Hafnia (бактерии) — Hafnia (bacterium)
Hafnia является родом из грамотрицательных , факультативно анаэробных , палочковидных бактерий в семье Enterobacteriaceae .
H. alvei является синантропных человеческого желудочно — кишечного тракта и , как правило , не патогенны , но может вызвать заболевание у иммунодефицитом пациентов. Это часто устойчиво ко многим антибиотикам, в том числе аминопенициллинов .
Название происходит от гафния , от латинского названия Копенгагена .
Hafnia alvei используется в качестве молочной закваски в молочной промышленности и в последнее время в качестве пробиотики , включенной в качестве пищевой добавки продукта.
история
Рода Hafnia является одним из более чем 40 родов , которые в настоящее время составляют Enterobacteriaceae семьи.
Хотя Меллер первоначально описал этот род в 1954 году, законность этой группы постоянно ставится под сомнение в течение следующих двух десятилетий, часто упоминаются синонимами , такие как «
В 1977 году исследование показало , что в конце камамбер производства Hafnia alvei остается доминирующим видом. Hafnia alvei является психротропным штаммом, который может развиваться при низких температурах, а это означает , что она не прекращает расти во время фазы хранения сыра в отличии от кишечной палочки .
В 1983 году , Enterobacteriaceae , были обнаружены в Свежедобытый камамбер: 51% идентифицированного Enterobacteriaceae были Hafnia alvei штаммов по сравнению с только 9% кишечной палочки . Эти авторы также показали , что Hafnia alvei выросла до высокой концентрации в сыром (до 10 7 КОЕ / г), как в сыром молоке и пастеризованного молока сыры.
Несколько лет спустя, в 1987 году , Hafnia alvei был идентифицирован испанской командой в молоке сырьевых маток , представляющий 6,5% от общего числа энтеробактерий присутствующих видов.
В 2014 году совместное исследование работы над созревания сыра, с участием французского Inra и итальянский университет, идентифицированный H. alvei в сыром молоке , используемого для изготовления традиционной качокавалло Пуглиезе сыр.
Hafnia alvei также присутствует в ферментированных , кроме молочных продуктов , продуктов питания, было установлено , на протяжении многих лет в традиционных блюдах по всей планете.
В 1987 году американские ученые , изучающие Brassicaceae нашли гафния alvei , анализируя микрофлору свежих заготовленной коллард, они считали , что Hafnia alvei происходит от загрязнения почвы , но не обязательно в качестве возбудителя.
В 2014 году Hafnia alvei был идентифицирован в Aakhone, традиционной Северной индийской еды из ферментированной сои.
Hafnia также был идентифицирован в ферментированных семенах кофе в Эфиопии и Огайо, США. Американские исследователи изучили микробиом семян кофе и определили гафний alvei среди многочисленных других штаммов и видов, в то числе 13 видов Enterobacteriales . Это исследование показало , что богатство микробиома семян было связанно с процессом брожения и качеством кофе. Богатое семейство бактерий было идентифицированы Enterobacteriales , содержащее HAFNIA alvei. Эта семья часто встречаются во влажных и богатых питательных веществах сред , аналогичных условия обработки кофе. Таким образом, они могут играть важную роль в процессе ферментации.
Hafnia alvei также был определен в коммерческих кимчах , традиционная корейская еда сделаны с азиатской капустой, редьками, специей и солеными ферментированными морепродуктами. Ученые предполагают , что источник гафния в этом случае является ферментированными из морепродуктов.
В 2004 годе мексиканские ученые выделяли гафний alvei (среди других бактерий , такие как Lactobacillus ацидофилин или Plantarum ) из пульки традиционного напитка , приготовленный из ферментированной агавы (также известная как агавы ).
И , наконец, Hafnia alvei также был выделен из мясных продуктов, в частности , охлажденных говядину из — за присутствие Hafnia alvei на убойном крупном рогатом скоте. Он может быть найден рядом с E. Coli в чоризо , популярный полусухого ферментированный испанской колбасы. Кисломолочные колбасы , сделанные в Испании были также зарегистрированы , чтобы содержать Hafnia alvei штамм, ответственный за производство гистамина , что имеет решающее значение для созревания процесса.
комменсальный штамм
список Большинство стандартных текстов микробиологические млекопитающих, птиц, рептилий, фи ш, почва, вода, сточные воды, и продукты, как источники, из которых hafniae могут быть восстановлены.
Желудочно — кишечный тракт животных, в частности млекопитающих, по- видимому, является очень распространенной экологической средой обитания для hafniae . Paleomicrobiology исследование имеет отождествлен H. alvei , происходящий из кишечника образцов массовых и осадки , собранных от 12 000-летнего мастодонта остается в Мичигане и Огайо. В исследовании 642 австралийских млекопитающих, Гордон и Фицгиббон обнаружили , что Х. alvei был третьи наиболее распространенными кишечны виды отождествлен после кишечной палочки и E. клоаки . Изоляции H. alvei был значимо связан с восстановлением из сумчатых хищников и мюридом грызунов.
