное согласие.

Отдельные образцы наддесневого зубного налета собирали путем соскоба кюреткой с межпроксимальных участков между нижними резцами (участок 31/41), между верхними резцами (участок 11/21), между верхним левым первым моляром и вторым премоляром (участок 26 /25), а также между вторым правым нижним премоляром и моляром (участок 45/46) у 18 взрослых особей. Петлю (1 мкл) налета из каждого соответствующего участка добавляли к 100 мкл бульона мочевины в 96-луночном планшете и оставляли при комнатной температуре. Цветную реакцию считывали через 1 час и оценивали аналогично бактериальным тестам in vitro.

Статистический анализ

Непараметрический критерий Манна-Уитни использовали для анализа различий уреазной активности интерпроксимального наддесневого зубного налета между участками. Статистический анализ проводили с использованием Microsoft® Excel® для Mac (версия 14.4.8, 2011 г.) и KaleidaGraph® (версия 4.1.2, Synergy Software, 2011 г.). Статистически значимым считалось, если значение p было < 0.05.

Роль быстрого уреазного теста и гистопатологии в диагностике инфекции Helicobacter pylori в развивающихся странах | BMC Gastroenterology

  • Blaser MJ: Экология Helicobacter pylori в желудке человека. Джей Клин Инвест. 1997, 100: 759-762.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Blaser MJ, Perez-Perez GI, Kleanthous H, Cover TL, Peek RM, Chyou PH, Stemmermann GN, Nomura A: Инфекция штаммами Helicobacter pylori , содержащими cagA, связана с повышенным риском развития аденокарциномы желудок. Рак рез. 1995, 55: 2111-2115.

    КАС пабмед Google ученый

  • Goossens H, Glupczynski Y, Burette A, Van den Borre C, Butzler JP: Оценка коммерчески доступного иммуноглобулина G второго поколения для иммуноферментного анализа для выявления инфекции Helicobacter pylori . Дж. Клин Микробиол. 1992, 30: 176-180.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Кляйн П.Д., Малати Х.М., Мартин Р.Ф., Грэм К.С., Гента Р.М., Грэм Д.Ю.: Неинвазивное выявление инфекции Helicobacter в клинической практике: дыхательный тест с мочевиной 13С.Am J Гастроэнтерол. 1996, 91: 690-696.

    КАС пабмед Google ученый

  • Брукс Х.Дж., Ахмед Д., МакКоннелл М.А., Барбезат Г.О.: Диагностика инфекции Helicobacter pylori с помощью полимеразной цепной реакции: стоит ли?. Диагностика Microbiol Infect Dis. 2004, 50: 1-5. 10.1016/j.diagmicrobio.2003.11.010.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Lam SK, Talley NJ: Консенсусная конференция по лечению инфекции Helicobacter pylori .J Гастроэнтерол Гепатол. 1998, 13: 1-12.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Лайне Л., Эстрада Р., Трухильо М., Книгге К., Феннерти М.Б.: Влияние терапии ингибиторами протонной помпы на диагностическое тестирование на Helicobacter pylori. Энн Интерн Мед. 1998, 129: 547-550.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Dickey W, Kenny BD, McConnell JB: Влияние ингибиторов протонной помпы на обнаружение Helicobacter pylori в биопсии желудка.Алимент Фармакол Тер. 1996, 10: 289-293.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Stolte M, Bethke B: Элиминация Helicobacter pylori при лечении омепразолом.Zeitschrift Fur Gastroenterologie. 1990, 28: 271-274.

    КАС пабмед Google ученый

  • Graham DY, Opekun AR, Jogi M, Yamaoka Y, Lu H, Reddy R, El-Zimaity HM: Ложноотрицательные дыхательные тесты с мочевиной с антагонистами h3-рецепторов: взаимодействие между плотностью Helicobacter pylori и pH. Хеликобактер. 2004, 9: 17-27. 10.1111/j.1083-4389.2004.00191.x.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Сиддики С., Хамид С., Рафик Г., Чаудхри С.А., Али Н., Шахаб С., Зауэрборн Р.: Практика выдачи рецептов государственными и частными поставщиками медицинских услуг в округе Атток, Пакистан. Управление Int J Health Plann. 2002, 17: 23-40. 10.1002/л.с./мин.650.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Штурм А.В., ван дер Пол Р., Смитс А.Дж., ван Хеллемондт Ф.М., Мутон С.В., Джамиль Б., Минай А.М., Самперс Г.Х.: Наличие безрецептурных противомикробных препаратов, самолечение и формы резистентности в Карачи , Пакистан. J Антимикробная химиотерапия. 1997, 39: 543-547. 10.1093/як/39.4.543.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Прайс АВ: Сиднейская система: гистологическое деление.J Гастроэнтерол Гепатол. 1991, 6: 209-222.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Саид Р.М., Чеа П.Л., Чин С.К., Го К.Л.: Оценка нового уреазного теста биопсии: Pronto Dry для диагностики инфекции Helicobacter pylori . Eur J Гастроэнтерол Гепатол. 2004, 16: 195-199. 10.1097/00042737-200402000-00012.