Hafniae также был восстановлен спорадический из образцов навоза вьючных животных , собранных из национальных парков трасс и с 7% от гризли и черного медведь испытанных образцов.
Среди видов птиц, H. alvei был часто изолирован от хищных птиц, в том числе соколов, сов и индеек грифов; даже высотные альпийские accentors , которые практически не имеют контакта с людьми , которые были Hafnia изолированы от них, на частотах в диапазоне от 3% до 16%.
Другие источники H. alvei включают рептилий (змей и сцинков), беспозвоночных, насекомых, фи ш и летучих мышей.
Роль H. alvei в созревании сыра
Согласно нескольким публикациям, Hafnia alvei присутствует в качестве доминирующих видов при созревании сырого сыра молока.
Hafnia alvei является психротропной бактерией, она берет свое начало в сыром молоке и продолжает расти в сырах , такие как камамбер . Умножение является ключевым фактором в процессе брожения и созревания сыра.
С 1979 годом исследование французского сыра привело к выявлению корреляций между Hafnia alvei ростом и химическими параметрами в процессе изготовления сыра. Некоторые исследователи подсчитали , что уровень H. alvei достигает 10 7 КОЕ / г в конце процесса созревания и показал , что его кривая роста тесно связана с увеличением рН. Точно так же, Мунье и
Обширное исследование традиционных сыров , которые были потреблены в течение многих лет выделить наличие Hafnia alvei в молочных продуктов на протяжении более тридцати лет.
В заключение , обильные уровни Hafnia alvei могут быть найдены в сыром сыром молоке и он играет большую роль в сыром ароматизации из — за его влияния на кислотность и способность производить свободные аминокислоты.
Hafnia либо преднамеренно добавляют во время процесса сыроделия или она уже присутствует в качестве составной части молока микрофлоры. Это способствует процессу брожения и созревания сыров. Метаболические исследования показали , что H. alvei имеет решающее значение для процесса созревания и развития типичного сыра аромата.
Из — за этих свойств , влияющих на кислотность и вкус, Х. alvei был использован в производстве нескольких сыров, таких как чеддер, Гауда и камамбер, а также в Livarot и другие сыра сырое молоко. H. alvei также продается в ЕС в качестве созревания культуры для камамбер с сильным ароматом (аромат-Prox® AF 036, представленной Bioprox SAS, Франция) или в смеси микроорганизмов для мягкого сыра вкуса (Сырные культуры Choozit ™ ARO 21 -HA LYO 10 D, обеспечивается Danisco Дания ).
2013 исследование модельной экосистемы сыра выделена роль Hafnia alvei в ингибировании роста кишечной палочки штамма O26: h21 без изменения рН или концентрации молочной кислоты . Hafnia alvei сделал производить небольшое количество биогенных аминов , такие как путресцин и кадаверин , но это не влияет на общий уровень летучих ароматических соединений.
Интерес к гафния alvei в рулоне в изготовлении сыра увеличивается. В 2007 году, ANR проект (французский Национальное агентство исследований) (Грамм) оценивают преимущества и риски
рост культуры
Hafnia растет в среде , содержащей 2% до 5% NaCl, в диапазоне рН от 4,9 до 8,25, и температурные градиенты от 4 ° C до 44 ° C; оптимальная температура для роста Сообщалось , как 35 ° C.
Существует общее согласие, что почти 100% штаммов HAFNIA растут на МакКонки, Hektoen энтеросолюбильной, эозином, метиленовый синий, и ксилоза-лизин-дезоксихолата агары, все из которых являются дифференциальные умеренно селективных средах.
На дополнительной ингибиторной селективной среде, от 25% до 60% штаммов не растут на Salmonella-Shigella (СС) агар, в то время как 75% до 100% изолятов ингибируется на зеленой блестящей среде. Классические штаммы H. alvei являются лактозой и сахарозой отрицательно и как таковые появляются как неферментирующие колонии на кишечно изоляции сред.
На умеренно селективных агаров, они обычно появляются как большие, гладкие, выпуклые, полупрозрачные колонии 2-х до 3 мм в диаметре с целой кромкой; некоторые из них могут проявлять неправильную границу.
Биология
Липополисахариды
Иммунохимия из гафния липополисахаридов (LPS) чрезвычайно сложны. Весь Х. alvei LPS , по- видимому, содержит глюкозу, глюкозамин, гептозы и 3-deoxyoctulosonic кислоты. Некоторый ЛПС также содержит другие аминокислоты сахара или углеводы , такие как манноз, галактозу, галактозамин и маннозамин. Ядро олигосахарид структура некоторых штаммов состоит из одинаковой структуры гексасахарида , состоящая из двух остатков D-глюкозы, три LD-гептозов остатков и одного остатка 3-deoxyoctulosonic кислоты. Существует обширная серологические и иммунологические разнообразие в этом роде, и активное исследование продолжается в этой области.
биотипов
В 1969 году Барб описал два биотипов H. alvei , основанных на ферментации D-арабинозы и салицином и эскулин и арбутин гидролиза. Одна из проблем , с которой сталкиваются микробиологи пытаются разработать биохимические тесты , которые могут легко отличить большинство штаммов группы ДНК 1 (
Патогенность и чувствительность к антибиотикам
Существует ограниченная информация о патогенности Hafnia alvei. Хотя этот возбудитель был восстановлен в больших количествах из фекалий, суставной жидкости, крови, мочи и были отрицательными культуры; роль hafniae в этой болезни является дискуссионной (от супа до орехов) .
Это, вероятно , из — за низкую частоту встречаемости этого вида в человеческих болезнях , а также тот факт , что не существует никаких четких огранки синдромов болезни конкретно связан с H. alvei . Текущая информация о гафния патогенности можно рассматривать с двух точек зрения; вирулентные факторы потенциально оперативные в дополнительных кишечных инфекциях и те ограничивались в основном intestin. В исследовании отмечается , что мыши вводили внутрибрюшинно hafniae не поддаться инфекции.
H. alvei является редким патогеном человека , несмотря на повышенное внимание со стороны медицинского сообщества за последнее десятилетие из — за его возможной связи с гастроэнтеритом.
Есть нет хорошо описанные вспышек заболеваний , вызванных H. alvei , в которых эпидемиологические, клинические и лабораторных корреляты в подавляющем большинстве случаев в поддержке несомненной роли hafniae в этих болезнях.
В исследовании 17 Hafnia alvei ( « Enterobacter гафния е») изолятов извлечены с помощью клинике Mayo с 1968 по 1970, только 5 изоляты (29%) были признаны клинически значимы. Во всех пяти из этих случаев , Х. alvei был определен как вторичный возбудитель (респираторный: 2; абсцесс: 3). В целом, средний возраст пациентов , инфицированных или колонизацию H. alvei был 52,9 лет, с / женщиной соотношением мужчин 1: 1,1. Чуть более 50% всех изолятов были получены с помощью госпитальной маршрута, включая все пять связанных с инфекцией. Только в двух случаях был Х. alvei восстановлен в чистой культуре, и ни в одном случае был штамм клинически значимы.
Интересно отметить , что ATCC считает , что все Hafnia alvei штаммы относятся только к уровню биологической безопасности 1. Кроме того, Ричард определил наличие 10 8 жизнеспособных клеток на грамм сыра, который предполагает ежедневное потребление более 10 9 бактерий в сутки (расчет на основе 30 г порции) , указывающее на хороший профиль безопасности Hafnia alvei в ежедневном потреблении.
Безопасность Hafnia alvei у иммунокомпетентных пациентов выглядит очень ясно и была продемонстрирована в течение более 4 -х лет до сих пор.
Фото и др. описывает исследование , в котором 76 Х. alvei изоляты были исследованы на их чувствительность к 69 антибиотикам или наркотиков. Общий характер , который вытекает из этого исследования состоит в том , что , как правило , hafniae восприимчивы к карбапенемов, монобактамы, хлорамфеникол, хинолоны, аминогликозиды и антифолаты (например, триметоприм-сульфаметоксазол) и устойчивые к пенициллину, оксациллин, амоксициллин и клавулановая кислота плюс. Восприимчивость к тетрациклинам и цефалоспоринов является переменной.
Испанский исследование, с участием кишечных патогенов также обнаружили , что 32 штаммов H. alvei были универсально восприимчивы ко всем хинолонов (включая Gemi фл oxacin и grepa фл oxacin), цефотаксим, гентамицин, ко-тримоксазол и naladixic кислоты; 78% штаммов в этом исследовании , были восприимчивы к доксициклина. Некоторые Х. alvei штаммы продуцируют оба низкого уровень индуцируемых cephalosporinases (цефтазидят восприимчивый) и конститутивную активность цефалоспориназы высокого уровня , который устойчив к цефтазидите.
Польза здоровью
Hafnia производит белка , называемых казеинолитической Протеаза В (ClpB) , который , как был показан , чтобы быть миметиком гормона альфа-MSH , который вовлечен в сытости.
Некоторые энтеробактерии бактерии, такие как Hafnia alvei было показано , что, естественно , регулировать аппетит.
TargEDys , французская компания, разработала технологию, ProbioSatys ™ , которая использует гафния alvei , чтобы стимулировать сытость с помощью белка ClpB и помогают естественным образом контролировать аппетит и похудеть. ProbioSatys ™ показали обнадеживающие результаты в естественных условиях модели в том числе, снижение потребления пищи, снижение массы тела, улучшение состава тела, увеличение липолиза и активации центральных путей сытости.