    Артикул пабмед Google ученый

  • Шнелл Г.А., Шуберт Т.Т., Барнс В.Г., Рупани М.К.: Сравнение тестов на уреазу, H & E и культуральные тесты для Helicobacter pylori .Гастроэнтерология. 1998, 94: А 410-

    Google ученый

  • Logan RP, Walker MM, Misiewicz JJ, Gummett PA, Karim QN, Baron JH: Изменения внутрижелудочного распределения Helicobacter pylori во время лечения омепразолом. Кишка. 1995, 36: 12-16.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Veldhuyzen van Zanten SJO, Leung V, O’Rourke JL, Lee A: Переходные зоны желудка, области, где лечение Helicobacter не дало результатов: результаты испытания лечения с использованием модели мышей Sydney Strain. Противомикробные агенты Chemother. 2003, 47: 2249-2255. 10.1128/ААС.47.7.2249-2255.2003.

    Артикул Google ученый

  • Оценка одноминутного ультрабыстрого уреазного теста для диагностики Helicobacter pylori

    Существует несколько методов диагностики инфекции Helicobacter pylori . тесты. Хотя некоторые из них имеются в продаже2, они относительно дороги и поэтому могут быть доступны не всем клиницистам, особенно в развивающихся странах.Тем не менее, существует несколько местных тестов на уреазу, которые очень легко приготовить и они недороги.3-5 Однако есть сомнения относительно чувствительности и специфичности этих тестов. В большинстве наших исследований мы использовали одноминутный ультрабыстрый уреазный тест (URUT)3. Это исследование было предпринято для оценки надежности URUT по сравнению с гистологией.

    Сначала мы провели пилотное исследование 20 биопсий желудка, чтобы выяснить, можно ли использовать одну и ту же биопсию желудка для URUT, мазков-отпечатков и гистологии. Результаты этого пилотного исследования показали, что та же самая ткань биопсии может быть использована для выполнения URUT и подготовки мазков-отпечатков без неблагоприятного воздействия на ткань для последующего гистологического исследования.

    Пациенты и методы

    Было обследовано 1000 пациентов, перенесших эндоскопию верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Из исследования исключались пациенты, получавшие ингибиторы протонной помпы, антибиотики или висмутсодержащие препараты, а также пациенты, получавшие терапию, направленную на эрадикацию H. pylori .Были взяты четыре биопсии слизистой оболочки желудка: две из антрального отдела в пределах 4 см от привратника (одна из большой и другая из малой кривизны) и две из тела желудка.

    Одноминутный сверхбыстрый уреазный тест был свежеприготовлен, как описано Thillainayagam et al. .3 Вкратце, каждую биопсийную ткань немедленно помещали в пробирку Эппендорфа с крышкой, содержащую 0,5 мл свежеприготовленного раствора 10% мочевины в деионизированной вода, в которую добавлено две капли 1% фенолового красного в качестве индикатора рН. О положительном результате свидетельствовало изменение цвета раствора с оранжевого на розовый в течение первой минуты .

    После ознакомления с результатами УРУТ ткань биопсии извлекали из раствора мочевины и делали мазки-отпечатки, слегка прокатывая ее на чистом предметном стекле с помощью иглы для подкожных инъекций. Мазок-отпечаток подсушивали на воздухе и фиксировали в абсолютном спирте. Затем биоптат фиксировали в 10% формалине и отправляли на гистопатологическое исследование.

    Мазки-отпечатки

    окрашивали метиленовым синим по Лёффлеру, как описано ранее.6 Мазки были прочитаны патологоанатомом, который не знал ни личности пациента, ни клинического диагноза, ни результата URUT.

    Биопсийный материал обрабатывали в обычном порядке и делали срезы толщиной 3–5 мкм. Срезы окрашивали метиленовым синим по Леффлеру6 и кодировали. Их читал тот же патологоанатом, который читал мазки-отпечатки.

    Мазки-отпечатки и гистологические срезы были тщательно исследованы на наличие H. pylori .Тяжесть колонизации H pylori оценивалась как: 0, бактерии не обнаружены; 1 — видны спорадические бактерии; 2, многие бактерии видны в большинстве полей микроскопа; 3, бактерии видны скоплениями во всех исследованных полях.

    Результаты

    Средний (± SD) возраст пациентов составил 31 (± 10,2) года, мужчин было 664 (66%).