TargEDys разработала пробиотическую пищевую добавку на основе этой технологии, EnteroSatys ™ , которая содержит гафний alvei .
статус регулирования
Hafnia alvei является пищевыми бактериями. Он не указан в каталоге Novel Food Европейской Комиссии. Он включен в список Датского нотифицированными микробных культур , применяемых в пищевой промышленности.
Hafnia alvei является частью позитивного списка IDF ( Международной федерации Dairy ) культур Микробные пищевые (MFC) , демонстрирующих требования безопасности в ферментированных пищевых продуктов для использования во всем мире.
Рекомендации
внешняя ссылка
|
Единственным представителем рода Hafnia является бактерия Н. alvei.
Температура может играть видную роль в выражении фенотипа в Н. Alvei[4]. Гафнии, являясь факультативными анаэробными бактериями, производят кислоту с или без газа от метаболизма глюкозы и другого углевода или подобных углеводу составов [1,4]. Главные различающие фенотипические особенности гафнии являются отрицательная реакция с индолом, положительная с лизином декарбоксилазой. Аргинин и h3S и отрицательный. В некоторых случаях, члены рода Hafnia могут быть приняты за Е. Coli . Newer news items: Older news items: |
Гафния бактерия — Про изжогу
HAFNIA (син.: Enterobacter hafniae, Paracolon aerobacter 32011, Paracolon aerogenes) — род бактерий семейства Enterobacteriaceae, получивший название от лат. формы старого названия города Копенгагена. Впервые описан Меллером в 1954 г.
HAFNIA относят к условно патогенным микроорганизмам. Описаны вспышки острых кишечных заболеваний, случаи поражения моче-полового тракта, пневмонии, септицемии, вызванные Н. Указанные бактерии могут выделяться и от практически здоровых людей. Доказана патогенность этих бактерий для ос и пчел. Наряду с другими микроорганизмами могут вызывать порчу пива. Выделяются из воды, почвы, из гнилых продуктов.
HAFNIA — тонкая подвижная палочка (встречаются неподвижные варианты, особенно при выращивании при t° 37°), перитрих, спор и капсул не образует, факультативный аэроб. По Граму красится отрицательно.
Хорошо растет на обычных питательных средах. Для выделения в чистой культуре патол, материал засевают на среды Плоскирева, Эндо (см. Эндо среда). Как и все представители семейства кишечных бактерий, гидролизует глюкозу, восстанавливает нитраты до нитритов, не обладает цитохромоксидазой. Кроме того, HAFNIA растет на среде в присутствии цианистого калия, обладает способностью декарбоксилировать лизин и орнитин, гидролизует арабинозу, ксилозу, рамнозу, мальтозу, маннит и глицерин, не образует индола и сероводорода, не содержит аргиназы и дезаминазы фенилаланина, не гидролизует сорбита, дульцита, инозита, адонита, раффинозы. Гидролиза мочевины не вызывает, желатину не разжижает, не утилизирует D-тартрат и мукат, цитрат натрия утилизирует слабо. Лактозу и сахарозу гидролизует слабо или не гидролизует совсем. По отношению к салицину, целлобиозе и малонату натрия ведет себя различно. Реакция Фогеса—Проскауэра (см.Фогеса-Проскауэра реакция) положительная при t° 22°, при t° 37° возможны различные варианты. Реакция с метиловым красным положительная при t° 37° и отрицательная при t° 22°. Перечисленные признаки используются для идентификации бактерий H.
У HAFNIA описаны О-, Н- и (у нек-рых представителей) альфа-антигены. Серол, идентификация выделенных штаммов проводится в соответствии с антигено-диагностической схемой, включающей 39 серол. O-групп и 36 разновидностей Н-антигена (см. Бактерии, антигены бактерий).
Библиогр.: Батуро А. П. Об идентификации бактерий Hafnia, Лаборат, дело, Jsle 7, с. 430, 1972; Кагановская С. Н. и Б а т у р о А. П. Изучение штаммов Hafnia, выделенных из различных источников, Журн, микр., эпид, и иммун., № 4, с. 85, 1973; Bergey’s manual of determinative bacteriology, ed. by R. E. Buchanan a. N. E. Gibbons, Baltimore, 1975, bibliogr.; Edwards P. R. a. Ewing W. H. Identification of enterobacteriaceae, Minneapolis, 1972; О ye E. Hafnia, в кн.: Enterobacteriaceae — In-fektionen, hrsg. v. J. Sedlak u. H. Rische, S. 603, Lpz., 1968, Bibliogr.
А. П. Батуро.
Source: xn--90aw5c.xn--c1avg
Гафния — это… Что такое Гафния?
| Гафния | |||||
Hafnia alvei | |||||
| Научная классификация | |||||
|---|---|---|---|---|---|
| |||||
| Международное научное название | |||||
Hafnia Møller, 1954 | |||||
Гафния (Hafnia) — род палочковидных бескапсульных аспорогенных подвижных (перитрихи) грамотрицательных хемоорганотрофных факультативно-анаэробных бактерий семейства Enterobacteriaceae. Растут на простых питательных средах при 22—37 °C, рН 7,2—7,4. На средах для энтеробактерий (Эндо, Левина) образуют бесцветные колонии S-типа, напоминающие колонии шигелл. На среде Плоскирева растут скудно, на висмут-сульфит-агаре не растут. Могут использовать цитрат и ацетат в качестве единственного источника углерода. Ферментируют глюкозу с образованием кислоты и газа; кислоты — маннит, арабинозу, рамнозу, трегалозу, ксилозу. Не ферментируют лактозу, инозит, дульцит, желатину, мочевину, не образуют сероводород и индол, пробы на лизин- и орнитиндекарбоксилазу положительные. При 22 °C подвижны, дают положительную реакцию ФП, отрицательную — с МР, при 37 °C часто неподвижны, проба с МР положительна, с ФП отрицательна. Вид Hafnia alveitypus по различиям в специфичности О-Аг дифференцируют на 29 серогрупп, Н-Аг — на 49 сероваров.
Обитают во внешней среде (почва, вода, пищевые продукты), выделяются при кишечных инфекциях, уроинфекциях, пневмонии, сепсисе. Бактериологическое исследование проводят так же, как при выделении др. условно-патогенных энтеробактерий. Следует дифференцировать с шигеллами и сальмонеллами.
Примечания
Гафниоз(паратиф) — Пасека-онлайн. Сайт любителей пчеловодства
Гафниоз(паратиф) — инфекционная болезнь, сопровождаемая в конце зимы и весной поносом и гибелью взрослых пчел.
Возбудитель болезни — Hafnia alvei (син.— Bacterium paratyphi alvei) — маленькая, с закругленными концами полиморфная палочка, длиной 1—2 мкм и шириной 0,3—0,5 мкм; спор не образует, подвижная (перитрих), хорошо красится всеми анилиновыми красителями, грамнегативная; факультативный анаэроб, растет на всех обычных питательных средах слабощелочной реакции. На агаре уже в течение суток бактерия образует небольшие голубоватые полупрозрачные колонии, легко снимающиеся петлей. На вторые сутки колонии сливаются в общее наложение, приобретают мутный вид, становятся клейкими. Центр колонии буреет, а на ее поверхности образуется возвышение в виде валика. Бактерия дает помутнение бульона и образует в нем следы индола. На поверхности бульона иногда появляется сероватая пленка; желатину не разжижает; молоко не свертывает, на картофеле образует буровато-желтое, иногда серое слабое наложение и издает неприятный запах, напоминающий запах преющего картофеля; разлагает глюкозу, мальтозу, арабинозу, ксилозу, рамнозу, маннит, фруктозу, галактозу и глицерин; не разлагает лактозу, сахарозу, дульцит, адонит, раффинозу, декстрин.
Бактерия Hafnia alvei отличается от паратифозных бактерий тем, что она при 20° приобретает подвижность, а при 37° подвижность отсутствует; при 20° она обладает газообразованием, а при 37° — нет; при 20° расщепляет цитрат аммония, а при 37° — нет.
Бактерия гафния агглютинируется только со специфической сывороткой, к термическим и химическим воздействиям устойчивость слабая. Кипячение в воде убивает микроб в течение 1—2 мин, нагревание до 58 — 60° — в течение 30 мин.
Эпизоотологические данные. Микроб патогенен для пчел и ос; при скармливании бактерий в 5—10%-ном сахарном сиропе вызывает высокую смертность пчел, а при скармливании их в плотной массе из сахарной пудры пчелы живут почти столько же, как и в контролях.
Весной, после выставки семей из зимних помещений, паратиф распространяется от больных семей к здоровым при перестановке сотов, блуждании пчел, пользовании общей поилкой.
Течение и симптомы болезни. Инкубационный период болезни длится 3—14 дней; смертность достигает 50— 60%. Болезнь протекает обычно в конце зимы или весной, а иногда летом после похолоданий и дождей. Развитию болезни зимой способствуют недоброкачественный жидкий мед и сырые помещения. Болеют чаще рабочие пчелы.Гафниоз не имеет характерных внешних признаков. Скованность в движениях больных пчел, паралич крыльев, слабость и понос представляют собой признаки, встречающиеся и при других болезнях. Больные пчелы слабеют, ползают с раздутым брюшком у летка или на дне улья, теряют способность летать, появляются понос, ослабление дыхательных движений, иногда паралич ножек.