    АНТРАЛЬНАЯ БИОПСИЯ

    Обе биопсии были положительными на H pylori у 858 пациентов. Одна из антральных биопсий была положительной, тогда как другая была отрицательной у девяти пациентов, и обе биопсии были отрицательными на наличие H. pylori у 133 пациентов.Таким образом, распространенность H. pylori в антральном отделе желудка составила 86,7%. Мазки-отпечатки показали почти идеальную корреляцию с гистологией, и все, кроме одной из биопсий, показывающих присутствие H. pylori , также показали H. pylori на мазках-отпечатках. В одном образце биопсии со степенью 1 H pylori мазок-отпечаток был ложноотрицательным; у этого пациента другой отпечаток, сделанный из другой антральной ткани, показал H pylori . Ни один из мазков отпечатков не был ложноположительным.

    Из 1725 биопсий, положительных на H pylori при гистологическом исследовании, 1583 (91,8%) дали положительный результат при URUT. Из 858 пациентов, у которых обе биопсии (всего 1716) были положительными, УРИТ был положительным в 1576 биопсиях. Он был положительным у семи из девяти пациентов, у которых одна из биопсий была положительной. Все биоптаты, которые не показали присутствия H pylori при гистологическом исследовании, дали отрицательный результат при URUT. Чувствительность, специфичность, положительная и отрицательная прогностическая ценность и общая диагностическая точность URUT для диагностики инфекции H pylori в антральном отделе желудка составляли 92%, 100%, 100%, 66% и 93% соответственно.Из 142 ложноотрицательных URUT 140 имели степень 1 H. pylori , а оставшиеся два имели степень 2 H. pylori . Ни одна из биопсий с колонизацией 3 степени не дала ложноотрицательного результата URUT.

    БИОПСИИ ИЗ ТЕЛА ЖЕЛУДКА

    Обе биопсии были положительными на H pylori у 470 пациентов. Один из двух был положительным у 63 и обе биопсии были отрицательными у оставшихся 467 пациентов. Распространенность H pylori в корпусе составила 53.3%. Мазки отпечатков были ложноотрицательными в двух биопсиях от двух пациентов. Обе биопсии показали наличие H. pylori степени 1 . Ни один из мазков отпечатков не дал ложноположительных результатов.

    Из 1003 биопсий, показывающих H pylori , 832 (83%) были положительными при URUT. URUT был положительным в 776 (82,5%) из 940 биопсий у 470 пациентов, у которых обе биопсии показали H. pylori , и в 56 (44%) из 126 биопсий у 63 пациентов, у которых только одна из двух биопсий показала H. pylori .Ни одна из биопсий, которые не показали H pylori при гистологическом исследовании, не показала положительного результата при URUT. Чувствительность, специфичность, положительная и отрицательная прогностическая ценность и общая диагностическая точность URUT для диагностики инфекции H pylori в теле желудка составляли 83, 100%, 100%, 85% и 91% соответственно. Из 171 ложноотрицательного URUT 168 имели степень 1 H. pylori , а остальные три имели степень 2 H. pylori . Ни одна из биопсий с колонизацией 3 степени не дала ложноотрицательного результата URUT.

    Обсуждение

    Для сравнения тестов на основе биопсии в большинстве исследований использовались разные наборы биопсий желудка для сравнения различных тестов. В более раннем исследовании, сравнивавшем тест CLO, мазки-отпечатки и гистологию, мы также использовали разные наборы биопсий для теста CLO и разные наборы для импринта и гистологии.7 В другом недавнем исследовании разные наборы биопсий желудка использовались для локального сравнения выполнили БУТ с помощью гистологии.5 Это могло привести к ошибочным результатам, поскольку хорошо известно, что распределение H. pylori носит пятнистый характер.8-10 Чтобы избежать этой путаницы, мы спланировали настоящее исследование таким образом, чтобы один и тот же образец биопсии был изучен с помощью URUT, импринт-цитологии и гистологии, что дало идеальное сравнение.

    Результаты этого исследования показывают, что URUT является полезным тестом для обнаружения H. pylori с высокой чувствительностью и 100% специфичностью, особенно в отношении присутствия H. pylori в антральном отделе желудка. Эти наблюдения аналогичны тем, что были сделаны первоначальными исследователями3 и отмечены в другом недавнем исследовании, в котором использовалась слегка модифицированная версия теста.5 Чувствительность теста еще больше улучшилась бы, если бы мы считывали URUT в течение более длительного периода времени, но это также могло привести к некоторым ложноположительным результатам. Кроме того, дизайн нашего исследования (изготовление слепков с одного и того же биоптата) не позволял считывать результаты УРТУ в течение более длительного времени. Преимущество одноминутного URUT заключается в том, что результат доступен еще до того, как пациент покинет кабинет эндоскопии. Таким образом, клиницист может спланировать соответствующую терапию почти сразу, и пациент избавлен от повторного визита в больницу для лечения.

    Хотя это не оценивалось в этом исследовании, хорошо известно, что уреазный тест заметно снижает чувствительность при обнаружении H. pylori у пациентов, получающих препараты, направленные на эрадикацию микроорганизма. 5 В более раннем исследовании мы отметили чувствительность CLO-тест составляет всего 9% у пациентов, получавших анти- H. pylori лечение.7

    Распространенность H. pylori в нашей группе пациентов, перенесших эндоскопию верхних отделов желудочно-кишечного тракта, оказалась очень высокой.Тем не менее, это тенденция в развивающихся странах, где инфекция наблюдается почти у всех людей среднего возраста.11 В более ранних исследованиях мы наблюдали распространенность 78% в группе из 90 здоровых добровольцев, принадлежащих к среднему классу.12 Распространенность у пациентов, перенесших эндоскопию верхних отделов желудочно-кишечного тракта, была отмечена у 90%.7

    В этом исследовании было отмечено, что цитология импринта почти так же чувствительна и специфична, как и гистология при обнаружении H pylori . Это похоже на более ранние наблюдения, сделанные несколькими исследователями, в том числе и нами.7 13-14 Ранее мы показали, что тщательная подготовка мазков-отпечатков не оказывает неблагоприятного влияния на качество биопсийного материала, и его можно использовать для гистологии.15

    Принимая во внимание высокую чувствительность, низкую стоимость и простоту URUT, мы рекомендуем его в ситуациях, когда пациенту необходимо пройти эндоскопию и необходимо исследовать статус H pylori . Поскольку биопсии уже получены, исследование мазков отпечатков тканей может привести к дальнейшему улучшению чувствительности УРПО.Результат мазка-отпечатка также может быть получен довольно быстро.6 Однако гистологическое исследование биопсийного материала также может быть выполнено, если требуется понимание других гистологических деталей.

    Медицинская годовщина

    Жорж Фернан Видаль, 9 марта 1862 г.

    Жорж Фернан Видаль (1862–1929) родился в Алжире в семье врача, служившего военным медицинским инспектором. Он изучал медицину в Париже, стал профессором патологии и в конце концов был назначен на кафедру клинической медицины в больнице Кочин; это обучение сделало его готовым связующим звеном между больничной палатой и клинической лабораторией.Его статья о серодиагностике брюшного тифа появилась в Lancet , 1896; 2 :1371–2. Он также внес значительный вклад в лечение гемолитической анемии, пароксизмальной холодовой гемоглобинурии, анафилаксии и крапивницы. — Д. Г. Джеймс

    Европейский журнал гастроэнтерологии и гепатологии

    Фон 

    Экспресс-тест на уреазу является наиболее широко используемой стандартной процедурой для выявления инфекции Helicobacter pylori .Это потому, что это простой, надежный и недорогой тест, который быстро дает результаты.

    Цель

    Целью настоящего исследования была оценка модифицированного быстрого уреазного теста (HUT-теста) в сравнении со стандартным CLO-тестом. Кроме того, возник вопрос, повысит ли чувствительность теста выполнение быстрого уреазного теста в двух образцах биопсии из антрального отдела и тела желудка.

    Методы

    Было исследовано сто пятнадцать последовательных пациентов, перенесших эзофагогастродуоденоскопию.Диагноз инфекции H. pylori был основан на гистологическом исследовании образцов биопсии из антрального отдела и тела желудка. HUT-тест был выполнен в двух образцах биопсии из антрального отдела и тела соответственно, а CLO-тест в одном образце антральной биопсии. Время до получения положительного результата и стабильность набора HUT-test при различных температурах хранения были предварительно оптимизированы путем адаптации типа и концентрации буфера и индикаторов.

    Результаты 

    У шестидесяти пациентов (52%) была диагностирована инфекция H.пилори . Чувствительность быстрых уреазных тестов в биоптатах из антрального отдела желудка составила 90 % для HUT-теста и 88 % для CLO-теста при специфичности 100 % для обоих тестов. Объединение биопсий из антрального отдела и тела желудка повысило диагностическую чувствительность HUT-теста до 93%, но снизило специфичность до 98%. У пациентов с инфекцией H. pylori HUT-тест давал положительные результаты быстрее, чем CLO-тест (104±21 мин по сравнению с 195±49 мин соответственно, P<0.02).

    Заключение 

    Применение HUT-теста к простой биопсии из антрального отдела желудка может установить диагноз инфекции H. pylori с высокой точностью, аналогичной стандартному CLO-тесту. По сравнению с CLO-тестом HUT-тест имеет значительно более быстрое время реакции, что является очевидным клиническим преимуществом. Дополнительная биопсия из дистального отдела тела желудка не увеличивает диагностическую эффективность у нелеченых пациентов, но может потребоваться в определенных обстоятельствах, например, после лечения.