Заболевание в острой форме протекает с большим отходом пчел. При весеннем облете пчелы выделяют много зловонных, очень клейких или полужидких каловых масс темно-бурого цвета. Весенний облет недружный. При осмотре ульев обычно находят достаточные запасы корма, но все соты испачканы экскрементами в виде бурых клейких или жидких масс. При вскрытии больных пчел кишечник вздут и имеет грязно-белый или светлосерый цвет.
Диагноз ставят на основании выделения чистых культур и дальнейшего их бактериологического и серологического исследований. Высевают на агар Эндо содержимое из кишечника и гемолимфу больных пчел или же из мускулатуры (груди) свежепавших трупов или погибающих пчел.
Меры борьбы. Обычно улучшение условий содержания пчел ведет к прекращению болезни. При значительной гибели пчел их кормят трехкратно с недельным интервалом 50%-ным сахарным сиропом с добавлением на 1 л сиропа одного из следующих антибиотиков: левомицетина 0,2 г, стрептомицина 200 тыс. ЕД или биомицина 100 тыс. ЕД.
Похожие статьи:
Штамм бактерий hafnia alvei, обладающий способностью продуцировать термолабильный лт-энтеротоксин
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения термолабильного энтеротоксина (ЛТ-энтеротоксина) и анатоксина Hafnia alvei при производстве вакцин. Штамм депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздравсоцразвития России под номером 294. Штамм обладает высокой способностью продуцировать термолабильный ЛТ-энтеротоксин. 1 табл., 2 пр.
Предлагаемое изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения термолабильного энтеротоксина (ЛТ-энтеротоксина) и анатоксина Hafnia alvei при производстве вакцин.
Техническим результатом изобретения является штамм Hafnia alvei №294, который выделен от больного с кишечной инфекцией в 2011 году в Муниципальном учреждении здравоохранения города Ишимбай республики Башкортостан, депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздравсоцразвития России под номером 294, обладает высокой способностью продуцировать термолабильный ЛТ-энтеротоксин.
Штамм Hafnia alvei ГКПМ №294 характеризуется следующими признаками.
По биохимическим свойствам штамм относится к семейству Enterobacteriaceae рода Hafnia alvei, поскольку при тестировании на микробиологическомй тест-системе версии «Vitek 2 Sistems: 04/01» соответствовал биохимическим свойствам этого вида.
Культуральные признаки.
Растет на обычных универсальных плотных питательных средах с образованием характерных изолированных колоний желтоватого оттенка. В мясопептонном бульоне вызывает равномерное помутнение с выпадением осадка.
Изучение факторов вирулентности показало, что штамм является редким, обладающим комплексом факторов патогенности, способным вызывать острую токсическую пневмонию мышей (гибель животных в течение 3 часов), некроз кожи кролика (3,5 см в диаметре), отек лап мышей (с разницей 95 мг), петля тонкого кишечника кролика 1,2(V/L), обладает (альфатиолзависимый, энтерогемолизин), адгезивной (положительная Д-маннозочувствительная и Д-маннозорезистентная реакция с эритроцитами цыпленка), антиинтерфероновой, антилизоцимной активностями, способный в протистоцидном тесте вызывать гибель инфузорий-туфелек в течение 45 секунд.
Данный штамм рекомендуется в качестве суперпродуцента термолабильного ЛТ-энтеротоксина и как штамм, обладающий комплексом факторов патогенности. Штамм можно использовать в производстве анатоксинов и для получения антитоксической сыворотки.
Способы определения активности ЛТ-энтеротоксина.
Субплантарное введение мышам весом 15-16 г 0,05 мл центрифугата 20-часовой бульонной культуры вызывает отек лапки более 100 мг. Аксенова Е.В., 1980 г.
Интраназальное введение 0,05 мл 20-часовой бульонной культуры вызывает острую токсическую пневмонию у белых мышей-самцов весом 15-16 г (гибель в течение 4 часов). Войно-Ясенецкая Н.К., 1957 г.
Внутримышечное введение 300 млн микробных клеток 20-часовой бульонной культуры вызывает некроз кожи кролика диаметром 3 см.
В опыте петля тонкой кишки кролика при введении 80 млн м.т. 20-часовой бульонной культуры дает положительный результат (V/L=l,2).
Гретый при 56°С в течение 45 мин центрифугат 20-часовой бульонной культуры вызывает отек лапки мышей до 30 мг, не вызывая некроза кожи кролика. Гретая при 100°С 20-часовая культура не вызывает накопления жидкости в изолированной петле тонкого кишечника кролика (V/L=0,3).
Условия хранения культуры после лиофильной сушки в ампуле или выращенной при 37°С на 0,3%-ном МПА (рН 7,2-7,4), залитым стерильным вазелиновым маслом, при температуре 4°С.