    Уреазный тест: цель, принцип, процедура и результат

    Цель

    •  , чтобы проверить, может ли организм вырабатывать фермент уреазу для расщепления мочевины.

    Принцип уреазного теста:

    Мочевина является распространенным метаболическим отходом переваривания белка у большинства позвоночных, который токсичен для большинства живых организмов. Уреаза катализирует расщепление мочевины на аммиак и углекислый газ. Тест-организм культивируют в среде, содержащей мочевину и индикатор феноловый красный.Если бактериальный штамм продуцирует уреазу, фермент будет гидролизовать мочевину с образованием аммиака и углекислого газа. При выделении аммиака среда становится щелочной, о чем свидетельствует изменение цвета индикатора на красновато-розовый.

    Мочевина + h3O———– фермент уреаза———> Аммиак + CO2

    Этот тест проводится для определения способности определенного микроорганизма вырабатывать фермент уреазу. Это один из полезных диагностических методов для идентификации бактерий, особенно Proteus , от других грамотрицательных бактерий.

    Основной принцип этого теста заключается в проверке изменения цвета индикатора фенолового красного, используемого в среде, вызванного разложением мочевины и образованием основного продукта, т.е. Nh4. Изменение цвета среды с оранжевого на розово-красный из-за повышения рН свидетельствует о положительном тесте, а неизменный цвет среды — об отрицательном тесте.

    Требования

    • Бульон Кристенсена с мочевиной или среда MIU (индолмочевина для смертности от смертности)
    • Бактериальная культура; Протей и Е.кишечная палочка

    Методика уреазного теста:

    1. Приготовьте бульон мочевины, растворив 2,95 г порошка мочевины в 150 мл дистиллированной воды. Добавьте мочевину после автоклавирования среды, чтобы предотвратить первоначальный распад мочевины.
    2. Асептически инокулируйте данный образец организма с помощью проволочной петли.
    3. Инкубируйте пробирки при 37°C в течение 24 часов.
    4. Посмотреть результат

    Результат:

    Уреазный тест Положительный: Красно-розовый цвет ( Proteus vulgaris)

    Уреазный тест Отрицательный: Нет розового окрашивания ( E.кишечная палочка )

    Бактерии-продуценты уреазы:

    • Протеус вид
    • Клебсиелла вид
    • Морганелла вид
    • Провиденция вид
    • Serratia spp.
    • Staphylococcus saprophyticus
    • Bacillus spp.
    • Микоплазма
    • Уреаплазма уреалитикум
    • Нокардия
    • Corynebacterium urealyticum
    • Helicobacter pylori

    Уреазный тест: цель, принцип, процедура и результат

    Ограничения уреазного теста в диагностике инфекции Helicobacter pylori у детей

    Авторские права © Автор(ы), 2015. Опубликовано Baishideng Publishing Group Inc. Все права защищены.

    Ограничения уреазного теста в диагностике инфекции Helicobacter pylori у детей

    Джи Хён Со, Джи Сук Пак, Кван Хо Ри, Хи Шан Ён

    Ji-Hyun Seo, Ji Sook Park, Hee-Shang Youn, Отделение педиатрии, Национальный институт медицинских наук Кёнсан, Медицинский факультет Национального университета Кёнсан, Чинджу 52727, Южная Корея

    Кван Хо Ри, Отделение Микробиология, Национальный институт медицинских наук Кёнсан, Медицинский факультет Национального университета Кёнсан, Чинджу 52727, Южная Корея

    Номер ORCID: $[AuthorORCIDs]

    Вклад автора : Seo JH написал статью; Seo JH, Park JS, Rhee KH и Youn HS разработали и рассмотрели документ; Rhee KH и Youn HS провели несколько исследований, которые легли в основу этой статьи.

    Заявление о конфликте интересов : Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов в этой статье.

    Открытый доступ : Эта статья находится в открытом доступе, она была выбрана штатным редактором и полностью проверена внешними рецензентами. Он распространяется в соответствии с некоммерческой лицензией Creative Commons Attribution (CC BY-NC 4.0), которая позволяет другим распространять, микшировать, адаптировать, использовать эту работу в некоммерческих целях и лицензировать свои производные работы на других условиях при условии, что оригинальная работа правильно цитируется и используется в некоммерческих целях.См.: http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

    Корреспонденция на номер : Хи-Шан Юн, доктор медицинских наук, кафедра педиатрии, Национальный институт медицинских наук Кёнсан, Школа национального университета Кёнсан. Medicine, 15, Jinju-daero 816beon-gil, Jinju 52727, Южная Корея. [email protected]

    Телефон : +82-55-7508158 Факс: +82-55-7529339

    Поступило: Поступило: апреля 2015 г.
    Peer-Review началось : 21 апреля 2015 г.
    Первое решение : 5 августа 2015
    Пересмотрено: 1 сентября 2015 г.
    г. принято: Статья в прессе : 16 сентября 2015 г.
    Опубликовано онлайн: 8 ноября 2015 г.


    ВВЕДЕНИЕ

    Helicobacter pylori ( H.pylori ) является основным возбудителем острого и хронического гастрита, язвенной болезни и рака желудка [1,2]. Хотя первичная инфекция H. pylori происходит в раннем детстве, большинство взрослых в конечном итоге становятся носителями H. pylori в развивающихся странах [3,4]. У детей боль в животе является наиболее частым симптомом инфекции H. pylori [5]. Вопрос о том, следует ли лечить детей, инфицированных H. pylori , с рецидивирующей болью в животе, не был достигнут консенсуса [6].Тем не менее, положительный семейный анамнез рака желудка является одним из факторов риска рака желудка во взрослом возрасте у детей с инфекцией H. pylori [7]. Таким образом, необходим надежный диагностический тест для выявления инфекции H. pylori у детей. Наиболее надежным методом диагностики инфекции H. pylori у детей является эндоскопия с биопсией желудка [8].

    Диагноз инфекции H. pylori обычно основывается на данных гистологического исследования и результатах уреазного теста[9].Гистология играет важную роль в обнаружении H. pylori , а также указывает на степень хронического и активного воспаления в желудке [10]. Уреазный тест известен как простой и дешевый метод, не требующий специальных навыков для выполнения или чтения результата. В уреазном тесте используется феноловый красный, цвет которого меняется с желтого на розовый или красный по мере увеличения рН. H. pylori может оставаться живым в желудке человека и активировать собственную цитоплазматическую уреазу, превращая мочевину в углекислый газ и аммиак и повышая рН окружающей среды[11].Тесты на уреазу с буфером требуют не менее 10 5 организмов, чтобы получить положительный результат[12]. Поэтому уреазный тест может быть отрицательным, если биоптаты, в которых гистология выявляет только одну или две бактерии на всем срезе[13]. Время, необходимое для того, чтобы тест показал положительный результат, зависит от концентрации бактерий [14], а точность уреазного теста в первую очередь зависит от плотности H. pylori в образце желудка. Как правило, плотность H. pylori у детей ниже, чем у подростков и взрослых [15].Время положительного результата уреазного теста зависит от концентрации бактерий и температуры. Большинство имеющихся в продаже уреазных тестов становятся положительными в течение 2-3 часов, но лучше оставить те, которые кажутся отрицательными, в течение 24 часов независимо от возраста [14]. Активность фермента уреазы H. pylori при постановке диагноза также влияет на уреазный тест. Подавление кислоты ингибитором протонной помпы является хорошо известной причиной ложноотрицательного результата уреазного теста [14].

    Однако в настоящее время ведутся споры о чувствительности уреазного теста у детей без учета активности фермента уреазы.Обзор литературы о диагностических тестах H. pylori у детей в период с 1999 по 2009 г. показал, что быстрые уреазные тесты обладают большей чувствительностью, чем гистология, для выявления появления H. pylori [16]. У 1590 детей с 1989 по 2009 г. уреазные тесты имели более низкую чувствительность (83,4%) и сопоставимую специфичность (99,0%) с гистологией [17]. Причина такой более низкой чувствительности у детей не была установлена, но она может быть связана с низкой плотностью и пятнистым распределением бактерий [15,18].В этом обзоре мы обсуждаем ограничения уреазного теста у детей на основе литературных данных о педиатрических пациентах.