Среды для размножения — бульон Хоттингера (рН 7,2), мясопептонной агар, содержащий 5% эритроцитов кролика при температуре 37°С в течение 24 часов.
Генетические особенности: HLy+, Ent+, MS+, MR+, LT+, ALA+, AKA+. Устойчив к ампициллину, ампициллину/сульбактам, цефуроксимаксетину, чувствителен к фторхинолону.
Пример 1.
0,1 мл 1 млрд суспензии суточной агаровой культуры в физиологическом растворе сеют в стерильный бульон Хотингера (5 мл рН 7,2), инкубируют в термостате при 37°С в течение 20 часов, центрифугируют при 6000 об/мин в течение 7 минут. Полученную надосадочную жидкость (центрифугат) в объеме 0,05 мл вводят субплантарно в заднюю левую лапку мышей-самцов весом 15-18 г. Через 24 часа животных умерщвляют эфиром и ампутированные по голеностопному суставу лапки взвешивают на торсионных весах, при этом центрифугат штамма Hafnia alvei №294 давал разницу между левой и правой лапками не менее 100 мг, остальные 20 штаммов, способные продуцировать ЛТ-энтеротоксин от 65 до 90 мг. Контроли — нативный стерильный бульон Хоттингера (рН 7,2) и гретый при 56°С центрифугат 20-часовой бульонной культуры 30-35 мг, соответственно.
Результаты приведены в таблице.
Пример 2.
0,1 мл 1 млрд суспензии суточной агаровой культуры сеют в бульон Хоттингера (рН 7,2), инкубируют в термостате при 37°С в течение 20 ч и 80 млн м.т. суспензию в объеме 1 мл вводят в сегмент изолированной петли тонкого кишечника кролика. Через 16 часов животных умерщвляют воздушной эмболией и рассчитывают соотношение объема экссудата к длине сегмента (V/L). При этом 20-часовая бульонная культура штамма Hafnia alvei №294 оказалась способной давать накопление жидкости в большом количестве и показатель V/L составил 1,2. У остальных 20 штаммов, способных продуцировать ЛТ-энтеротоксин, показатель V/L колебался в пределах 0,9-1,0. При введении стерильного бульона Хоттингера и гретой при 100°С 20-часовой бульонной культуры отношение объема накопленной жидкости к длине сегмента составило 0,25 и 0,3 соответственно.
| Таблица | |||
| Сравнительные показатели ЛТ-энтеропродуцирующей активности Hafnia alvei | |||
| Номер штамма | Вид | Отек лапок (мг) | Изолированная петля тонкого кишечника (V/L) |
| 6 | Hafnia alvei №294 | 100 | 1,3 |
| 8 | -\- | 74 | 0,9 |
| 7 | -\- | 76 | 0,9 |
| 3 | -\- | 80 | 1,0 |
| 9 | -\- | 85 | 1,0 |
| 1 | -\- | 75 | 0,8 |
| 3 | -\- | 70 | 0,7 |
| 4 | -\- | 78 | 0,9 |
| Контроль | 30 | 0,25-0,3 | |
| Примечание: в таблице приведены средние данные из пяти отеков. |
Штамм бактерий Hafnia alvei, обладающий способностью продуцировать термолабильный ЛТ-энтеротоксин, депонированный в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов III-IV групп патогенности ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздравсоцразвития России под номером 294.
Гафниоз
Гафниоз (инфекционный понос, паратиф) — инфекционная болезнь, возбудитель которой размножается в кишечнике и гемолимфе пчел. Кроме медоносных пчел болеют осы. Возбудитель — Hafnia alvei — подвижная палочка длиной 1—2 мкм и шириной 0,3—0,5 мкм. Относится к семейству энтеро-бактеров. Спор не образует, грамнегативная, хорошо окрашивается всеми анилиновыми красителями. Гафния растет на обычных питательных средах. При росте на агаре в первые сутки обнаруживаются мелкие голубоватые полупрозрачные колонии, сливающиеся на вторые сутки в общее наложение с мутноватым оттенком, в последующем отмечается побурение центра колонии. При росте на МПБ среда мутнеет, иногда появляются пленки на поверхности. Микроорганизм желатин не разжижает, молоко не свертывает, на картофеле образует буровато-желтое или серое наложение с неприятным запахом. Гафния разлагает мальтозу, фруктозу, глюкозу, арабинозу, ксилозу, рамнозу, глицерин, маннит, галактозу; не разлагает лактозу, сахарозу, декстрин. Возбудитель гафниоза в пустых инфицированных ульях сохраняет жизнеспособность до 270 дней, в перге — до 300 дней, в меде при комнатной температуре — до 90 дней. Кипячение в воде вызывает его гибель в течение 1—2 мин, 0,5%-ный раствор гидроксида натрия при температуре 18—20 °С убивает микроорганизмы в течение 35—85 мин, 3—5%-ный раствор фенола или формалина — в течение 1—5 мин.