    ВОЗРАСТ ДЕТЕЙ

    Возраст является еще одним фактором, влияющим на чувствительность уреазного теста[17,19,20]. Возрастные диапазоны детей в различных исследованиях были широкими и варьировались от ≤ 15 до ≤ 18 лет [5-8]. У детей сообщалось о низкой плотности 90 201 H. pylori 90 202 [15, 21], что может быть связано с ошибками выборки, такими как очень низкое количество 90 201 H.pylori в образцах тканей или очаговое распределение организма в слизистой оболочке желудка [22]. Среди 530 детей, инфицированных H. pylori , уреазный тест был положительным у 442, а частота уреазных тестов была положительно связана с детьми в возрасте 5 лет и старше по сравнению с детьми младше 5 лет [17]. Частота ложноотрицательных результатов уреазного теста у этих детей составила 16,6%, в основном у детей младше 5 лет [17]. В наших предыдущих исследованиях мы разделили педиатрических пациентов на три возрастные группы: 0-4 года, 5-9 лет и 10-15 лет [19,20].Уровень положительных результатов уреазного теста увеличивался с каждой возрастной группой, с самым низким показателем в группе 0–4 лет и самым высоким в группе 10–15 лет (рис. 1) [20]. Затем мы сравнили моменты времени, в которые дала положительная реакция, разделив их на 0-1 час, 1-6 часов, 6-24 часа и 24-48 часов. Это рассматривалось в каждой из 4 возрастных групп: 0-4 года, 5-9 лет, 10-14 лет и 20-29 лет[20]. Положительные результаты наступали в течение 1 ч в старших возрастных группах 10-15 лет и 20-29 лет.И наоборот, самые положительные результаты были получены через 6-24 часа в группе 0-4 лет с использованием образцов биопсии тела (рис. 1) [20]. Этот результат свидетельствует о том, что низкая степень колонизации H. pylori в образцах биопсии желудка может быть более частой у детей в возрасте до 5 лет.

    Рис. 1 Коэффициент положительных результатов и время положительного результата уреазного теста как в антральном отделе, так и в теле в зависимости от возраста. Частота положительных результатов уреазного теста в антральном отделе была выше в группе 20-29 лет, чем в других трех возрастных группах, а уровень положительных результатов уреазного теста в организме уменьшался с возрастом ( P < 0.0001). Самое высокое время положительного результата было в течение 1 часа в группе 20-29 лет и в пределах 6-24 часов у детей ( P < 0,0001) [20].

    ГИСТОПАТОЛОГИЧЕСКАЯ СТЕПЕНЬ И ПОЛОЖИТЕЛЬНОСТЬ УРЕАЗНОГО ТЕСТА

    Инфекция H. pylori вызывает хроническое воспаление слизистой оболочки желудка. Гистологию считают золотым компасом для обнаружения 90 201 H. pylori 90 202 [9], поскольку она может обнаруживать бактерии, а также тяжесть воспаления. Однако, как и для положительного уреазного теста, требуется примерно 10 5 H.pylori в образце биопсии [12], гистопатологические результаты ограничены распределением и плотностью бактерий в образце. Следовательно, пятнистое распределение и низкая плотность H. pylori в слизистой оболочке желудка у детей могут быть связаны с отсутствием бактерий в некоторых гистопатологических данных. Тем не менее положительный уреазный тест сильно коррелирует с плотностью бактерий, тяжестью хронического гастрита и наличием активного гастрита, что определяется гистопатологией [15,17].

    Когда при гистологическом исследовании обнаруживаются тяжелые степени хронического и активного гастрита или инфильтрация H. pylori , уреазные тесты обнаруживают быстрое изменение цвета, что указывает на положительные результаты в образцах из антрального отдела и тела желудка, независимо от возраста, по сравнению с с более мягкими гистопатологическими классами [20]. У 38 детей в возрасте от 2 до 18 лет точность экспресс-теста с уреазой составила 95% для образцов, признанных положительными при гистологическом исследовании [23]. Точность уреазного теста до плотности Н.pylori в образце желудка. Однако плотность H. pylori в целом ниже у детей, чем у подростков и взрослых [15]. Таким образом, для диагностики инфекции H. pylori у детей следует проводить как гистологию, так и уреазный тест.

    ВЛИЯНИЕ КОЛИЧЕСТВА БИОПСИЙ ЖЕЛУДКА

    Два или более количества биопсий желудка повышают чувствительность и экономят время для получения положительного результата при диагностике уреазного теста[19,24]. Было проведено несколько исследований, сравнивающих уровень положительных результатов уреазного теста в соответствии с диагнозом по количеству биопсий (Таблица 1): три исследования для взрослых и одно исследование для детей.У детей частота положительных результатов уреазного теста была выше в трех образцах биопсии, чем в одном образце биопсии у одного и того же ребенка [19]. Расхождение между показателями положительности уреазного теста с использованием одного против трех образцов биопсии было повышено у детей в возрасте до 5 лет [21]. Таким образом, когда уреазный тест проводится на трех или более образцах биопсии, возможно, это более точный диагностический метод.