Эпизоотологические данные.
Болезнь встречается на пасеках многих стран мира. Заболевание регистрируется чаще всего в конце зимы и весной. Его появлению способствуют неблагоприятные условия содержания пчелиных семей: высокая влажность в улье, недостаточное утепление гнезд, дождливая и холодная погода и т. д. Тяжело протекает заболевание при наличии в меде пади, большого количества незапечатанного меда, недостатке перги. Возбудитель передается от больных пчелиных семей к здоровым при подкормке инфицированными медом и пергой, пользовании общей поилкой, использовании инфицированных ульев и другого пчеловодного инвентаря. В годы, благоприятные для развития болезни, заболевание протекает очень тяжело, вызывая резкое ослабление и гибель большого количества пчелиных семей.
Патогенез.
Возбудитель с кормом и водой попадает в пищеварительную систему пчел и при пониженной резистентное™ организма быстро размножается, вызывая интоксикацию. В результате нарушаются процессы расщепления и всасывания питательных веществ, усиливается перистальтика кишечника. При проникновении возбудителя в гемолимфу и его интенсивном размножении отмечают септицемию, которая приводит к гибели пчел.
Клинические признаки.
Инкубационный период длится от 3 до 14 дней. При заболевании в конце зимы отмечают возбуждение (шум) пчелиных семей, распад зимнего клуба, много пчел выходят через летковый заградитель. Ползающие пчелы выглядят слабыми, скованными в движениях, брюшко у них сильно увеличено. Часто наблюдается диарея, фекалии жидкие, клейкие, коричневого цвета, с неприятным запахом. Пчелы теряют способность к полету и погибают. Некоторые семьи ко времени выставки из зимовника вследствие гибели большого количества пчел резко ослаблены. Весной больные семьи вяло совершают очистительный облет. Передняя стенка улья и соты испачканы экскрементами желто-бурого цвета, неприятного запаха, на дне улья множество мертвых пчел. Большинство семей ослабевают и погибают. При исследовании кишечника больных пчел обнаруживают содержимое грязно-белого или светло-серого цвета. В начале лета больные семьи отстают в развитии, плохо отстраивают соты и не используют медосбор.
Диагноз.
Ставят его на основании эпизоотологических данных, результатов лабораторных исследований. Для этого выделяют чистую культуру возбудителя из мышц или гемолимфы пчел. При бактериологических исследованиях следует иметь в виду, что Hafnia alvei при 20 °С приобретает подвижность, расщепляет нитрат аммония, а при 37 °С она теряет эти свойства. Наряду с этим при диагностике гафниоза ставят биопробу на пчелах. Дифференциальный диагноз. Гафниоз необходимо отличать от колибактериоза, сальмонеллеза, септицемии, Нозематоза и падевого токсикоза.
Профилактика.
На пасеках следует строго соблюдать ветеринарно-санитарные правила содержания и кормления пчелиных семей.
Меры борьбы. При установлении заболевания пасеку объявляют неблагополучной и проводят мероприятия в соответствии с Инструкцией по предупреждению и ликвидации заразных болезней пчел. Ульи, вставные доски, потолочины, рамки тщательно очищают и орошают (из расчета 1 л на 1 м2 поверхности) одним из следующих растворов: 3%-ным горячим (70 °С) раствором гидроксида натрия при экспозиции 2 ч; теплым (30 °С) щелочным раствором формальдегида, содержащим 3 % формальдегида и 3 % гидроксида натрия, при экспозиции Зч. После дезинфекции их промывают водой и высушивают. Загрязненные экскрементами соты перетапливают на воск. Пустые соты, пригодные для дальнейшего использования, опрыскивают с обеих сторон до заполнения ячеек 1%-ным раствором од-нохлористого Йода при экспозиции 3 ч или 2%-ным раствором формальдегида при экспозиции 4 ч. Дезинфицирующий раствор удаляют встряхиванием рамки, после чего ее промывают водой и просушивают. Халаты, полотенца, лицевые сетки кипятят в воде в течение 10 мин. Воск от пчелиных семей неблагополучной пасеки направляют на технические цели или обеззараживают в автоклаве при температуре 127 °С в течение 2 ч.
Мед, полученный от больных семей, хранят в закрытой таре и используют только для пищевых целей. Использовать такой мед для подкормки пчелиных семей запрещено.
Лечение.
Больным семьям дают лечебный сироп с левомицетином и неомицином трехкратно с интервалом в 3 дня. В 1 л свежеприготовленного сахарного сиропа (1 часть сахара и 1 часть воды) добавляют 200 тыс. ME неомицина и 0,2 г левомицетина. Каждую дозу антибиотиков растворяют в 100 мл кипяченой, охлажденной до 35 °С воде, тщательно смешивают с сиропом и дают по 0,5 л на одну пчелиную семью.