    Таблица 1 Исследования частоты положительных результатов уреазного теста по сравнению с местами биопсии и номерами биопсий.
    Услуга Цена
    Виконання уреазного експрес-тесту на хелікобактер під час ВГДС 100 грн
    Быстрый уреазный тест (CLO-тест) на хеликобактер (Helicobacter pylori) в биоптате слизистой желудка 130 грн
    Быстрый уреазный тест (CLO-тест) на хеликобактер (Helicobacter pylori) в биоптате слизистой желудка 130 грн
    Швидкий уреазний тест (CLO-тест) на хелікобактер (Helicobacter pylori) в біоптаті слизової шлунка 150 грн
    Биопсийный уреазный тест на хеликобактер 260 грн
    Дихальний тест на Хелікобактер пілорі 380 грн
    Швидкий тест на Helicobacter Pillory (ПРИ ЕНДОСКОПІЇ) 400 грн
    Экспресс тест для определения антител Хеликобактер Пилори (фекалии) 480 грн
    Диагностика паразитология 500 грн
    Арт. Опубликованный год № Темы № Темы Средний возраст (YR) Сравнение Позитивность Уровень испытаний урегулирования (%)
    Siddique
    Siddique et al [24] 2008 100 взрослых 36,1 Один биопсии 52
    Два биопсии 68
    Три биопсий 76
    Четыре биопсий 96
    Seo et al [19] 2014 255 детей Нет данных Одна биопсия 32.2
    Три биопсий 40,1
    Moon и др [25] 2012 214 взрослых 53,6 Антрум 58,9
    тела 62,1
    Antrum + Body 69.2
    LAN et al [26] 2012 164 взрослых Na 83.3 83.3
    100

    У взрослых частота положительных результатов уреазного теста также увеличивалась при использовании от двух до четырех образцов биопсии, чем при использовании одного образца биопсии [24].Частота несоответствия одного и двух или более образцов биопсии была выше у взрослых (10,3%, 16,7% и 16%), чем у детей (7,9%) (таблица 1) [19,24-26]. У взрослых время для положительного уреазного теста было в среднем быстрее при объединенном тесте (1,69 ч для антрального отдела и тела), чем при раздельном тесте (3,58 ч для тела или антрального отдела) [25]. У детей сообщается о низкой степени колонизации H. pylori и более пятнистом распределении H. pylori [21]. Таким образом, когда уреазный тест проводится на трех или более образцах биопсии, он может быть более точным диагностическим методом.

    ВЛИЯНИЕ МЕСТА БИОПСИИ НА РЕЗУЛЬТАТЫ УРЕАЗНОГО ТЕСТА

    У большинства пациентов были взяты биоптаты из антрального отдела желудка, так как одна биопсия из угла желудка для уреазного теста имела максимальную вероятность выявления инфекции H. pylori [27]. Использование дополнительной биопсии из тела желудка может улучшить частоту обнаружения H. pylori (таблица 1) [20,25,26]. В нашем предыдущем исследовании [20] расхождение результатов уреазного теста между антральным отделом и телом у детей было больше, чем у взрослых, и наибольшая разница была обнаружена в образцах, которые показали положительное изменение цвета на поздних этапах тестирования, от 6 лет. -24 ч (рис. 1).В нашем исследовании не наблюдалось разницы между скоростью положительной реакции в образцах из антрального отдела и из тела у взрослых [20]. Но время положительного теста составило в среднем 3,58 ч для отдельного теста и 1,69 ч для объединенного теста[25]. Степень колонизации была значительно ниже в теле по сравнению с антральным отделом [21]. В нашем предыдущем исследовании гистопатологические данные антрального отдела и тела выявили одинаковую степень хронического и активного гастрита и бактериальную инфильтрацию у детей, частота положительных результатов уреазного теста была выше в образцах из тела, чем из антрального отдела [20].Этот результат был аналогичен исследованию взрослых корейцев, где уровень положительных результатов уреазного теста в организме был выше, чем в антральном отделе (таблица 1) [25]. У взрослых чувствительность уреазного теста снижалась по мере увеличения степени гастрита с атрофией от 100% в норме, 97% при легкой, 91% при средней до 66% при тяжелой [26]. Однако дополнительная биопсия тела желудка привела к повышению чувствительности до 16,67% по сравнению с биопсией одного антрального отдела (таблица 1) [26]. Это также может быть связано с неравномерным распространением H.pylori и низкой плотностью микроорганизма в организме. Продолжаются споры об оптимальном месте и количестве биопсий желудка для диагностики H. pylori .

    ЗАКЛЮЧЕНИЕ

    Ранняя диагностика инфекции H. pylori имеет решающее значение для симптоматических детей с семейным анамнезом рака желудка. У детей эндоскопическое исследование и биопсия для гистологического исследования и уреазного теста по-прежнему являются наиболее надежным методом диагностики инфекции H. pylori .Разница в частоте положительных результатов уреазного теста между использованием одного или трех образцов биопсии или использованием образцов биопсии из антрального отдела или тела была больше у детей в возрасте 0-5 лет, чем у детей 5-15 лет. Использование трех или более образцов биопсии из антрального отдела и тела повысит чувствительность обнаружения H. pylori у детей.

    P- Рецензент: Classen CF S- Редактор: Qiu S L- Редактор: A E- Редактор: Jiao XK

    .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.